本发明专利技术涉及治疗剂或细胞毒性剂与生物活性肽的偶联物及其使用方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及治疗剂或细胞毒性剂与生物活性肽的偶联物及其应用。
技术介绍
氨基甲酸酯化合物作为前体药物(prodrug)为人所熟知。氨基甲酸酯化合物非常适合于前体药物的设计，因为它们可以用于母体药物的再生，而不管与载体分子之间的连接点是羟基基团还是胺基基团。基于分子内环化的氨基甲酸酯前体药物从20世纪80年代开始即有报道。例如，美国专利4812590(相应于EP0296811)披露了4-羟基甲氧基苯氨基甲酸酯的衍生物作为前体药物以在黑素瘤中给予和浓缩4-羟基甲氧基苯。Vigroux等(J.Med.Chem.38，3983-3994，1995)公开了对乙酰氨基酚整合N-(取代2-羟苯基)和N-(取代2-羟丙基)氨基甲酸酯作为前体药物。理想的前体药物设计是将药物与生物活性载体整合以使药物在血液循环中十分稳定，而在靶细胞中内化时释放出药剂。通过不同的化学方法，利用不同类型的接头技术企图达到该目的。特别考虑的是两种类型的生物降解现象，即被动水解和酶水解。被动水解发生在简单的化学分解导致的分子降解过程中；酯、碳酸酯、酰胺和氨甲酸乙酯均对水解有不同程度的敏感性，在碱性pH条件下，稳定性顺序如下氨甲酸乙酯＞酰胺＞碳酸酯＞酯。酶水解发生在血液循环和内化过程中。如果欲期目的是将偶联物传送到靶细胞中，则需要偶联物对血浆中的酶具有较高的抗性，因为这些酶在血液循环过程中能够降解复合物。通常利用的酯衍生物不是特别理想的选择，因为作为接头可被在血液中普遍存在的酯酶所降解。另外一种接头技术是利用在细胞内和细胞外之间存在的pH差别。溶酶体负责细胞内的分子降解，合适的pH值为4-6，而血浆和细胞外液体的pH值为7.4。可以设计一种在pH7时稳定而在pH5时被降解的接头，假设偶联物不为被动水解或血浆中的酶水解，那么这种接头可以用于将偶联物传递到靶细胞。然而，这种接头技术不适合于肽偶联物，这是因为合成肽的多数合成(work-up)和纯化是在酸性介质中进行的。另外的化学接头技术是利用溶酶体中的特定的酶。例如，许多肽序列在血浆中稳定，但可被特定的溶酶体酶所切割。许多这些治疗方法中，正如瘤形成疾病的标准治疗方法一样，均具有毒副作用，这就严重限制了对病人给予活性药剂的量。此外，许多活性药剂导致组织特异性毒性，进一步限制了传递给靶组织的剂量。例如，许多蒽环族(anthracycline family)成员对心脏具有毒性导致这类化学治疗剂的最大剂量的降低。促生长素抑制素、铃蟾肽和其它生物活性肽类似物已用于检测那些过量表达特异于这些肽的受体的肿瘤细胞(如参见Denzler andReubi，Cancer 85(1)188-198，1999)。况且，促生长素抑制素、铃蟾肽和其它生物活性肽类似物在与其受体结合后很快被内化(如参见Lukinius et al，Acta Onc.38383-387，1999)。这种肽类似物的内化可能导致转移到细胞核(Chen等，Am.J.Physiol.Renal Physio，279F440-F448，2000)。促生长素抑制素类似物结合到促生长素抑制素受体亚型，后者存在于特定正常或发病组织的表面。促生长素抑制素受体在特异性发病组织中上调，包括炎性肠道疾病、类风湿性关节炎、各种肿瘤以及提供肿瘤的血管(Denzler and Reubi，Cancer，854188-198，1999)。类似地，特异于其它生物活性肽的受体，P物质(Substance P)，在许多疾病中上调。至少有5个促生长素抑制素受体亚型被鉴定出，而肿瘤可以表达各种受体亚型(Shaer，et al.，Int.J.Cancer 70530-537，1997)。