一种从黑豆皮中提取表儿茶素的方法技术

本发明专利技术提供了一种从黑豆皮中提取表儿茶素的方法，是将黑豆皮浸提后过滤，将滤液减压浓缩，得浓缩水溶液。将浓缩水溶液上Sepabeads SP700树脂柱，依次用纯水和60％的乙醇溶液进行洗脱，收集体积浓度为60％乙醇溶液。将浓缩水溶液上Sephadex LH‑20柱，依次用体积浓度为25％、50％、60％、70％、80％、90％的甲醇溶液进行洗脱，收集体积浓度为25％的全部洗脱液作为洗脱液Ⅰ，收集体积浓度为50％甲醇溶液所对应的在280nm处有吸收而在360nm处无吸收的洗脱液作为洗脱液Ⅱ，合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行减压浓缩，所得到的表儿茶素水溶液干燥，得黑豆皮表儿茶素。用高效液相检测黑豆皮表儿茶素纯度达95％。

Method for extracting epicatechin from black bean peel

The invention provides a method for extracting epicatechin from black bean peel, which is filtered and leached by black bean peel and concentrated and concentrated water solution is obtained. The concentrated aqueous solution of Sepabeads SP700 resin column, followed by water and 60% ethanol solution were eluted, collected volume concentration of 60% ethanol solution. The concentrated aqueous solution of Sephadex LH 20 column, followed by methanol solution was 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% of the volume concentration of elution volume concentration of 25% of all collected eluent as eluent of volume concentration corresponding to collected 50% methanol solution at 280nm absorption and at 360nm without eluent absorption as the eluent and the elution liquid I II, II of condensing washing with epicatechin aqueous solution obtained by drying, black soybean epicatechin. Phase detection of black bean peel epicatechin 95% purity by high performance liquid.

【技术实现步骤摘要】
一种从黑豆皮中提取表儿茶素的方法
本专利技术涉及植物有效成分提取，具体属于一种从黑豆皮中制备高纯度表儿茶素的方法。
技术介绍
表儿茶素(-epicatechin)是原花青素(proanthocyanidin)的一种，为3-羟基黄烷醇衍生物，具有C6-C3-C6结构的多元酚类物质，其基本结构是α-苯基苯并吡喃，即在两个苯环之间以一个三碳链相连，其中一个碳原子与A环上的氧原子连接成吡喃环。现已证实，儿茶素类物质具有多种对健康有益的功效，包括清除自由基、抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、防紫外线、预防心血管疾病等。因此，儿茶素类被视为开发功能食品和植物性医药的理想天然产物。[Peng,Han,etal.JournalofFunctionalFoods(2017),32,296-312.]黑豆亦称马豆、冬豆子、稆豆，大多数黑豆籽粒较小，俗称小黑豆。黑豆的籽粒多扁椭圆、扁圆、肾状、长椭圆形，圆粒较少。我国的黑豆种质资源异常丰富，据统计，全国共搜集保存大豆22000多份，其中黑豆栽培品种就有2800余种，占全部大豆种质资源的13.2％，广泛分布在个27个省、市，尤以山西、河北、陕西栽培较多，其中以北京春大豆、黄淮夏大豆最为常见。目前为止，黑豆皮的具体化学成分报道，主要集中在花青素方面，而对于原花青素的研究较少。[JinHwanLee,etal.FoodChemistry.2009,112(1),226-231.]。对于以黑豆皮为原料制备表儿茶素的方法没有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供一种从黑豆皮中快速、高效提取表儿茶素的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种从黑豆皮中提取表儿茶素的方法，包括以下步骤：取黑豆皮，粉碎，过40-60目筛；按1g/10-50mL比例放入50-70％丙酮水溶液中，调节pH2.0，浸提3-5h，将提取液用滤纸过滤，得滤液；将滤液减压浓缩，得粗提物；粗提物湿法上柱，上样量40-60mg粗提物/g树脂；首先用双蒸水洗脱至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且pH值稳定在6-8，再用洗脱剂60％乙醇水溶液洗脱至流出液无色且pH在5-7，洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥得粗提样；粗提样湿法上SephadexLH-20柱，依次用25％、50％、60％、70％、80％、90％甲醇水溶液进行洗脱，用量均为三倍柱体积，流速均为50d/min；收集25％甲醇水溶液洗脱液作为洗脱液Ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脱液(在280nm处有吸收而在360nm处无吸收的洗脱液部分)作为洗脱液Ⅱ；合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行浓缩，回收甲醇，得黑豆皮表儿茶素。所述黑豆皮和丙酮水溶液的比例优选为1g/10-40mL。所述的pH调节剂优选为醋酸。所述的提取时间优选为3h。本专利技术从黑豆皮中提取表儿茶素的方法，具有如下优点：1.本专利技术以黑豆皮为原料分离制备原儿茶素，不仅可以增加黑豆产业的附加值，带来经济效益，还可以使资源得到充分利用。2.本专利技术采用SephadexLH-20为柱填料分离制备表儿茶素，效率高，并能保持其原有结构和活性，所得到的表儿茶素纯度高，溶剂可重复利用，避免污染和浪费。具体实施方式实施例1从黑豆皮中提取表儿茶素：将10g山西省乌皮青仁黑豆皮，粉碎，过60目筛。按1g/10mL比例放入70％丙酮中，用醋酸调节pH2.0,浸提3h，将提取液用滤纸过滤，将滤渣重复上述操作，浸提2次(即以滤渣代表黑豆皮进行如上操作)，合并3次所得滤液，将滤液减压浓缩，得粗提物。上样量50mg粗提物/g树脂，柱型2.5cm×50cm，湿法上柱。首先用双蒸水洗脱直至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且pH值稳定在7左右，再用洗脱剂60％乙醇洗脱至流出液无色pH在6左右，洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥得粗提样。选用体积为1.5cm×30cm的SephadexLH-20柱体，湿法上柱，依次用25％,50％,60％,70％,80％,90％甲醇溶液进行洗脱，用量均分别为三倍柱体积(即分别为180ml)；流速均为50d/min，收集25％甲醇全部洗脱液为洗脱液Ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脱液(在280nm处有吸收而在360nm处无吸收的洗脱液部分)作为洗脱液Ⅱ。合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行浓缩，回收甲醇，得黑豆皮表儿茶素0.39g。上述黑豆皮表儿茶素经高效液相色谱法检测，纯度为＞95％。实施例2从黑豆皮中提取表儿茶素：将50g山东省亮皮青仁黑豆皮，精选去杂，处理后粉碎过40目筛。按1g/40mL比例放入70％丙酮中，用醋酸调节pH2.0,浸提3h，将提取液用滤纸过滤，将滤渣重复上述操作，浸提2次(即以滤渣代表黑豆皮进行如上操作)，合并3次所得滤液，将滤液减压浓缩，得粗提物。上样量50mg粗提物/g树脂，柱型4cm×50cm，湿法上柱。首先用双蒸水洗脱直至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且pH值稳定在7左右，再用洗脱剂60％乙醇洗脱至流出液无色pH在6左右，洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥得粗提样。选用体积为3cm×30cm的SephadexLH-20柱体，湿法上柱，依次用25％,50％,60％,70％,80％,90％甲醇溶液进行洗脱，用量均分别为三倍柱体积(即分别为360ml)；流速均为60d/min，收集25％甲醇全部洗脱液为洗脱液Ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脱液(在280nm处有吸收而在360nm处无吸收的洗脱液部分)作为洗脱液Ⅱ。合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行浓缩，回收甲醇，得黑豆皮表儿茶素1.26g。上述黑豆皮表儿茶素经高效液相色谱法检测，纯度为＞95％。实施例3从黑豆皮中提取表儿茶素：将10g山西省乌皮青仁黑豆皮，精选去杂，处理后粉碎过60目筛。按1g/10mL比例放入50％丙酮中，用醋酸调节pH2.0,浸提3h，将提取液用滤纸过滤，将滤渣重复上述操作，浸提2次(即以滤渣代表黑豆皮进行如上操作)，合并3次所得滤液，将滤液减压浓缩，得粗提物。上样量50mg粗提物/g树脂，柱型2.5cm×50cm，湿法上柱。首先用双蒸水洗脱直至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且pH值稳定在7左右，再用洗脱剂60％乙醇洗脱至流出液无色pH在6左右，洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥得粗提样。选用体积为1.5cm×30cm的SephadexLH-20柱体，湿法上柱，依次用25％,50％,60％,70％,80％,90％甲醇溶液进行洗脱，用量均分别为三倍柱体积(即分别为180ml)；流速均为50d/min，收集25％甲醇全部洗脱液为洗脱液Ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脱液(在280nm处有吸收而在360nm处无吸收的洗脱液部分)作为洗脱液Ⅱ。合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行浓缩，回收甲醇，得黑豆皮表儿茶素0.48g。上述黑豆皮表儿茶素经高效液相色谱法检测，纯度为＞92％。实施例4从黑豆皮中提取表儿茶素：将50g山东省亮皮青仁黑豆皮，精选去杂，处理后粉碎过40目筛。按1g/40mL比例放入70％丙酮中，用醋酸调节pH2.0,浸提3h，将提取液用滤纸过滤，将滤渣重复上述操作，浸提2次(即以滤渣代表黑豆皮进行如上操作)，合并3次所得滤液，将滤液减压浓缩，得粗提物。上样量50mg粗提物/g树脂，柱型4cm×50cm，湿法上柱。首先用双蒸水洗脱直至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且p本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从黑豆皮中提取表儿茶素的方法，其特征在于，包括如下步骤：取黑豆皮，粉碎，过40‑60目筛；按1g/10‑50mL比例放入50‑70％丙酮水溶液中，调节pH2.0，浸提3‑5h，将提取液用滤纸过滤，得滤液；将滤液减压浓缩，得粗提物；粗提物湿法上柱，上样量40‑60mg粗提物/g树脂；先用双蒸水洗脱至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且pH值稳定在6‑8，再用洗脱剂60％乙醇水溶液洗脱至流出液无色且pH在5‑7，洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥得粗提样；粗提样湿法上Sephadex LH‑20柱，依次用25％、50％、60％、70％、80％、90％甲醇水溶液进行洗脱，用量均为三倍柱体积，流速均为50d/min；收集25％甲醇水溶液洗脱液作为洗脱液Ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脱液作为洗脱液Ⅱ；合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行浓缩，回收甲醇，得黑豆皮表儿茶素。

【技术特征摘要】
1.一种从黑豆皮中提取表儿茶素的方法，其特征在于，包括如下步骤：取黑豆皮，粉碎，过40-60目筛；按1g/10-50mL比例放入50-70％丙酮水溶液中，调节pH2.0，浸提3-5h，将提取液用滤纸过滤，得滤液；将滤液减压浓缩，得粗提物；粗提物湿法上柱，上样量40-60mg粗提物/g树脂；先用双蒸水洗脱至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且pH值稳定在6-8，再用洗脱剂60％乙醇水溶液洗脱至流出液无色且pH在5-7，洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥得粗提样；粗提样湿法上SephadexLH-20柱，依次用25％、50％、60％、70...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，梁文婷，李甘，董川，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西,14