作为昆虫控制剂的DSRNA制造技术

本发明专利技术涉及使用双链RNA分子来控制有害生物侵袭的方法。本发明专利技术提供了制备表达所述双链RNA分子的转基因植物的方法，以及通过本发明专利技术植物生产的杀虫剂和商品产品。

【技术实现步骤摘要】
作为屋虫控制剂的DSRNA[000。 本申请为2006年9月18日提交的、专利技术名称为作为昆虫控制剂的DSRNA的PCT 申请PCT/IB2006/004003的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2008年5 月16日，申请号为200680042821. 5。 专利
-般而言，本专利技术涉及对有害生物（pest)侵袭的遗传学控制。更具体地，本专利技术 涉及双链RNA重组技术，用于阻遏或抑制有害生物中祀编码序列的表达。 导论 环境中充满有害生物，人们已经试图使用多种方法来控制有害生物对植物的侵 袭。用于控制显微有害生物侵袭的组合物已经W抗生素、抗病毒和抗真菌组合物的形式提 供。通常，用于控制较大有害生物（例如，线虫）侵袭的方法是化学组合物的形式，其被应 用于有害生物驻留的表面，或者W小丸、散剂、片剂、糊剂或胶囊剂的形式施用给受侵袭的 动物。 商业作物通常是昆虫攻击的目标。过去数十年来已经做出了相当的进展，开发出 了更高效的方法和组合物用于控制植物中的昆虫侵袭。化学杀虫剂对于根除有害生物侵袭 非常有用。然而，使用化学杀虫剂有若干种缺点。化学杀虫剂有可能对于环境有害，而且， 化学杀虫剂还不是选择性的，其对于多种作物和非祀标动物群体同样有害。化学杀虫剂持 续存在于环境中，通常代谢得很慢（如果有代谢）。它们在食物链中积累，特别是高等食肉 动物物种中。该些化学杀虫物质的积累导致对该些物质抗性的发展，并且可能在进化梯中 高等的物种中，成为诱变剂和/或致癌物，导致不可逆的和有害的遗传修饰。 因为与化学杀虫剂相关的该些危险，已经开发了分子手段来控制植物上的有害生 物侵袭。例如，苏云金芽抱杆菌炬acillus thuringiensis)炬.t.)细菌已经可商业获得， 其在超过H十年来用作为环境安全的、可接受的杀昆虫剂。化学杀虫物质应用的减少已经 产生了更干净的±壤，W及从从±壤流入周围溪流、河流、池塘和湖泊的更干净的水。除了 该些环境益处之外，由于化学杀昆虫物质使用的减少，在生长转基因昆虫抗性作物的作物 田间，有益昆虫数量也显著增加了。 RNA干扰（RNAi)提供了用于控制基因表达的潜在的强大工具，因为其能特异 性祀向选择，并且W显著高的效率进行祀向mRNA遏制。RNAi指通过短干扰RNA(SiRNA) 介导的序列特异性转录后基因沉默狂amore，P.等人，Cell 101:25-33(2000) ;Fire，A. 等人，化1:脚6 391:806(1998);化 milton 等人，Science 286, 950-951(1999) ;Lin 等 人，化化re 402:128-129(1999))。虽然RNAi的机制还没有获得完全表征，但是人们认为， 细胞中dsRNA的存在通过激活核糖核酸酶III切酶来触发RNAi Gamore, P.等人，（2000); Hammond等人，化化re 404,293(2000))。切酶将的dsRNA加工为短片段，其被称为短干 扰RNA(SiRNA)，其为大约21至大约23个核巧酸长，包含约19个碱基对双链体狂amore等 人，（2000) ;E化ashir 等人，Genes Dev. ,15, 188 (2001))。递送进细胞后，SiRNA 分子与内 切核酸酶复合物相关联，该复合体通常被称为RNA诱导性沉默复合物巧ISC)，其将SiRNA的 反义链和细胞mRNA基因祀带到一起。RISC切割mRNA，然后所述mRNA释放并被降解。重要 地，然后RISC能降解祀mRNA的额外拷贝。 因此，本专利技术提供了通过阻遏、延迟或降低特定有害生物中的基因表达来控制有 害生物侵袭的方法和组合物。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供了经分离的核巧酸序列，其包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、 11、13、15、17、19、21、23、49 - 158、159、160-163、168、173、178、183、188、193、198、203、208、 215、220、225、230、240-247、249、251、253、255、257、259、275-472、473、478、483、488、493、 498、503、508-513、515、517、519、521、533-575、576、581、586、591、596、601、603、605、607、 609、621 - 767、768、773、778、783、788、793、795、797、799、801、813 - 862、863、868、873、 878、883、888、890、892、894、896、908-1040、1041、1046、1051、1056、1061、1066-1071、1073、 1075、1077、1079、1081'1083、1085、1087、1089、1091'1093、1095、1097、1099、1101'1103、 1105、1107、1109、1111、1113、1161-1571、1572、1577、1582、1587、1592、1597、1602、1607、 1612、1617、1622、1627、1632、1637、1642、1647、1652、1657、1662、1667、1672、1677、1682、 1684、1686、1688、1690、1692、1694、1696、1698、1700、1702、1704、1730 - 2039、2040、2045、 2050、2055、2060、2065、2070、2075、2080、2085、2090、2095、2100、2102、2104、2106、2108、 2120 - 2338、2339、2344、2：349、2354、2359、2364、2366、2368、2370、2372、2384 - 2460、2461、 2466、2471、2476和2481中示出的核酸序列。在一种实施方案中，本专利技术提供了双链核糖 核巧酸序列，其是多核巧酸序列的表达产生的，其中，植物的有害生物摄入所述核糖核巧酸 序列能抑制所述有害生物的生长。在又一实施方案中，摄入所述序列抑制与所述序列充分 互补的核巧酸序列的表达。在另一实施方案中，用该多核巧酸转化细胞。在还一实施方案 中，用该多核巧酸转化植物或植物细胞。在又一实施方案中，从经转化的植物产生种子或产 品。在再一实施方案中，产品选自食品、饲料、纤维、纸、餐食、蛋白质、淀粉、面粉、青胆饲料、 咖啡、茶和油构成的组。 在另一实施方案中，本专利技术提供了与 SEQ ID N0s:l、3、5、7、9、ll、13、15、17、19、 21、23、49 - 158、159、160-163、168、173、178、183、188、193、198、203、208、215、220、225、 230、240-247、249、251、253、255、257、259、275-472、473、478、483、488、493、498、503、 508-513、515、517、519、521、533-575、576、581、586、591、596、601、603、605、607、609、621 767、768、773本文档来自技高网...

