本发明专利技术涉及一种植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin复合抑菌剂及其在冷鲜肉中的应用，适用于各类食品中致病菌的控制，属于食品防腐保鲜领域。本发明专利技术从福建农贸市场的腊肉中筛选得到植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)Zhang-LL(CGMCCNo.6936)。将该菌所产细菌素与Nisin联合使用制备复合抑菌剂，应用于冷鲜肉的防腐保鲜中，其抑制单增李斯特菌的效果比单独使用细菌素效果提高了1000倍，使得冷鲜肉的保藏期延长了13d。该复合抑菌剂应用于冷鲜肉的防腐，其处理手段简单，细菌素用量少，成本低，适用于规模化冷鲜肉的防腐保鲜。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin复合抑菌剂及其在冷鲜肉 中的应用，适用于各类食品中致病菌的控制，属于食品防腐保鲜领域。
技术介绍
肉制品不同于其他食品，其自身环境条件如水分活度、pH、营养成分等是微生物生 长的良好基质，因此容易滋生种类繁多和含量较大的微生物，包括沙门氏菌、金黄色葡萄球 菌、单增李斯特菌、大肠杆菌等。我国食源性疾病监测网数据显示，食源性疾病事件和涉及 人数最多的是由致病微生物引起的，并且在动物性食品中，以肉及肉制品引起的疾病事件 最多。目前猪肉中控制单增李斯特菌的生长是一个较为棘手的问题，食入单增李斯特菌侵 染的猪肉会导致部分人群感染，尤其孕妇、婴儿和免疫力低下的人群，在这些被感染的人群 中致死率偏高，约在27%?34%之间。单增李斯特菌是肉制品中广泛存在的腐败菌，由于 耐受低温，故冷藏抑制其生长作用不大。该菌在有氧和无氧条件下都能生长，故真空包装或 二氧化碳气调保藏亦不能抑制该菌生长。此外，PH、氯化钠、硝酸盐对其生长的影响也不明 显〇 添加防腐剂是目前食品防腐保鲜的重要方式，并且在防腐保鲜领域，由于化学合 成防腐剂存在潜在的副作用，对于天然安全的生物防腐剂的研宄更为广泛。乳酸菌素是某 些乳酸菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌活性的蛋白质或多肽，通 常能够抑制其近缘菌株，产生菌有自身免疫性。它之所以能够成为天然生物防腐剂的开发 对象基于以下特点：①其产生菌乳酸菌生长繁殖快，生产周期短，具有工业化生产前景；② 具有人体蛋白酶生物降解性，不会在人体内蓄积，也不会对人体肠道的正常菌群产生影响； ③不同于抗生素会耐药性，不会诱发致病微生物对抗生素的抗性；④便于现代基因工程技 术对细菌素基因进行修饰和克隆。 虽然国内外研宄者对于天然抑菌物质细菌素的筛选在进行不断地探索研宄，已发 现了一些对食品腐败微生物和病原微生物具有广谱抑菌活性的细菌素，但只有Nisin是世 界上公认天然的食品防腐剂，是迄今唯一允许用作食品防腐剂的乳酸菌细菌素，到目前为 止，已在世界约50个国家和地区得到广泛应用。但是，Nisin的抑菌谱较窄，pH8. 0以上即 失活，只能在酸性食品中发挥作用。Nisin主要抑制革兰氏阳性菌，对革兰氏阴性菌的抑菌 作用不理想，由此限制了Nisin的应用。本专利技术专利将植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin 按比例复合使用，具有良好的抑菌作用，该复合抑菌剂可应用于各类食品中致病菌的控制。 目前，国内外文献中有关于乳酸菌细菌素作为防腐剂在肉制品中应用的报道。刘 国荣等研宄表面乳酸菌素pentocin31-l能够有效抑制冷鲜肉中假单胞菌和潜在致病菌李 斯特氏菌的生长，添加pentocin31-l量为80AU/g时，在保证良好感官特性的前提下，能 够延长冷鲜肉货架期至15d;Castellano等研宄发现LactobacilluscurvatusCRL705可 以作为生物防腐剂使真空包装的牛肉在2°C的条件下贮存60d不变质；RosalindaUrso等 在自然发酵香肠中筛选到一株沙克乳杆菌Lacticbacteriasakei，其所产细菌素Sakacin P不仅能较好抑制香肠中的肠球菌，而且对香肠的风味无不良影响。国内专利中有关乳酸 菌细菌素在肉制品中应用的报道。南京农业大学申请的"一种产细菌素的米酒乳杆菌菌 株及其用法"，专利申请号为：CN03132323. 5 ;中国农业大学申请的"细菌素和超高压联合 防腐保鲜技术及其应用"，专利申请号为：CN201110141938。植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)是中华人民共和国卫生部办公厅于2010年4月22日印发的《可用于食品的菌 种名单》中明文规定的菌种之一，且本专利技术中植物乳杆菌植物亚种分离自具有益生特性的 传统发酵食品一一福建腊肉，其所产具有抗菌活性的代谢产物被认为基本安全。