一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法，包括以下步骤：(1)标准品溶液的配制；(2)供试品溶液的配制：将烘干至恒重的铁皮石斛样品研磨成粉末，加入到乙醇水溶液中进行提取，得到铁皮石斛提取液，将铁皮石斛提取液中的溶剂除干，剩余物复溶于色谱级甲醇中，之后充分震荡混合，再经过过滤处理，得到供试品溶液；(3)标准品溶液与供试品溶液的测定。与现有检测方法相比，本发明专利技术工艺简单、准确性高、重复性好，为铁皮石斛中槲皮素的检测提供了快速、准确的方法，有助于提高铁皮石斛槲皮素利用效率，对铁皮石斛实际生产加工有一定的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法
本专利技术涉及物质检测领域，具体地说涉及一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法。
技术介绍
铁皮石斛，多年生草本植物，是我国传统中药材中最为珍惜名贵的一种。铁皮石斛有很高的药用价值，具有抗衰老、抗肿瘤、降低血糖和提高免疫等作用。铁皮石斛的化学成分主要含有多糖、生物碱、菲类、联苄、类黄酮等。铁皮石斛中的黄酮类物质有一定的药效，具有研究的价值。其中槲皮素(Quercetin)，又名栎精，化学名3,3’，4’，5，7-五羟基黄酮，是铁皮石斛中含有的一种天然的黄酮类化合物。槲皮素具有一定的药用价值，有抗炎、抗过敏、抗氧化、降血压、抗肿瘤、止咳祛痰等功效。当前对铁皮石斛中黄酮类物质少有研究，尤其是缺少检测铁皮石斛中槲皮素含量的方法，不利于铁皮石斛槲皮素的利用，槲皮素的化学结构式如下式1所示：
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种回收率高，准确性好的高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法，包括以下步骤：(1)标准品溶液的配制称取槲皮素标准品，溶于色谱级甲醇中，充分混匀，制成两组以上不同浓度的标准品溶液；(2)供试品溶液的配制将烘干至恒重的铁皮石斛样品研磨成粉末，加入到乙醇水溶液中进行提取，得到铁皮石斛提取液，将铁皮石斛提取液中的溶剂除干，剩余物复溶于色谱级甲醇中，之后充分震荡混合，再经过过滤处理，得到供试品溶液；(3)标准品溶液与供试品溶液的测定采用HPLC-DAD检测方法对标准品溶液和供试品溶液分别进行检测。进一步地，步骤(2)中，研磨成粉末的铁皮石斛样品与乙醇水溶液的料液比为1g～2g:25mL～26mL，乙醇水溶液的体积浓度为40％～60％。在实施本专利技术的过程中，专利技术人发现，采用以上配比，提取效果较好，从而保证槲皮素检测的准确性。进一步地，步骤(2)中，提取的具体过程为：在40℃～60℃条件下超声处理15min～60min，然后离心处理，取上清液，即为铁皮石斛提取液。在实施本专利技术的过程中，专利技术人发现，采用以上提取工艺，能够让铁皮石斛中的槲皮素充分析出，从而保证对槲皮素检测的准确性。进一步地，步骤(2)中，复溶时每3ml铁皮石斛提取液使用200μL～500μL色谱级甲醇。进一步地，步骤(2)中，过滤处理采用微孔滤膜过滤，滤膜的孔径为0.22μm～0.45μm。进一步地，步骤(2)中，将铁皮石斛提取液中的溶剂除干的方式为用氮吹仪吹干。进一步地，铁皮石斛中的槲皮素在19.3min～19.4min，360nm～384nm处有最大吸收峰。进一步地，步骤(3)中，HPLC-DAD应用的色谱条件为：色谱柱参数C18Column250×4.6mm5um，柱温20℃～35℃，进样量10μL～25μL，流速1.0mL/min，流动相为乙腈和甲酸水溶液，梯度洗脱条件为在0min～60min，有机相在流动相里的比例从5％～20％升至80％～95％。进一步地，甲酸水溶液的体积浓度为0.01％～0.1％。本专利技术的有益效果体现在：1.与现有检测方法相比，本专利技术工艺简单、准确性高、重复性好，为铁皮石斛中槲皮素的检测提供了快速、准确的方法，有助于提高铁皮石斛槲皮素利用效率，对铁皮石斛实际生产加工有一定的意义。2.本专利技术的提取过程采用超声能够破碎细胞，简化了操作工艺，操作方便、高效，并降低了工艺成本；并使提取更充分，重复提取可以使铁皮石斛中的槲皮素充分溶解于乙醇中，由于槲皮素含量较低，浓缩复溶可以提高溶液中槲皮素的浓度，便于检测。3.本专利技术确定了铁皮石斛槲皮素在19.3min～19.4min，360nm～384nm处有最大吸收峰。附图说明图1是实施例1得到的槲皮素的液相色谱图。图2是实施例1得到的槲皮素标品标准曲线图。图3是实施例2得到的槲皮素的液相色谱图。图4是实施例3得到的槲皮素的液相色谱图。图5是实施例5得到的槲皮素的液相色谱图。图6是实施例6得到的槲皮素的液相色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步描述。以下实施例所使用的各种原料，如未作特别说明，均为本领域公知的市售产品。为使本领域技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，在下面的详细描述中，只通过说明的方式描述了本专利技术的某些示范性实施例。毋庸置疑，本领域的普通技术人员可以认识到，在不偏离本专利技术的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。实施例1一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法，包括以下步骤：(1)标准品溶液的配制分别精密称取槲皮素标准品，溶于色谱级甲醇中，涡旋仪震荡，充分混匀，制成浓度分别为500μg/mL、25μg/mL、12.50μg/mL、6.25μg/mL、3.13μg/mL、1.56μg/mL、0.78μg/mL的标准品溶液；(2)供试品溶液的配制精密称取0.27g烘干至恒重的铁皮石斛样品，通过球磨仪充分研磨成粉末，按照料液比1g:26mL的比例加入到体积浓度为51％的乙醇水溶液中进行提取，提取的具体过程为：在60℃条件下超声处理30min，然后5000rpm的转速下离心处理10min，取上清液，即为铁皮石斛提取液；取3mL铁皮石斛提取液，用氮吹仪将铁皮石斛提取液中的溶剂吹干，剩余物再复溶于300μL色谱级甲醇中，然后摇床放置12小时，最后进行过滤处理，过滤处理采用微孔滤膜过滤，滤膜的孔径为0.22μm，所得的滤液即为供试品溶液；(3)标准品溶液与供试品溶液的测定采用HPLC-DAD检测方法对标准品溶液和供试品溶液分别进行检测，应用的色谱条件为：色谱柱参数C18Column250×4.6mm5um，柱温25℃，进样量10μL，流速1.0mL/min，流动相为乙腈和体积浓度为0.02％的甲酸水溶液，梯度洗脱条件为在0min～40min，有机相在流动相里的比例从5％升至80％。(4)结果解析首先从对槲皮素25μg/mL标准品进行HPLC-DAD的检测结果中，得到槲皮素的液相色谱图，参见图1。经过分析得知，槲皮素在19.3min～19.4min，360nm～384nm处有最大吸收峰。通过对标准品溶液的测定，绘制出标准曲线，参见图2，得到槲皮素含量计算公式如下：y＝0.6324x-0.3724，x为浓度(μg/mL)，y为峰面积，R2＝0.9997。根据所作出的标准曲线计算供试品溶液的浓度为0.703±2μg/mL。实施例2一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法，包括以下步骤：(1)标准品溶液的配制分别精密称取槲皮素标准品，溶于色谱级甲醇中，涡旋仪震荡，充分混匀，制成浓度分别为500μg/mL、25μg/mL、12.50μg/mL、6.25μg/mL、3.13μg/mL、1.56μg/mL、0.78μg/mL的标准品溶液；(2)供试品溶液的配制精密称取0.27g烘干至恒重的铁皮石斛样品，通过球磨仪充分研磨成粉末，按照料液比2g:25mL的比例加入到体积浓度为60％的乙醇水溶液中进行提取，提取的具体过程为：在40℃条件下超声处理60min，然后4000rpm的转速下离心处理15min，取上清液，即为铁皮石斛提取液；取3mL铁皮石斛提取液，用氮吹仪将铁皮石斛提取液中的溶剂吹干，剩余物再复溶于200μL色谱级甲醇中，然后摇床放置12小时，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)标准品溶液的配制称取槲皮素标准品，溶于色谱级甲醇中，充分混匀，制成两组以上不同浓度的标准品溶液；(2)供试品溶液的配制将烘干至恒重的铁皮石斛样品研磨成粉末，加入到乙醇水溶液中进行提取，得到铁皮石斛提取液，将铁皮石斛提取液中的溶剂除干，剩余物复溶于色谱级甲醇中，之后充分震荡混合，再经过过滤处理，得到供试品溶液；(3)标准品溶液与供试品溶液的测定采用HPLC‑DAD检测方法对标准品溶液和供试品溶液分别进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)标准品溶液的配制称取槲皮素标准品，溶于色谱级甲醇中，充分混匀，制成两组以上不同浓度的标准品溶液；(2)供试品溶液的配制将烘干至恒重的铁皮石斛样品研磨成粉末，加入到乙醇水溶液中进行提取，得到铁皮石斛提取液，将铁皮石斛提取液中的溶剂除干，剩余物复溶于色谱级甲醇中，之后充分震荡混合，再经过过滤处理，得到供试品溶液；(3)标准品溶液与供试品溶液的测定采用HPLC-DAD检测方法对标准品溶液和供试品溶液分别进行检测。2.如权利要求1所述的高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法，其特征在于，步骤(2)中，研磨成粉末的铁皮石斛样品与乙醇水溶液的料液比为1g～2g:25mL～26mL，乙醇水溶液的体积浓度为40％～60％。3.如权利要求1或2所述的高效检测铁皮石斛中槲皮素的方法，其特征在于，步骤(2)中，提取的具体过程为：在40℃～60℃条件下超声处理15min～60min，然后离心处理，取上清液，即为铁皮石斛提取液。4.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：金青，朱英鹏，焦春燕，郑思炎，蔡永萍，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34