【技术保护点】
经分离的双链RNA分子，其包含退火的互补链，其中至少一条所述退火的互补链包含选自以下的多核苷酸：(a)与如下任意所示的靶基因的至少21个连续核苷酸互补的多核苷酸：SEQ ID NO:3、795、890、1073、1684、2366、1、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、159、160、161、162、247、249、251、253、255、257、259、513、515、517、519、521、601、603、605、607、609、793、797、799、801、888、892、894、896、1071、1075、1077、1079、1081、1083、1085、1087、1089、1091、1093、1095、1097、1099、1101、1103、1105、1107、1109、1111、1113、1115、1682、1686、1688、1690、1692、1694、1696、1698、1700、1702、1704、2100、2102、2104、2106、2108、2364、2368、2370和2372；(b)与编码如下任意所示的氨基酸序列的靶基因的至少21个连续核苷酸互补的多核苷酸：SEQ ID NO:4、796、891、1074、1685、2367、2、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、248、250、252、254、256、258、260、514、516、518、520、522、602、604、606、608、610、794、798、800、802、889、893、895、897、1072、1076、1078、1080、1082、1084、1086、1088、1090、1092、1094、1096、1098、1100、1102、1104、1106、1108、1110、1112、1114、1116、1683、1687、1689、1691、1693、1695、1697、1699、1701、1703、1705、2101、2103、2105、2107、2109、2365、2369、2371和2373，以及(c)与(a)或(b)的多核苷酸具有至少85％序列同一性的多核苷酸，其中所述多核苷酸接触有害生物抑制与所述多核苷酸基本互补的所述有害生物的多核苷酸的表达。...

【技术特征摘要】
2006.09.15 IB PCT/IB2006/003351;2005.09.16 US 60/71. 经分离的双链RNA分子，其包含退火的互补链，其中至少一条所述退火的互补链包 含选自以下的多核苷酸： (a) 与如下任意所示的靶基因的至少21个连续核苷酸互补的多核苷酸：SEQ ID N0:3、 795、890、1073、1684、2366、1、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、159、160、161、162、247、249、 251、253、255、257、259、513、515、517、519、521、601、603、605、607、609、793、797、799、801、 888、892、894、896、1071、1075、1077、1079、1081、1083、1085、1087、1089、1091、1093、1095、 1097、1099、1101、1103、1105、1107、1109、1111、1113、1115、1682、1686、1688、1690、1692、 1694、1696、1698、1700、1702、1704、2100、2102、2104、2106、2108、2364、2368、2370 和 2372 ; (b) 与编码如下任意所示的氨基酸序列的靶基因的至少21个连续核苷酸互补的多 核苷酸：SEQ ID N0:4、796、891、1074、1685、2367、2、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、248、 250、252、254、256、258、260、514、516、518、520、522、602、604、606、608、610、794、798、800、 802、889、893、895、897、1072、1076、1078、1080、1082、1084、1086、1088、1090、1092、1094、 1096、1098、1100、1102、1104、1106、1108、1110、1112、1114、1116、1683、1687、1689、1691、 1693、1695、1697、1699、1701、1703、1705、2101、2103、2105、2107、2109、2365、2369、2371 和 2373,以及 (c) 与（a)或（b)的多核苷酸具有至少85%序列同一性的多核苷酸， 其中所述多核苷酸接触有害生物抑制与所述多核苷酸基本互补的所述有害生物的多 核苷酸的表达。2. 权利要求1的双链RNA分子，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·拉马克斯，P·菲尔德曼，G·普莱廷克，I·诺仁，E·范布勒，F·佩克尔，T·博盖尔特，
申请(专利权)人：德福根有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE