一种昆虫拒食剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种昆虫拒食剂及其用途，它选自人工培养的Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ或Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ属细菌的培养液、培养液的上清液或培养液中滤渣的水稀释液；将其应用于植物体特别是十字花科的蔬菜的表面或地下部分、生长环境中时，可阻止世界性的蔬菜主要害虫小菜蛾（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）取食植物体。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

A kind of insect antifeedant and its use

The invention relates to an insect antifeedant and use it from the culture medium, cultured Xenorhabdus or Photorhabdus bacteria culture fluid supernatant or culture water dilution liquid residue; applied to plants especially cruciferous vegetables on the surface or underground part, growth environment. Can stop the world of diamondback moth (Plutellaxylostella) main vegetable pests feeding plants.

【技术实现步骤摘要】
一种昆虫拒食剂及其用途
本专利技术涉及一种昆虫拒食剂，进一步涉及这种昆虫拒食剂的用途。技术背景昆虫病原斯氏科Steinernematidae与异小杆科Heterorhabditidae线虫是新型生物杀虫剂。这类线虫具有广泛的寄主范围；对寄主具主动搜寻能力，特别是对土栖性及钻蛀性害虫；对人畜、环境安全。近年来，已广泛应用于防治农、林、牧草及卫生等害虫，受到国内外学者及商业部门的高度重视，并走向商品化。这类线虫是以感染期虫态(infective juveniles，IJ)随寄主食物或从昆虫的自然开口(如肛门、气孔)、节间膜进入昆虫体内，随后释放肠腔中携带的Xenorhabdus属(目前与斯氏科线虫共生)或Photorhabdus属(目前与异小杆科线虫共生)的共生细菌。线虫以及共生细菌分泌的毒素(毒性因子)导致昆虫死亡。原先，科学家们认为，Xenorhabdus属或Photorhabdus属的共生细菌只有被线虫携带或注射进入昆虫体内时才发挥杀虫作用[Akhurst(1980)Journal of General Microbiology121，303-309；Bedding(1984)Annals of Applied Biology 104，117-120；Forst & Nealson(1996)Microbiological Review 60，21-43]。最近发现，共生细菌可通过口服单独致死昆虫[李素春等(1995)第六届全国杀虫微生物学术讨论会论文摘要集p.43；Jarrett et al.(1998)PCT PatentApplication No.98/08388；Ragni et al.(1998)PCT Patent Application No.98/05212]，从共生菌中可分离出蛋白质毒素[Ensign et al.(1997)PCT Patent Application No.97/17432；Bowen et al.(1998)Science 280，2129-2132；Ensign et al.(2000)US Patent，Application No.072264]，因此，昆虫病原线虫共生细菌在虫害防治方面的应用也受到重视。杀虫蛋白毒素的发现为进一步研制新型微生物农药以及创建防虫转基因植物提供了新的途径。所有已发表或公开的文献指出，昆虫病原线虫的共生细菌或共生细菌分泌的杀虫蛋白对昆虫有毒杀作用(toxicactivity)，但未发现这类细菌对昆虫的拒食作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种昆虫拒食剂，进一步目的是提供这种昆虫拒食剂的用途。本专利技术的一种昆虫拒食剂，选自人工培养的Xenorhabdus或Photorhabdus属细菌的培养液、培养液的上清液或细菌培养液中滤渣的水稀释液。本专利技术所公开Xenorhabdus和Photorhabdus属细菌分离自斯氏科Steinernematidae斯氏属Steinernema与异小杆科Heterorhabditidae异小杆属Heterorhabditis昆虫病原感染期线-->虫，目前在分类上归属于Enterobacteriaceae科。Xenorhabdus属细菌目前经描述的种有Xenorhabdus nematophilus、X.poinarii、X.bovienii、X.beddingii或X.kushidaii。