脂质体组合物及其用途制造技术

提供了包含由全细胞膜组分组成的脂质体的组合物。该脂质体可以附连到药剂上或包封药剂。还提供了制取和使用这些脂质体的方法。

Liposome composition and use thereof

Compositions comprising liposomes composed of whole cell membrane components are provided. The liposome may be attached to a medicament or encapsulated. Methods of making and using these liposomes are also provided.

【技术实现步骤摘要】
本申请是国际申请日为2010年8月26日、国际申请号为PCT/IL2010/000703、进入国家阶段的申请号为201080048954.X、专利技术名称为“脂质体组合物及其用途”的PCT申请的分案申请。相关申请本申请根据35USC119(e)要求美国临时专利申请No.61/237,306的优先权权益，该临时专利申请提交于2009年8月27日，其完整内容通过引用合并在此。
本专利技术在其一些实施方式中涉及脂质体组合物及其用途。
技术介绍
基于脂质体的DNA和药物递送系统在过去四十年有着广泛的研究，并用作治疗各种病况的装置(mean)。脂质体系统允许在良好界定的生物相容性和非免疫原性脂质囊泡中高效地包埋亲水性和水性化合物，该脂质囊泡的直径为几纳米至几微米。脂质体也可以利用特异性配体如蛋白质结合物或结合特异细胞受体的抗体靶向。在癌症治疗中，脂质体系统是最受欢迎且全面研究的药物载体之一。这主要由于增强渗透性和滞留(EPR)效应，所述增强渗透性和滞留效应是指肿瘤血管的血管渗透性由于肿瘤血管新生而增大。EPR效应导致脂质体累积在肿瘤细胞外液中，这作为被动靶向机制而被利用。用于癌症治疗的脂质体药物递送的现有技术状态主要包括批准用于临床使用的药物(例如，DaunoXomeTM、MyocetTM、DoxilTM、CaelyxTM)。当前调查了使脂质体系统靶向癌症的数种途径，包括使靶向部分(targetingmoiety)与脂质体表面(例如，抗体)结合。合成的阳离子脂质体是最常用的DNA递送载体，但不论是体外还是体内优选的DNA转移途径，它们的细胞毒性仍然是个问题。另一方面，更加类似于细胞来源的脂质体(就它们的电荷而言)的阴离子脂质体也被证明可以介导基因转移，但包封率较差，这由未凝集DNA(uncondensedDNA)的大尺寸和负电荷引起。通过使DNA与阳离子或聚阳离子(poly-cations)络合(complexation)可以提高包封率和保护DNA不受降解，这种络合随后也显著提高转染效率。近十年来，数个研究已揭示当向荷瘤动物给予某些原代细胞，如成人间充质干细胞(mesenchymalstemcell，MSC)、成人造血干细胞(HSC)和内皮细胞时，它们累积在肿瘤微环境中。最新数据表明分离的肿瘤细胞膜组分似乎包含强有力的MSC引诱剂(attractant)，多于从相同细胞分离的细胞质组分中所包含的。这个数据暗示，MSC靶向肿瘤细胞的机制主要由在肿瘤和MSC上发现的表面分子结合产生的细胞与细胞之间的相互作用控制。然而，细胞对新生血管和肿瘤细胞分泌的不同可溶性因子(例如，趋化因子)的反应被认为也被暗示在某种程度上参与MSC归巢(homing)机制。该归巢机制激发人们研究这些细胞作为癌症治疗的靶向递送媒介物(vehicle)的应用。在这些研究中，原代细胞被分离并用感兴趣的不同基因，抗癌基因或报告基因转导。将该细胞移植到荷瘤动物中，并利用表达的报告蛋白确定它们对肿瘤微环境的归巢。肿瘤抑制利用表达的抗癌症蛋白质实现。源自哺乳动物细胞的细胞质膜的脂质体通常用作研究膜和细胞机制的工具。也对细胞来源的脂质体(CDL或复数的CDL)作为癌症免疫治疗的工具进行了研究。在这些研究中，脂质体由肿瘤细胞膜制备，并用作激发针对位于脂质体膜上的肿瘤抗原的免疫系统的佐剂。然而，细胞来源的脂质体从未从干细胞生产出，也从未用作递送媒介物。此外，也从未开发出用作靶向平台的CDL系统。相关技术：Boone，C.W.，Ford，L.E.，Bond，H.E.，Stuart，D.C.&Lorenz，D.IsolationofplasmamembranefragmentsfromHeLacells.JCellBiol41，378-392(1969).WestermanandJensenMethodsEnzymol.2003；373：118-27.
技术实现思路
根据本专利技术一些实施方式的方面，提供了包含附连(连接，attach)到药剂上或包封(encapsulate)药剂(pharmaceuticalgent)的脂质体的物质组合物(组合物，composition-of-matter)，该脂质体由全细胞膜组分(wholecellmembranefraction)组成。根据本专利技术一些实施方式，该细胞是人细胞。根据本专利技术一些实施方式，全细胞膜的细胞来源选自干细胞、原代细胞(primarycell)、细胞系(cell-line)、非致瘤细胞(non-tumorigeniccell)、癌细胞和免疫细胞组成的组。根据本专利技术一些实施方式的方面，提供了包含由干细胞的全细胞膜组分组成的脂质体的物质组合物。根据本专利技术一些实施方式，该干细胞包含人间充质干细胞。根据本专利技术一些实施方式的方面，提供了包含由原代人细胞的全细胞膜组分组成的脂质体的物质组合物。根据本专利技术一些实施方式的方面，提供了包含由非致瘤人细胞的全细胞膜组分组成的脂质体的物质组合物。根据本专利技术一些实施方式，该细胞膜经受基因修饰从而表达外源蛋白(exogenousprotein)。根据本专利技术一些实施方式，该外源蛋白选自细胞标记(细胞标记物，cellmarker)、靶向部分(targetingmoiety)和药剂组成的组。根据本专利技术一些实施方式，该脂质体包封药剂，或者附连到药剂上。根据本专利技术一些实施方式，该药剂是治疗剂(治疗剂，therapeuticagent)。根据本专利技术一些实施方式，物质组合物在人对象(主体、受验者，subject)中是非免疫原性的。根据本专利技术一些实施方式，该全细胞膜组分的细胞来源包含宿主对象的自体(autologous)细胞。根据本专利技术一些实施方式，该全细胞膜组分的细胞来源包含宿主对象的非自体(non-autologous)细胞。根据本专利技术一些实施方式，所述脂质体在其外表面上附连到合成的聚合物上。根据本专利技术一些实施方式，该药剂是诊断剂。根据本专利技术一些实施方式，该脂质体是单层脂质体(单层的、单室的，unilamellar)。根据本专利技术一些实施方式，该脂质体在其外表面上附连到合成的聚合物上。根据本专利技术一些实施方式，合成的聚合物是聚乙二醇(PEG)。根据本专利技术一些实施方式，该脂质体的尺寸在30-1000nm的范围内。根据本专利技术一些实施方式的方面，提供了生产脂质体的方法，包含：(a)使细胞经受低渗条件(hypotonicconditions)，以便获得破裂的细胞膜和/或空胞(ghost)；和(b)使破裂的细胞膜和/或空胞均质化(homogenize)从而产生脂质体。根据本专利技术一些实施方式，该均质化通过以下而实现：(c)超声处理破裂的细胞膜和/或空胞，和可选地(d)通过具有预定孔隙(孔隙度，porosity)的基质(matrix)挤出破裂的细胞膜和/或空胞。根据本专利技术一些实施方式，该方法进一步包含在步骤(c)之后使合成的聚合物结合到脂质体上。根据本专利技术一些实施方式的方面，提供了将药剂包封在脂质体中的方法，该方法包含根据上面的方法制造脂质体和在均质化步骤之前加入药剂。根据本专利技术一些实施方式的方面，提供了包含作为活性成分的物质组合物，和药物可接受载体的药物组合物。根据本专利技术一些实施方式的方面，提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含附连到药剂上或包封药剂的脂质体的物质组合物，所述脂质体由间充质干细胞的全细胞膜组分组成并且具有自然膜对称性。

【技术特征摘要】
2009.08.27 US 61/2373061.一种包含附连到药剂上或包封药剂的脂质体的物质组合物，所述脂质体由间充质干细胞的全细胞膜组分组成并且具有自然膜对称性。2.根据权利要求1所述的物质组合物，其中，所述间充质细胞是人细胞。3.一种包含由人间充质干细胞的全细胞膜组分组成的脂质体的物质组合物，其中所述脂质体具有自然膜对称性。4.根据权利要求1-3所述的物质组合物，其中，所述细胞膜经受基因修饰从而表达外源蛋白。5.根据权利要求3-4所述的物质组合物，其中，所述脂质体包封药剂，或者附连到药剂上。6.根据权利要求3-4所述的物质组合物，其在人对象中是非免疫原性的。7.根据权利要求1-6所述的物质组合物，其中，所述全细胞膜组分的细胞来源包含宿主对象的自体细胞。8.根据权利要求1-6所述的物质组合物，其中，所述全细胞膜组分的细胞来源包含宿主对象的非自体细胞。9.根据权利要求1所述的物质组合物，其中，所述药剂是诊断剂。10.根据权利要求1-9所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛塞勒·马克鲁夫，托梅尔·布龙施泰因，
申请(专利权)人：工业研究与发展基金会有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL