辛伐他汀的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种应用方法，尤其是一种辛伐他汀的应用，属于生物医药的技术领域。利用辛伐他汀可以促进牙髓干细胞的增殖、细胞周期的进程和细胞的凋亡，同时能够抑制炎症反应以及血管内皮因子的分泌。进一步地，该应用能够有效地治疗牙髓炎，并且治愈率高。

The application of Simvastatin

The invention relates to an application method, in particular to the application of simvastatin, belonging to the technical field of biomedicine. The use of simvastatin can promote the proliferation of dental pulp stem cells, the process of cell cycle and the apoptosis of the cells, and inhibit the inflammatory reaction and the secretion of vascular endothelial factors. Further, the application can effectively treat pulpitis, and the cure rate is high.

【技术实现步骤摘要】
辛伐他汀的应用
本专利技术涉及一种应用方法，尤其是一种辛伐他汀的应用，属于生物医药的

技术介绍
牙髓炎是指发生于牙髓组织的炎性病变，主要特征是对外界刺激，尤其是冷热的敏感性增强。牙髓是主要包含神经血管的疏松结缔组织，位于牙齿内部的牙髓腔内。深龋、楔状缺损等牙体硬组织疾病如不能得到及时有效地控制和治疗，均可引发牙髓炎，成为口腔中最为多发和常见的疾病之一。牙髓由结缔组织、淋巴细胞、血管、神经纤维和牙髓干细胞组成，其主要功能为产生牙质，并维持牙质的生理活性。在牙髓中，牙髓干细胞具有很强的产生成牙质细胞的能力，能够在牙齿受到外界损伤时产生新的牙质。尽管牙髓干细胞的数量不到牙髓细胞总数的1％，但是在牙髓炎过程中，它们在牙质再生的过程中起着至关重要的作用。因此，牙髓干细胞在再生医学方面具有广阔的应用前景。目前，口服抗生素是治疗牙髓炎的最常用手段，然而在很多情况下效果并不理想。今年来，研究者发现降脂药——辛伐他汀能够在体外和体内诱导牙髓干细胞分化，从而促进牙髓再生。然而，在牙髓炎中，关于辛伐他汀对牙髓干细胞的影响以及它作为治疗牙髓炎的药物，迄今为止尚无报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种辛伐他汀的应用，其能有效治疗牙髓炎，安全可靠。按照本专利技术提供的技术方案，一种辛伐他汀的应用，利用辛伐他汀来改善炎症状态下牙髓干细胞的状态，以用来治疗牙髓炎。当辛伐他汀的浓度为0～10μg/mL时，能够加快牙髓干细胞的增殖。炎症状态下，辛伐他汀能够促进牙髓干细胞的细胞周期进程。炎症状态下，辛伐他汀能够促进牙髓干细胞的凋亡。炎症状态下，辛伐他汀能够抑制牙髓干细胞的炎症反应。炎症状态下，辛伐他汀能够促进牙髓干细胞中血管内皮生长因子的表达与分泌。本专利技术的优点：通过辛伐他汀用来调节牙髓干细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡、炎症反应和血管内皮因子的表达分泌，即采用辛伐他汀来治疗牙髓炎，安全有效，为牙髓炎的治疗提供了一种新的方法，治愈效率高。附图说明图1为本专利技术中采用形态学(a)和间充质细胞标记基因的表达(b)对分离的细胞进行鉴定。图2为辛伐他汀对牙髓干细胞活性的影响。(a)不同浓度的辛伐他汀处理牙髓干细胞，“**”，P<0.01，表示辛伐他汀浓度为8μg/mL时，细胞的活力极显著高于浓度为8μg/mL时的细胞活力；(b)LPS与辛伐他汀共同作用于牙髓干细胞；“**”，P<0.01，表示LPS+辛伐他汀组的细胞活力极显著高于LPS组。图3为辛伐他汀对牙髓干细胞周期的影响；“**”，P<0.01，表示LPS+辛伐他汀组与LPS组相比，差异极其显著。图4为辛伐他汀对牙髓干细胞凋亡的影响。“**”，P<0.01。图5为辛伐他汀对牙髓干细胞中炎症相关基因的表达的影响。“**”，P<0.01。图6为辛伐他汀对牙髓干细胞中血管内皮生长因子分泌与表达的影响。“**”，P<0.01。具体实施方式下面结合具体附图和实施例对本专利技术作进一步说明。为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作进一步的详细阐述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件进行。