一种精制促皮质素的方法技术

一种精制促皮质素的方法，其特征在于：(1)将脑垂体前叶干粉，用酸溶液提取；(2)将提取液经交联羧甲基纤维素与阴阳离子交换树脂，吸附和洗脱；(3)冻干，得到促皮质素。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，技术方案是将脑垂体前叶干粉经提取，吸附、洗脱和冻干，得到促皮质素。促皮质素活性效价在55iu/mg以上。【专利说明】
本专利技术涉及生物
，具体地说涉及精制促皮质素的方法。
技术介绍
促皮质素(ACTH)是从猪、牛、羊等动物的脑垂体前叶中提取出来的一种多肽类药物，呈白色或淡黄色粉末，无臭，有吸湿性，易溶于水，溶于70%的丙酮和70%的乙醇中，在干燥和酸性溶液中较稳定，100°C加热活力不减，在碱性溶液中容易失活。促皮质素为39个氨基酸残基组成的直链多肽，N-端是丝氨酸，C-端是苯丙氨酸，无含硫氨基酸。种属差异仅仅表现在第25~33位上，I~24位的片段具有全部活性，第24位氨基酸之后的部分，不参与同受体的作用，仅能维持整个多肽结构的稳定性。在溶液中存在着高度的α-螺旋结构。被胃蛋白酶部分水解仍有活力。促皮质素主要用途有(I)用于诊断垂体肾上腺轴的储备功能，其合成的类似物ACTH(1-24)由于引起变态反应的危险性低而更多用于诊断；(2)用于肾上腺皮质功能正常但需用糖皮质激素治疗的疾病。但用此药的效果较难预测，因为作用的强弱依赖于个体肾上腺的反应性，且用法不够方便，价格较昂贵，因此不比直接用糖皮质激素有更多的优点；(3)肾上腺皮质功能减退症，对于原发性者(病变在肾上腺)ACTH无效，对于继发性者(垂体ACTH不足)需长期注射用药，一般不作为治疗药；(4)用于活动性风湿病、类风湿性关节炎、红斑性狼疮等胶原性疾患；(5)用于严重的支气管哮喘、严重皮炎等过敏性疾病及急性白血病、何杰金氏病等.生产促皮质素现有方法是酸丙酮法，该法操作简单，但效价不高于3单位/毫克；本方法是精制促皮质素法，效价高于55单位/毫克，使原料得到了，充分利用，减少浪费。
技术实现思路
本专利技术的目的是精制促皮质素，得到效价在55单位/毫克以上的促皮质素。本专利技术的技术方案是:(I)将脑垂体前叶干粉，用酸溶液提取；(2)将提取液经交联羧甲基纤维素与阴阳离子交换树脂，吸附和洗脱；(3)冻干，得到促皮质素。其包括如下步骤:(I)原料处理:将猪脑垂体取出后，立即投入丙酮中，浸泡脱水3次，每次约24小时，至垂体变硬为止，分离前、后叶，分别贮存于丙酮中备用。投料时，取出前叶，干燥，磨粉，过40~60目筛，得前叶干粉，水分应低于5% ；(2)提取:将垂体前叶干粉lKg，加入10~30L预热到45~65°C的0.1~Imol /L的醋酸溶液中，搅拌，缓慢滴加40%~60%硫酸溶液，调pH为1.5~2.5，加热使温度达65~85°C，保温10分钟，速冷至20°C以下，加入硅藻土(用0.1~lmol / L醋酸溶液浸泡过夜)0.4~0.6Kg，过滤，滤液在2~10°C保存；滤渣加0.1~lmol / L醋酸溶液5~25L，并用40%~60%硫酸溶液， 调pH至1.5~2.5，加热至65~85°C，保温5分钟，速冷20°C以下，加入硅藻土 0.2Kg助滤，滤液2~10°C保存；将滤液合并，用5%~20%氢氧化钠溶液调节pH2.5~3.5，先用布氏漏斗过滤，再用4号垂熔漏斗过滤至澄清，得提取液；(3)吸附:将提取液调节pH2.5~3.5后，加入25~70mL的吐温-80及100~400g的交联羧甲基纤维素,在2~10°C下,搅拌吸附10~15小时,静置10~15小时；(4)洗脱:虹吸除去上清液，沉淀用3号垂熔漏斗过滤，收集交联羧甲基纤维素；先用0.05~0.5mol / L醋酸溶液8~12L洗涤I~3次，再用纯化水8~12L洗涤I~3次，溶液温度10~20°C左右，抽干，再用0.1~0.3mol / L盐酸溶液500~1000mL洗脱I次，合并滤液；(5)精制:加入阴离子交换树脂1000~3000g，在2~5分钟内调节pH2.0~4.0以上，过滤，树脂用0.05~0.5mol / L醋酸溶液IL洗涤，洗、滤液合并，用0.5mol / L盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节PH2.5~3.5，2~10°C静置10~15小时；(6) 二次吸附:取上述洗脱液，加入5~IOmL吐温_80，搅拌均匀后加入交联羧甲基纤维素10~50g，在I~5°C搅拌吸附10~15小时，2~10°C静置10~15小时；(7) 二次洗脱:虹吸除去上清液，用4号垂熔漏斗过滤，收集交联羧甲基纤维素，分别用0.05~0.5mol / L醋酸溶液4L和纯化水4L，各洗涤I~3次，抽干，加入pH4~5.5、0.001~0.1mol / L醋酸铵溶液I~2L，于10~15°C下搅拌I~3小时，过滤抽干，用纯化水1.2L洗I次，再加pH6.0~7.5,0.05~0.5mol / L醋酸铵溶液I~2L，10~15°C下搅拌I~3小时，过滤后再用3L纯化水分2次洗涤，抽干，用0.1~0.5mol / L盐酸IL于25°C搅拌洗脱I~3小时，过滤，用0.1~0.5mol / L盐酸160mL洗涤I次，洗液并入洗脱液中；(8) 二次精制:洗脱液中加入阴离子交换树脂100~500g，调节pH至4左右，过滤。用0.1mol / L醋酸溶液150mL洗涤树脂I次，洗涤液并入滤液中，加732阳离子交换树脂50~100g，使pH调到2.0~4.0，过滤，用0.05~0.5mol / L醋酸溶液50mL洗涤树脂I次，洗涤液并入滤液中，冷冻干燥即得促皮质素。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明:实施例1(I)原料处理:将猪脑垂体取出后，立即投入丙酮中，浸泡脱水3次，每次约24小时，至垂体变硬为止，分离前、后叶，分别贮存于丙酮中备用。投料时，取出前叶，干燥，磨粉，过40~60目筛，得前叶干粉，水分应低于5% ；(2)提取:将垂体前叶干粉lKg，加入IOL预热到45°C的0.15mol / L的醋酸溶液中，搅拌，缓慢滴加45 %硫酸溶液，调pH为1.5，加热使温度达65°C，保温10分钟，速冷至20V以下，加入硅藻土(用0.15mol / L醋酸溶液浸泡过夜)0.4Kg，过滤，滤液在2~10°C保存；滤渣加0.15mol / L醋酸溶液10L，并用45%硫酸溶液，调pH至1.5，加热至65°C，保温5分钟，速冷20°C以下，加入硅藻土 0.2Kg助滤，滤液2~10°C保存；将滤液合并，用10%氢氧化钠溶液调节PH2.5，先用布氏漏斗过滤，再用4号垂熔漏斗过滤至澄清，得提取液；(3)吸附:将提取液调节pH2.5后，加入30mL的吐温-80及250g的交联羧甲基纤维素，在2~10°C下，搅拌吸附10小时，静置11小时；(4)洗脱:虹吸除去上清液，沉淀用3号垂熔漏斗过滤，收集交联羧甲基纤维素；先用0.2mol / L醋酸溶液9L分3次洗涤，再用纯化水9L洗涤3次，溶液温度10°C左右，抽干，再用0.15mol / L盐酸溶液650mL洗脱I次，合并滤液；(5)精制:加入阴离子交换树脂1500g，在3分钟内调节pH2.5以上，过滤，树脂用0.2mol / L醋酸溶液IL洗涤，洗、滤液合并，用0.5mol / L盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH2.5，2~10°C静置12小时；(6) 二次吸附:取上述洗脱液，加入IOmL吐温_80，搅拌均匀后加入交联羧甲基纤维素35g，在I~5°C搅本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种精制促皮质素的方法，其特征在于：(1)将脑垂体前叶干粉，用酸溶液提取；(2)将提取液经交联羧甲基纤维素与阴阳离子交换树脂，吸附和洗脱；(3)冻干，得到促皮质素。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘乃山，王议峰，刘翠珍，葛翠凤，
申请(专利权)人：青岛康原药业有限公司，
类型：发明
国别省市：