包含MRSA PBP2A及其片段的蛋白、编码它们的核酸、以及组合物及它们预防和治疗MRSA感染的用途制造技术

本发明专利技术公开了编码MRSA PBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段的核酸分子。本发明专利技术公开了包含所述核酸分子的组合物。本发明专利技术公开了包括MRSA PBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段的新型蛋白。本发明专利技术公开了诱导针对MRSA PBP2a的免疫应答的方法，以及治疗诊断有MRSA的个体的方法以及预防个体中MRSA感染的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含MRSAPBP2A及其片段的蛋白、编码它们的核酸、以及组合物及它们预防和治疗MRSA感染的用途
本专利技术涉及共有抗原性MRSAPBP2a蛋白及其上的片段和编码它们的核酸分子；涉及包含此类蛋白和/或核酸分子的改进的MRSA疫苗；以及涉及使用所述疫苗诱导免疫应答和预防MRSA感染和/或治疗感染有MRSA的个体的方法。专利技术背景甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(MSSA)是指所有抗生素敏感性金黄色葡萄球菌株系。因此，MSSA是指导致大部分金黄色葡萄球菌感染并可用青霉素类抗生素治疗的常见类型的金黄色葡萄球菌。相比之下，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是指耐一系列青霉素抗生素(包括甲氧西林)的金黄色葡萄球菌的亚组。MRSA最早在1961年在推出抗生素甲氧西林后不久就出现了。MSSA和MRSA均具有允许粘附到细胞表面和免疫逃避/杀灭的毒力/致病性因素。为比较MRSA和MSSA的致病性而开展的研究得到了一些相互矛盾的数据。然而，清楚的是，或许MRSA与MSSA之间最明显的差异是MRSA的甲氧西林耐药性。MRSA的耐药性因在细菌表面上存在青霉素结合蛋白2a(PBP2a)而产生。PBP2a蛋白由mecA基因编码。包括MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)的金黄色葡萄球菌感染在医院和其他医疗保健机构(诸如疗养院和透析中心)中的人员中最常发生。这些医疗保健相关性葡萄球菌感染包括手术伤口感染、尿道感染、血流感染和肺炎等。MRSA可导致皮肤感染，这些感染可看起来像丘疹或疖子，并可能发红、肿胀、疼痛或具有脓液或其他引流。更严重的感染可导致肺炎、血流感染或手术伤口感染。发生严重MRSA感染(即，侵入性)的人群的最近估计数量为约94,360名患者。大约18,650人在住院期间因严重MRSA感染而死亡(约20％的死亡率)。已报道了使用具有编码PBP2a或其片段的核酸序列的质粒开发抗MRSA的DNA疫苗的努力。OhwadaA等人，DNAvaccinationbymecAsequenceevokesanantibacterialimmuneresponseagainstmethicillin-resistantStaphylococcusaureus，JAntimicrobChemother.1999年12月；44(6)：767-74描述了DNA质粒的肌内注射，该质粒包含由N315MRSA分离株克隆的编码PBP2a蛋白的mecA基因。RothDM等人，EvaluationofthehumoralimmuneresponseinBALB/cmiceimmunizedwithanakedDNAvaccineanti-methicillin-resistantStaphylococcusaureus，GenetMolRes.2006年8月31日；5(3)：503-12以及SennaJP等人，ProtectiveimmuneresponseagainstmethicillinresistantStaphylococcusaureusinamurinemodelusingaDNAvaccineapproach.Vaccine.2003年6月2日；21(19-20)：2661-6报道了将肌内注射用于递送DNA质粒，该质粒仅包含由HSP-03临床MRSA分离株克隆的mecA基因的249个碱基对片段。仍需要可用于预防或治疗MRSA感染的疫苗。仍需要编码MRSAPBP2a或其片段的核苷酸序列，其在并入疫苗中时可以高水平表达，使得诱导针对表达PBP2a的MRSA金黄色葡萄球菌的有效免疫应答，从而在受感染个体中提供治疗作用或对MRSA感染的长期防护。专利技术概要本专利技术提供了核酸分子，其编码包括MRSAPBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段的蛋白。在一些实施方案中，该蛋白包含连接到MRSAPBP2a蛋白或其片段的信号肽。在一些实施方案中，该信号肽为IgE信号肽。本专利技术提供了核酸分子，其包含与SEQIDNO：1至少98％同源并编码与SEQIDNO：2至少98％同源的蛋白的核酸序列的片段。该片段编码与SEQIDNO：2的片段98％同源并包含至少245个氨基酸的蛋白的免疫原性片段，诸如具有至少245个氨基酸的SEQIDNO：2的免疫原性片段。在一些实施方案中，该片段包括SEQIDNO：1的片段，诸如SEQIDNO：3或SEQIDNO：5。片段在一些实施方案中不含编码MRSAPBP2a跨膜结构域的编码序列。片段在一些实施方案中可操作地连接到编码信号肽序列的编码序列，诸如IgE信号肽序列SEQIDNO：13。片段在一些实施方案中包括SEQIDNO：9或SEQIDNO：11。本专利技术提供了核酸分子，其包含与SEQIDNO：1至少98％同源并编码与SEQIDNO：2至少98％同源的蛋白(诸如包含SEQIDNO：2的蛋白)的核酸序列。在一些实施方案中，本专利技术提供了核酸分子，其包含SEQIDNO：1，即MRSAPBP2a蛋白的合成编码序列。核酸编码序列在一些实施方案中可操作地连接到编码信号肽序列的编码序列，诸如IgE信号肽序列SEQIDNO：13。核酸分子在一些实施方案中包含SEQIDNO：7。包含如上所示的编码MRSAPBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段的核酸序列的核酸分子可以为质粒，将核酸分子并入病毒颗粒或其他表达载体。本专利技术提供了组合物，其包含被配制成使用电穿孔递送给个体的质粒或其他核酸分子。本专利技术提供了组合物，其包含编码选自IL-12、IL-15和IL-28的一种或多种蛋白的核酸分子。本专利技术提供了蛋白。本专利技术提供了与包含SEQIDNO：2的蛋白至少98％同源的蛋白，以及包含与SEQIDNO：2的片段至少98％同源且含有至少245个氨基酸的蛋白的免疫原性片段的蛋白。在一些实施方案中，蛋白包含SEQIDNO：4或SEQIDNO：6。本专利技术提供了诱导针对MRSAPBP2a的免疫应答的方法。一些方法包括以在个体中有效诱导免疫应答的量向个体施用核酸分子，所述核酸分子编码MRSAPBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段。一些方法包括以在个体中有效诱导免疫应答的量向个体施用蛋白。本专利技术提供了治疗诊断有MRSA的个体的方法。一些方法包括以治疗量向个体施用编码MRSAPBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段的核酸分子。一些方法包括向个体施用治疗有效量的蛋白。本专利技术提供了预防个体中的MRSA感染的方法。一些方法包括以预防量向个体施用编码MRSAPBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段的核酸分子。一些方法包括向个体施用预防有效量的蛋白。附图简述图1是示出了存在于金黄色葡萄球菌表面上的PBP2a蛋白的图解。该蛋白通过其位于细胞膜中的“跨膜结构域”而锚定在细胞膜中，并且“N端延伸和非青霉素结合域”以及“转肽酶结构域”均暴露在胞外间隙中的细胞外部上。图1还显示了PBP2a蛋白的两种形式，它们为包含在由本文所公开的核酸分子编码的蛋白中的PBP2a蛋白序列的实例。命名为“完整”的形式包括全长PBP2a蛋白，其包含“跨膜结构域”、“N端延伸和非青霉素结合域”以及“转肽酶结构域”。命名为“无锚定区”本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种编码MRSA PBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段的核酸分子，所述核酸分子包含：与SEQ ID NO：1至少98％同源并编码与SEQ ID NO：2至少98％同源的蛋白的核酸序列；或与SEQ ID NO：1至少98％同源并编码与SEQ ID NO：2至少98％同源的蛋白的核酸序列的片段，其中所述片段编码与包含至少245个氨基酸的SEQ ID NO：2的片段98％同源的蛋白的免疫原性片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.12.12 US 61/569,7271.一种编码MRSAPBP2a蛋白或其包含至少245个氨基酸的片段的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码SEQIDNO:2或其片段，所述片段包含至少SEQIDNO:6。2.根据权利要求1所述的核酸分子，所述片段是SEQIDNO:1的片段，其中所述片段编码包含至少SEQIDNO:6的免疫原性片段。3.根据权利要求2所述的核酸分子，其为SEQIDNO:5。4.根据权利要求2所述的核酸分子，其为SEQIDNO:3。5.根据权利要求2所述的核酸分子，其中SEQIDNO:2的至少包含SEQIDNO:6的片段不含编码MRSAPBP2a跨膜结构域的编码序列。6.根据权利要求2所述的核酸分子，包含编码信号肽序列的编码序列，所述编码序列可操作地连接到SEQIDNO:1的核酸序列的片段，所述片段编码SEQIDNO:2。7.根据权利要求6所述的核酸分子，其中所述信号肽序列为IgE信号肽序列SEQIDNO:13。8.根据权利要求7所述的核酸分子，是序列SEQIDNO:11。9.根据权利要求7所述的核酸分子，是序列SEQIDNO:9。10.根据权利要求1所述的核酸分子，所述核酸分子是SEQIDNO:1的核酸序列，且编码SEQIDNO:2。11.根据权利要求10所述的核酸分子，所述核酸分子是SEQIDNO:1。12.根据权利要求10所述的核酸分子，包含编码信号肽序列的编码序列，所述编码序列可操作地连接到SEQIDNO:1的核酸序列，所述核酸序列编码SEQIDNO:2。13.根据权利要求12所述的核酸分子，其中所述信号肽序列为IgE信号肽序列SEQIDNO:13。14.根据权利要求13所述的核酸分子，所述核酸分子是SEQIDNO:7。15.根据权利要求1-14任一项所述的核酸分...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·B·韦纳，M·P·莫罗，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学托管会，
类型：发明
国别省市：美国;US