本专利技术实施例中使用的牙髓干细胞来自于5位牙髓炎患者的第三磨牙，并通过常规的口腔手术获得。实施例1、牙髓干细胞的分离牙髓炎患者的第三磨牙被取下后，浸泡于α-MEM培养基中，所述培养基中添加3mg/mL的I型胶原酶和4mg/mL的分散酶，37℃培养1h。经过酶消化，牙髓分散成单个细胞，细胞悬液接种于25cm2的细胞培养瓶中。细胞培养所用的培养基为IMDM培养基，其中，添加10％的胎牛血清，2mM的L-谷氨酰胺，100U/mL的链霉素和100U/mL的青霉素。经过大约7天的培养，细胞克隆开始形成，挑取克隆至新的培养瓶中继续培养，当细胞的汇合度达到70％时，细胞根据需要用于其它的实验。牙髓干细胞属于间充质干细胞的一种，为了确定培养的细胞为牙髓干细胞，从细胞形态和分子标记两方面对培养的细胞进行鉴定。由图1(a)所示，细胞呈现典型的间充质干细胞形态。进一步地，通过鉴定间充质干细胞特有的标记基因是否表达，来确定培养的细胞的类型。由图1(b)所示，间充质干细胞特有的标记基因CD73、CD90和CD166在细胞中高水平表达。在检测过程中，分别使用如下引物进行扩增，具体为：CD73-F:5’-AGCAGCATTCCTGAAGATCCA-3’CD73-R:5’-TTCCAGAACATTTCATCCGTGT-3’CD90-F:5’-GATCCTAGCCTCACCCGTCA-3’CD90-R:5’-TGTTTTTTGCAGCCTTGGCT-3’CD166-F:5’-GATACCATTATCATACCTTGCCG-3’CD166-R:5’-GATACCATTATCATACCTTGCCG-3’这些数据表明，培养的细胞为牙髓干细胞。实施例2、辛伐他汀对牙髓干细胞活性的影响将牙髓干细胞接种于96孔细胞板，向培养基中加入不同浓度的辛伐他汀，使得其终浓度分别为0μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL。细胞的活性采用MTT法测定，按照如下过程完成：细胞经辛伐他汀或LPS刺激后，向每孔细胞中加入10μL的MTT溶液(5mg/mL)，37℃孵育3h。去除培养基，向每个细胞孔中加入200μL甲瓒溶液，待结晶全部溶解后，在570nm出测定溶液的吸光度，吸光度与细胞的数量成正比。细胞在药物处理0天时的细胞数量作为增殖的起点，即为100％。细胞连续培养10天，分别在第2天、4天、6天、8天、10天时测定吸光度，该天的细胞数量以当天的吸光度/第0天时的吸光度x100％表示。实验结束后，绘制不同药物浓度下牙髓干细胞的增殖曲线。由图2(a)可以看出，当辛伐他汀的浓度较低时(2μg/mL，4μg/mL，8μg/mL，10μg/mL)，药物能够加快牙髓干细胞的增殖。其中，当辛伐他汀的浓度为8μg/mL时，细胞的增殖速度最快。当药物浓度较大时(15μg/mL和20μg/mL)，细胞的增殖速度小于对照组。由此可见，一定浓度的辛伐他汀可以刺激牙髓干细胞的增殖，而且当浓度为8μg/mL时，增殖效果最明显。LPS是一种牙髓炎的诱导剂，为了观察辛伐他汀在炎症状态下对牙髓干细胞的影响，用60μg/mLLPS诱导细胞的炎症状态，并用8μg/mL的辛伐他汀进行干预。实验中将细胞随机分为4组，分别为：对照组、LPS组、辛伐他汀+LPS组、辛伐他汀组。同样采用MTT法测定细胞的增殖曲线。由图2(b)可知，与对照组相比，LPS组的细胞生长明显较慢，而辛伐他汀+LPS组细胞的增殖速度有所提升。由此可知，无论是正常状态的牙髓干细胞，还是炎症状态下的细胞，辛伐他汀都具有增强细胞活性的能力。实施例3、辛伐他汀对牙髓干细胞的细胞周期的影响为了测试辛伐他汀对细胞周期的影响，将细胞随机分为4组，分别为：对照组、LPS组、辛伐他汀+LPS组、辛伐他汀组。用冰上预冷的PBS溶液清洗牙髓干细胞，向细胞中加入0.5mL70％的预冷乙醇，并在4℃孵育30min。随后用100mg/mL的RNase在37℃处理本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种辛伐他汀的应用，其特征是：利用辛伐他汀来改善炎症状态下牙髓干细胞的状态，以用来治疗牙髓炎。

【技术特征摘要】
1.一种辛伐他汀的应用，其特征是：利用辛伐他汀来改善炎症状态下牙髓干细胞的状态，以用来治疗牙髓炎。2.根据权利要求1所述的辛伐他汀的应用，其特征是：当辛伐他汀的浓度为0～10μg/mL时，能够加快牙髓干细胞的增殖。3.根据权利要求1所述的辛伐他汀的应用，其特征在于：炎症状态下，辛伐他汀能够促进牙髓干细胞的细胞周期进程。...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛黛，高宏，
申请(专利权)人：无锡市儿童医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32