一种醋豆谷蛋白源降压肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种醋豆谷蛋白源降压肽及其应用。该多肽的氨基酸序列如序列表中序列1所示。该多肽可用于制备血管紧张素转化酶抑制剂，可用于制备降压药物。本发明专利技术的多肽对血管紧张素转化酶具有明显的抑制作用，具有显著的降压效果。

A Vinegar Soybean Glutenin Source Antihypertensive Peptide and Its Application

The invention discloses a vinegar soybean glutenin source antihypertensive peptide and its application. The amino acid sequence of the polypeptide is shown in sequence 1 of the sequence table. The polypeptide can be used to prepare angiotensin converting enzyme inhibitors and to prepare antihypertensive drugs. The polypeptide of the invention has obvious inhibitory effect on angiotensin converting enzyme and remarkable antihypertensive effect.

【技术实现步骤摘要】
一种醋豆谷蛋白源降压肽及其应用
本专利技术涉及一种醋豆谷蛋白源降压肽及其应用
技术介绍
黑豆亦称乌豆，是豆科植物大豆(Glycinemax(L.)Merr.)的干燥成熟黑色种子，其味甘性平、归脾，肾经，具有益精明目，养血祛风，利水，解毒之功效，可用于治疗阴虚烦渴，头晕目昏，水肿尿少等。醋豆是以整粒黑豆为原料，经食醋浸渍而成。它不仅集合了大豆和食醋的营养和保健作用，且经过浸制过程，大豆中原有的一些有害物质如胰蛋白酶阻碍因子、凝血素等失活，使得醋豆的功效更加突出。研究表明，醋豆制品可降低受试者的血压。近年来，高血压患病主体越来越年轻化，患病率呈逐年增加的趋势。目前我国成人高血压患病率已达到25％-30％，成为世界上高血压患病大国。血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)如卡托普利、贝那普利等为临床常用降压药物。研究表明，在1317例高血压合并糖尿病患者中，降压药物ACEI的使用率为37.6％，使用率较高。然而，它们却存在着如咳嗽、味觉功能紊乱、皮疹及白细胞减少等副作用。天然来源的生物肽安全可靠，且具有作用多途径、多靶点等特点，因而降压肽日益受到人们的青睐。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种多肽，所述多肽的氨基酸序列如序列表中序列1所示。本专利技术的多肽对血管紧张素转化酶具有抑制作用。本专利技术的多肽具有降压作用。本专利技术的多肽可用于制备血管紧张素转化酶抑制剂。本专利技术的多肽可用于制备降压药物。本专利技术的另一个目的是提供一种血管紧张素转化酶抑制剂，所述血管紧张素转化酶抑制剂的活性成分为所述的多肽。本专利技术的又一个目的是提供一种降压药物，所述降压药物的活性成分为所述的多肽。本专利技术的多肽对血管紧张素转化酶具有明显的抑制作用，具有显著的降压效果。附图说明图1显示了≤3KDa组分阴离子交换色谱图。图2显示了组分L1-4经反相-高效液相(RP-HPLC)分离色谱图。图3显示了各样品体外ACEI活性测定高效液相色谱图，其中，a为空白对照，b为卡托普利阳性对照，c为四肽FGSF。图4显示了四肽FGSF单次给药SHR大鼠血压变化图。具体实施方式本专利技术的专利技术人通过如下研究发现了可能具有血管紧张素转化酶抑制(ACEI)活性的四肽FGSF：将黑豆药材(产地辽宁)置于广口瓶内，加入3倍体积陈醋(m：v)，封口后，于4℃冰箱浸泡14d后取出。去除种皮，去离子水冲洗数次，真空干燥，即得醋豆。醋豆经粉碎，过40目筛，加入石油醚低温振荡2h，离心弃上清，重复一次，真空干燥。采用顺序抽提法依次使用双蒸水、0.5MNaCl、70％乙醇(5％β-巯基乙醇，0.5％NaAc)、0.0125M硼酸钠缓冲液(1％SDS，2％β-巯基乙醇)提取其清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白及谷蛋白。谷蛋白提取液于4℃低温透析24h，期间换水数次，透析液冷冻干燥获得谷蛋白。准确称取谷蛋白(作为底物，浓度为2％(w/v))，碱性蛋白酶与底物比为1∶10(w/w)，将其溶于碱性蛋白酶溶液(50mMTris缓冲液，pH＝8.0)中，37℃恒温水浴4h，反应结束后，95℃煮沸5min终止反应，冰浴10min，在8000rpm，4℃离心10min，取上清液，经G4漏斗过滤。经过G4漏斗的收集液，置于卷式膜小型实验机中进行超滤，其中卷式膜的截留分子量为3KDa，超滤压力为0.1MPa，温度25℃。收集≤3KDa组分。超滤所得的≤3KDa组分冷冻干燥，然后通过DEAESepharoseFastFlow(2×15cm)阴离子交换色谱。色谱条件：0、0.05、0.1和0.2MNaCl-Tris-HCl缓冲液(pH＝8.0)为洗脱液，流速1.8mL/min，使用HD-4核酸检测仪在220nm下检测，根据洗脱峰收集各组分。收集到4个组分，分别标记为组分L1-L4(如图l所示)。使用高效液相色谱法对组分L1-L4进行体外ACEI活性的测定。检测体外ACEI活性的原理为人工合成的三肽底物马尿酰-组氨酰-亮氨酸(Hip-His-Leu，HHL，美国Sigma公司)，在ACE酶的作用下生成马尿酸，通过228nm检测马尿酸的生成量来评价ACEI活性。当ACE抑制剂与ACE作用后，ACE活性受到抑制，与HHL作用生成的马尿酸量减少，因此测定加入抑制剂前后马尿酸的生成量即可反映抑制剂对ACE的抑制程度。反应体系：总反应液为50μL，其中样品溶液10μL、ACE溶液20μL(2mU)和HHL溶液20μL(2mM)。样品与ACE溶液充分混合后，于37℃恒温浴10min，加入HHL溶液充分混匀继续37℃保温80min，加入100μL乙腈终止反应。反应液经C18色谱柱(250×4.6mm，5um，TIANHE)进行分析测定，色谱条件：柱温30℃，流速1mL/min，流动相：乙腈∶水(0.05％三氟乙酸)＝25∶75等度洗脱，进样体积10μL，检测波长228nm，根据HA的峰面积计算ACE抑制率，公式如下：ACE抑制率(％)＝(b-a)/b×100％式中，a为样品反应液HA的峰面积，b为空白对照液HA的峰面积在终浓度为0.01mg/mL下，4个组分L1-L4的ACEI活性分别为68.81±1.51％，27.50±0.73％，30.57±0.99％，14.50±0.32％。组分L1具有较高的体外ACEI活性(P＜0.05)。组分L1经RP-HPLC分离。使用OPD-506D(6.0mm×150mm)柱。色谱条件：流速1mL/min，检测波长220nm；流动相A：超纯水(含0.1％三氟乙酸，v/v)，流动相B：乙腈(含0.1％三氟乙酸，v/v)；洗脱条件：0-20min，5％-25％A；20-25min，25％-5％A。根据洗脱峰收集各组分，冷冻干燥。RP-HPLC分离获得7个组分分别标记为L1-1至L1-7。在终浓度为0.01mg/mL下，L1-4具有较高的ACEI活性(83.41±0.91％)。组分L1-4通过基于LTQOrbitrapVelos的LC-ESI-MS/MS进行多肽序列分析，通过搜索Uniprot数据库鉴定出5条多肽序列，分子量范围在620-1063.38之间。对已鉴定的5个多肽进行结构分析，采用Best的方法(能量收敛值为20.0kcal/mol，最大构象数目为255个)得到多肽的多构象，进而分别与ACE药效团模型进行匹配。ACE药效团模型的特征主要包括一个氢键受体，一个氢键给体，一个疏水基团，一个负电离子化基团。已鉴定的5个多肽分别与ACE药效团模型进行匹配，结果显示IILLSF、SIKFGSF、RSPEDSIIF和AGTGLPIDRF与药效团模型完全匹配，适合值(Fitvalue)分别为0.96，0.96，0.95和0.92。将匹配成功的IILLSF、SIKFGSF、RSPEDSIIF和AGTGLPIDRF进一步与4BZR、1O86、4CA5三种ACE受体蛋白进行分子对接筛选。4BZR：配体K-26，-CDOCKER_ENERGY＝156.907；活性口袋半径1O86：配体赖诺普利(lisinopril)，-CDOCKER_ENERGY＝106.292；活性口袋半径4CA5：配体：膦三肽(phosphinictripeptide)FI，-CDOCKER_ENERGY＝102.324；活性口袋半径：其中，IILL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。

【技术特征摘要】
2017.09.18 CN 20171083848891.一种多肽，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽对血管紧张素转化酶具有抑制作用。3.根据权利要求1所述的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：王灵芝，乔延江，张月圆，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：北京,11