因此，植物 乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin联合作为食品防腐剂安全可靠。虽然国内外有关于乳酸菌 细菌素在肉制品防腐保鲜的报道，但关于植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin联合应用于 肉制品防腐尚未见文献和专利报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin复合抑菌剂及其 在冷鲜肉中的应用方法。 本专利技术复合抑菌剂中所述细菌素来源为植物乳杆菌植物亚种细菌素和乳酸链球 菌素（Nisin购于美国Sigma公司）。植物乳杆菌植物亚种细菌素，是从植物乳杆菌植物亚 种Zhang-LL发酵液中提取得到，植物乳杆菌植物亚种（Lactobacillusplantarumsubsp. plantarum)Zhang-LL，已于2012年12月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心（简称CGMCC)，保藏号为：CGMCCNo. 6936。 复合抑菌剂的制备方法：取效价为1280AU/mL植物乳杆菌植物亚种细菌素用无菌 蒸馏水进行二倍梯度稀释至320AU/mL;Nisin配制成5% (W/V)的工作液，通过二倍连续梯 度稀释法结合其效价为320AU/mL。植物乳杆菌植物亚种细菌素和Nisin按照3 : 1体积比 混合，得到复合抑菌剂。 复合抑菌剂在冷鲜肉防腐中应用方法：活猪、致昏、放血、去头、剥皮、摘除内脏、消 毒、冷却、分割剔骨、喷洒复合抑菌剂、包装。在分割后喷洒效价为320AU/mL复合抑菌剂，喷 洒量为〇.lmL/cm2,每公斤冷鲜肉需喷洒约10mL抑菌剂，4°C风干后保藏。 上述的植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin复合抑菌剂的制备方法及其在冷鲜 肉中的应用属于本专利技术保护范围。【附图说明】 植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin复合抑菌剂在冷鲜肉防腐中应用的工艺流 程图说明如下： (1)活猪：检验检疫合格；⑵致昏：电压85V，时间3?4s。（3)放血：采用吊挂 方式，时间4min; (4)去头、剥皮、摘除内脏；（5)消毒：脱氢乙酸（0.001% )，5s; (6)冷却： 0?4°C，10h，风速lm/s; (7)分割剔骨；（8)喷洒复合抑菌剂，效价为320AU/mL，喷洒量为 0?lmL/cm2; (9)包装：产品置于4°C保藏。 植物乳杆菌植物亚种（Lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)Zhang-LL分 离筛选自福建农贸市场中的腊肉制品，其产生的细菌素可被人体内蛋白酶所降解。本专利技术 中乳酸菌素复合抑菌剂应用于冷鲜肉保鲜，其处理手段简单，细菌素用量少，成本低，适用 于规模化冷鲜肉的防腐。【具体实施方式】 下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。 下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为体积百分含量。 实施例1、培养基体系中植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin联合使用对单增李 斯特菌的抑制作用 1、植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin抑菌活性的测定 采用pH吸附-解吸法制备植物乳杆菌植物亚种细菌素的粗提取液，将Nisin配制 成5% (m/V)的工作液。以单核细胞增生李斯特氏菌ATCC54003作为指示菌，采用二倍连续 梯度稀释法结合抑菌试验测定植物乳杆菌植物亚种细菌素与Nisin的抑菌活性，结果显示 植物乳杆菌植本文档来自技高网...
【技术保护点】
植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)Zhang‑LL CGMCC No.6936。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张红星，刘慧，白永强，许宏愿，段慧霞，郝艳芳，谢远红，金君华，熊利霞，高秀芝，
申请(专利权)人：北京农学院，北京和美科盛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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