用于检测体液中TB的基于CRISPR的测试法制造技术

本发明专利技术描述了一种用于检测体液样品中结核分枝杆菌存在的方法。该方法利用CRISPR效应蛋白以及引导RNA和报道分子，使得当引导RNA与靶核苷酸片段杂交时，CRISPR效应蛋白切割报道分子，产生可检测的信号。产生可检测的信号。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测体液中TB的基于CRISPR的测试法
[0001]先前的相关申请
[0002]本申请要求于2020年2月6日提交的美国系列号62/971,210的优先权，该申请的全部内容通过引用并入本文以用于所有目的。
[0003]联邦资助的研究声明
[0004]不适用。
专利

[0005]本专利技术总体上涉及一种检测循环体液例如血清、血浆、尿液和脑脊液(CSF)中的结核病(tuberculosis，TB)的方法，并且更具体地涉及一种使用基于CRISPR的报道分子系统来检测血清中的结核病的方法。
[0006]专利技术背景
[0007]结核病(TB)是每年影响数百万人的一种严重疾病，并且是全球十大死因之一。延误诊断可能导致死亡。虽然痰样品主要用于诊断肺结核病，但有些患者无法咳出痰液，例如病重或非常年轻的患者。
[0008]目前，TB诊断依赖于Xpert这需要痰样品。尽管痰液中的细菌含量很高，但它很难作为样品收集。此外，不可能从每个结核病患者采集痰液，尤其是肺外结核病患者，而肺外结核病(EPTB)是常见的，尤其是在HI本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测体液样品中结核分枝杆菌(MTB)的方法，包括以下步骤：a)从体液样品中扩增MTB靶核酸序列；和b)使用CRISPR介导的系统检测MTB靶核酸序列的存在；其中所述CRISPR介导的系统包含CRISPR效应蛋白、与所述MTB靶核酸片段杂交的引导RNA(gRNA)和报道分子，所述报道分子被所述CRISPR效应蛋白切割时是可检测的。2.根据权利要求1所述的方法，在步骤a)之前还包括以下步骤：a
‑
1)从体液样品中提取核酸。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸片段是DNA。4.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤a
‑
1)中，所述提取步骤还包括：a
‑
2)使用抗人DNA抗体消耗人DNA。5.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤a
‑
1)中，所述提取步骤还包括：a
‑
3)使用抗MTB抗体富集MTB细菌DNA。6.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤a
‑
1)中，所述提取步骤还包括：a
‑
4)通过超速离心、尺寸排阻色谱、聚合物沉淀、膜过滤或膜亲和分离中的至少一种分离胞外囊泡。7.根据权利要求3的所述方法，其中使用聚合酶链反应(PCR)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、基于核酸序列的扩增(NASBA)、滚环扩增(RCA)或环介导的等温扩增(LAMP)实施步骤a)。8.根据权利要求7所述的方法，其中使用PCR实施步骤a)。9.根据权利要求8所述的方法，其中在PCR中使用杂交增强剂，并且将杂交增强剂转移到检测步骤b)中。10.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤b)中，所述CRISPR效应蛋白选自Cas12a、Cas9和Cas13。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述报道分子是用荧光和猝灭剂、金纳米颗粒或生物素
‑
FAM标记的单链DNA或单链RNA。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述报道分子是5
′‑6‑
FAM
‑
TTTTTTTTTTTT
‑
BHQ1。13.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y，
申请(专利权)人：图兰恩教育基金管理人，
类型：发明
国别省市：