天然的促生长素抑制素和其类似物对这些受体亚型呈现出不同的结合特性，使肽类似物能够精确靶向特异的发病组织。许多细胞毒性剂的物理和化学特性使药物结合到活性肽上存在问题，如促生长素抑制素、铃蟾肽。例如，药物可以减少类似物的结合特异性或生物活性，限制了作为靶向剂的效力。此外，治疗剂和细胞毒性剂具备的化学性质可能促进在特定组织中药物-肽类似物的积累，增大毒性和降低效果。有效的方法是将细胞毒性剂与靶向分子如生物活性肽或抗体连接，但仍然保持每一种成分的活性以满足治疗效果最大化的需求，同时将毒性降至最低。专利技术概述本专利技术涉及治疗剂或细胞毒性剂与靶向部分的偶联物。具体的是，本专利技术涉及具有可切割的化学接头的偶联物，以降低治疗剂或细胞毒性剂在血液循环中的释放，因而使偶联物的活性成分能更容易被细胞内化，以及容易控制活性成分在细胞内的释放速率。相应地，一方面，本专利技术涉及通过氨基甲酸酯接头偶联到化学物质上的生物活性肽。本专利技术偶联物具有许多优点，如保持肽的生物活性、增强偶联物在血浆中的稳定性及其连接化合物在细胞内的释放。本专利技术偶联中使用的肽优选为促生长素抑制素、促生长素抑制素类似物、铃蟾肽、铃蟾肽类似物、KiSS肽及其类似物、硬骨鱼紧张肽II肽及其类似物、GnRH I和II肽及其类似物、奥曲肽、depreotide、vapreotide、血管活性肠肽(VIP)、缩胆囊素(CCK)、胰岛素样生长因子(IGF)、含RGD肽、黑素细胞刺激激素(MSH)肽、神经降压素、降钙素、含有抗肿瘤抗体的互补决定区的肽、谷胱甘肽、YIGSR(白细胞亲合(leukocyte-avid)肽，如P483H，其包含血小板因子-4(PF-4)的肝素结合区和富含赖氨酸序列)、心房利钠肽(ANP)、β-淀粉样肽、δ-阿片拮抗剂(如ITIPP(psi)Phe-Phe-OH]；ITIPP(psi))、膜联蛋白-V、内皮素、白细胞介素(IL)-1、IL-1ra、IL-2和IL-8、白三烯B4(LTB4)、趋化肽(如N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯基丙氨酸-赖氨酸(fMLFK))、GP IIb/IIIa受体拮抗肽(如DMP444)、表皮生长因子、人嗜中性弹性蛋白酶抑制剂(如EPI-HNE-2和EPI-HNE-4)、血浆酶抑制剂、抗菌肽、apticide(如P280和P274)、血小板反应蛋白受体(包括其类似物如TP-1300)、bitistatin、I型垂体腺苷酰环化酶受体(PAC1)、纤维蛋白α-链、以及它们的衍生物和类似物。也包括那些来自噬菌体展示文库的肽及其保守性取代获得的肽，其靶向哺乳动物体内的细胞或组织(如发病组织，如肿瘤或增殖性血管源性血管，如参见Aina etal.，Biopolymers 66184-199，2002)。这些肽可用于将治疗剂和细胞毒性剂特异的靶向于哺乳动物体内的如癌症细胞或组织(例如将抗细胞程序性死亡药物给予到心脏或脑组织)、或者选择性靶向于白细胞或结核感染的结节。例如，当促生长素抑制素或铃蟾肽被用作本专利技术偶联物中的生物活性肽时，治疗剂或细胞毒性剂可以靶向于表达了促生长素抑制素受体或铃蟾肽受体的癌细胞。本专利技术也涉及相应的可以偶联到本专利技术偶联物上的抗体(如单克隆抗体)或其片段。如上关于肽的描述，当抗体整合到本专利技术的偶联物上，治疗剂或细胞毒性剂可靶向于特异的抗体结合位点。本专利技术第一方面的偶联物具有如下通式 其中X是细胞毒性剂或治疗剂；n是0-6的整数，其中(CH2)n是取代的或未取代的、直链或支链、或者是烷基、链烯基、炔基、环基、杂环基、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种由下式表示的偶联化合物： ＊＊＊ 其中：Ｘ是细胞毒性剂或治疗剂； ｎ是０－６的整数，其中（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］是取代的或未取代的、直链或支链、或者是烷基、链烯基、炔基、环基、杂环基、芳基或杂芳基基团； Ｒ是Ｎ（Ｒ↓［１］Ｒ↓［２］）、ＯＲ↓［１］或ＳＲ↓［１］，其中Ｒ↓［１］和Ｒ↓［２］相互独立地是氢或低级烷基； Ｙ是亲水性间隔序列或者缺失； Ｚ是连接肽，当在Ｑ的Ｎ－末端或相容的侧链氨基基团键合到Ｑ时，能够保持Ｑ的至少５０％生物活性，Ｚ具有如下通式： Ａ－Ｂ－Ｃ－Ｅ－Ｆ，其中： Ａ是Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ｓｅｒ或Ｌ－Ｓｅｒ，或者缺失； Ｂ是Ｄ－Ｌｙｓ或Ｄ－Ｔｙｒ，或者缺失； Ｃ是Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、ｈＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｌｅ、Ａｂｕ、Ｎｖａ、（２，３或４）３－吡啶基－Ａｌａ（Ｐａｌ）、Ｏｒｎ、Ｄａｂ、Ｄａｐ、４－ＮＨ↓［２］－Ｐｈｅ、Ｄ－４－ＯＨ－Ｐｒｏ或Ｌ－４－ＯＨ－Ｐｒｏ，或者缺失； Ｅ是Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－４－ＯＨ－Ｐｒｏ、Ｌ－４－ＯＨ－Ｐｒｏ、３－碘－Ｄ－Ｔｙｒ、３－５二碘－Ｄ－Ｔｙｒ、３－砹－Ｄ－Ｔｙｒ、３－５砹－Ｄ－Ｔｙｒ，３－溴－Ｄ－Ｔｙｒ、３－５二溴－Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｌ－Ａｓｎ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｌ－Ａｓｐ、Ｄ－Ｇｌｕ、Ｌ－Ｇｌｕ、Ｄ－Ｇｌｎ或Ｌ－Ｇｌｎ；和 Ｆ是Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｌ－Ｓｅｒ、Ｄ－４－ＯＨ－Ｐｒｏ、Ｌ－４－ＯＨ－Ｐｒｏ、３－碘－Ｄ－Ｔｙｒ、３－５二碘－Ｄ－Ｔｙｒ、３－砹－Ｄ－Ｔｙｒ、３－５砹－Ｄ－Ｔｙｒ，３－溴－Ｄ－Ｔｙｒ、３－５－二溴－Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｌ－Ａｓｎ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｌ－Ａｓｐ、Ｄ－Ｇｌｕ、Ｌ－Ｇｌｕ、Ｄ－Ｇｌｎ或Ｌ－Ｇｌｎ； 条件是当Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｅ分别是Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ和Ｔｙｒ时，则Ｆ不是Ｌｙｓ；当Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｅ分别是Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ和Ｔｙｒ时，则Ｅ不是Ｔｙｒ或Ｌｙｓ；当Ａ和Ｂ缺失，且Ｃ和Ｅ分别是Ｌｙｓ和Ｔｙｒ时，则Ｆ不是Ｔｙｒ或Ｌｙｓ；和 Ｑ为靶向部分或缺失。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：JA福塞利尔，DH科伊，
申请(专利权)人：图兰恩教育基金管理人，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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