Photorhabdus属细菌目前经描述的种有P.luminescens。这些细菌的分类地位以后的可能改变并不会影响本专利技术的限制范围。Xenorhabdus属细菌选自Xenorhabdus nematophilus、X.poinarii、X.bovienii、X.beddingii或X.kushidaii种细菌。Photorhabdus属细菌有P.luminescens种细菌。滤渣中包含有灭活菌体、灭活菌体的片段以及其他固体物质。本专利技术的一种昆虫拒食剂的制备方法即培养方法，是将所属细菌经分离、纯化后，以人工培养基(如蛋白胨水培养基或其它能够培养这类细菌的培养基)体外培养，包括以发酵罐或反应器系统培养，所获得的菌液可直接或经分离、提取和提纯，得到的有效组分用做昆虫拒食剂。本专利技术的这种昆虫拒食剂的用途是将其应用于植物表面或地下部分、生长环境中，可阻止世界性的蔬菜主要害虫小菜蛾(Plutella xylostella)取食植物体。特别是将其应用于十字花科的蔬菜的表面或地下部分、生长环境中，特别能阻止世界性的蔬菜主要害虫小菜蛾(Plutellaxylostella)取食十字花科的蔬菜。施用量和施用次数根据小菜蛾的发生期、发生数量以及气候条件等而定。这些拒食剂可通过不同的剂型如水剂、可湿性粉剂、颗粒剂和浓缩剂等配置，首选水剂，既经济又方便；也可加入辅助剂如吸附剂、湿润剂、防腐剂、粘着剂、引诱剂、保护剂和增效剂等使用。具体实施方式下列实验及操作实例是进一步对本专利技术的说明，不应该当作对本专利技术的限制。实例中仅描述X.nematophilus和P.luminescens，但适用于所有Xenorhabdus或Photorhabdus属细菌。实例一按下列方法分别分离Xenorhabdus和Photorhabdus初生型共生细菌：昆虫病原线虫感染的大蜡螟末龄(七龄)幼虫Galleria mellonella，置于25℃下，昆虫死亡后(一般2至4天)，以70％酒精体表消毒死虫，然后用无菌剪刀剪开虫体，取血淋巴划营养琼脂和麦康凯平板。根据Akhurst(1980)(Journal of General Microbiology 121，303-309)描述的方法鉴定线虫共生细菌。从S.carpocapsae A24线虫中分离出X.nematophilus共生菌；从H.bacteriophora线虫中分离出P.luminescens共生菌。取二个500ml三角瓶中，分别加入100ml液体培养基(1％蛋白胨，0.5％ NaCl)，121℃下高压消毒30分钟。然后分别接入从S.carpocapsae A24和H.Bacteriophora H06线虫中分离出的X.nematophilus和P.luminescens初生型共生菌(5×108菌体)，置于25℃、150rpm下摇床分别培养48小时，所获得的培养菌液作为昆虫拒食剂，采用叶蝶法分别测定二种菌液对小菜蛾幼虫的拒食作用：-->用打孔器(直径＝2cm)将椰菜叶作成叶蝶，将其浸泡在不同的菌液中(50ml菌液中加入3滴高压消毒的甘油)5秒钟，取出并凉干叶蝶，将其放入垫有2层无菌中速滤纸(新华)的培养皿中(直径＝7.5cm)。实验分两种方法处理：一、选择性测定：每培养皿加两片叶蝶，一片浸泡菌液的叶蝶和另一片对照叶蝶(不浸泡菌液，仅浸泡加入高压消毒的甘油的无菌水)，然后往每个培养皿中接入3龄小菜蛾幼虫10头。每处理设3个平板的重复。置于25℃下。试验后24，48和72小时，检查叶蝶被取食的面积。二、非选择性测定：每培养皿加两片浸泡菌液的叶蝶，另设对照叶蝶(不浸泡菌液，仅浸泡加入高压消毒的甘油的无菌水)放于另一培养皿(对照培养皿)中，然后往每个培养皿中接入3龄小菜蛾幼虫10头本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种昆虫拒食剂，其特征在于选自人工培养的Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ或Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ属细菌的培养液、培养液的上清液或细菌培养液中滤渣的水稀释液。

【技术特征摘要】
1.一种昆虫拒食剂，其特征在于选自人工培养的Xenorhabdus或Photorhabdus属细菌的培养液、培养液的上清液或细菌培养液中滤渣的水稀释液。2.根据权利要求1所述的一种昆虫拒食剂，其特征在于Xenorhabdus属细菌选自选自Xenorhabdus nematophilus、X.poinarii、X.bovienii、X.beddingii或X.kushidaii种细菌；Photorhabdus属细菌有P.luminescens种细菌。3.根据权利要求1所述的一种昆虫拒食剂，其特征在于Xenorhabdus属细菌目前经描述的包括Xenorhabdus nematophilus、X.p...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩日畴，刘秀玲，曹莉，李秋剑，陈镜华，
申请(专利权)人：广东省昆虫研究所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]