本发明专利技术提供了杨梅素在制备BMP-Smad通路小分子抑制剂中的应用。实验发现，小分子杨梅素能显著抑制Smad1/5/8的磷酸化水平，进而抑制住BMP-Smad介导的下游信号通路。基于其天然、绿色、安全的特性，杨梅素为因BMP-Smad紊乱引起的疾病治疗提供了可能，特别在相关疾病的临床药物开发有着潜在的应用。
【技术实现步骤摘要】
杨梅素在制备BMP-Smad通路小分子抑制剂中的应用(-)
本专利技术涉及杨梅素在制备BMP-Smad通路小分子抑制剂中的应用。(二)
技术介绍
骨形态发生蛋白(bone morphogehetic proteins, BMPs)是转化生长因子-ρ(transforming growth factor-β , TGF-β )超家族的一员，最初从矿化的骨骼中提取出来，并发现其能够诱导异位骨的生长。BMPs是分泌型蛋白，存在于细胞外，并且可以在血清中检测到。细胞外的BMPs与细胞膜上的BMP受体(BMPR)结合后导致受体激酶的激活，活化的受体会磷酸化细胞内的Smadl/5/8,其与Smad4形成复合物后进入到细胞核内，结合到DNA序列上，从而调节BMP靶基因的转录。BMP-Smad信号通路受到多种机制的精细调节，尤其是受到一些负反馈调节作用，如受体的内吞，Smads的去磷酸化和信号分子的降解等。BMP-Smad信号通路调节干细胞的自我更新和分化，细胞的增殖、迁移和凋亡，以及胚胎发育和出生后组织体内稳态的维持。BMP-Smad信号通路在肿瘤发生中也起着十分重要的作用。最近越来越多的人和小鼠的遗传学研究已证明，BMP-Smad的自我平衡在机体的生理过程中扮演着重要的角色，如在骨代谢、干细胞、神经细胞、铁代谢以及肿瘤的形成中起着重要作用。因此，无论是增强或抑制BMP-Smad都有着重要的生理意义及应用，尤其是BMP-Smad通路的小分子抑制剂在干细胞研究、骨骼重塑治疗、异位骨化以及铁代谢治疗方面有着潜在的意义。(三)
技术实现思路
本专利技术目的是提供杨梅素在制备BMP-Smad通路小分子抑制剂中的应用，为防治BMP-Smad紊乱引起的疾病提供新的药物。本专利技术采用的技术方案是:杨梅素在制备BMP-Smad通路小分子抑制剂中的应用。杨梅素是一种天然的黄酮醇，是存在于许多水果、蔬菜、浆果及药材等植物中的黄酮类化合物。杨梅素是红葡萄酒中的酚类化合物之一。杨梅素可抗氧化。体外研究表明，高浓度的杨梅素可降低低密度脂蛋白胆固醇。芬兰的一项研究发现，高杨梅素摄入的人群其前列腺癌的发生率较低。一项历时8年的研究发现，山柰酚、槲皮素和杨梅素可降低吸烟者患胰腺癌的风险。目前，杨梅素被广泛应用于医药、食品、保健品和化妆品。美国保健品药FYI使用杨梅素用作治疗预防关节炎和各种炎症，尤其对怀孕妇女和哺乳期婴儿适合使用。此前，在人源肝癌细胞H印G2中，专利技术人发现小分子杨梅素能显著抑制BMP-Smad通路下游基因铁调素Hepcidin的表达。基于此，进一步研究发现，杨梅素能在体外显著降低Smadl/5/8信号通路的磷酸化水平， 进而抑制住下游通路基因的转录，并呈现较强的时间、剂量依赖性。通过BMP-Smad信号通路激动剂BMP6的刺激，实验发现杨梅素能显著抑制BMP6引起的Smadl/5/8的磷酸化水平的增加。此外，通过荧光素酶报告基因手段，实验发现杨梅素能够显著抑制BMP6对BMP-Smad通路下游通路基因的转录。综上，小分子杨梅素能显著抑制Smadl/5/8的磷酸化水平,进而抑制住BMP-Smad介导的下游信号通路。基于其天然、绿色、安全的特性，杨梅素为因BMP-Smad紊乱引起的疾病治疗提供了可能，特别在相关疾病的临床药物开发有着潜在的应用，如抑制因铁调素Hepcidin上升引起的铁代谢紊乱疾病；抑制产后骨骼的再生成疾病、抑制异位骨化如进行性肌肉骨化症等骨骼性疾病；促进如神经元干细胞、心肌干细胞等分化及其在干细胞再生医学中的应用；以及其在肿瘤方面的应用都有着重要的意义。具体的，所述杨梅素可用于制备防治BMP-Smad紊乱引起的疾病的药物。更为具体的，所述杨梅素可用于制备防治铁代谢紊乱疾病、抑制产后骨骼的再生成疾病、或者进行性肌肉骨化症等的药物。本专利技术的有益效果主要体现在:本专利技术提供了杨梅素在制备BMP-Smad通路小分子抑制剂中的应用，基于其天然、绿色、安全的特性，为因BMP-Smad紊乱引起的疾病治疗提供了可能，特别在相关疾病的临床药物开发有着潜在的应用。(四)【附图说明】图1为杨梅素显著抑制人肝癌细胞HepG2细胞Smadl/5/8的磷酸化水平；(A)不同浓度的杨梅素处理H印G2细胞，western blot检测BMP-SMAD通路蛋白变化水平，处理时间12小时；(B)浓度为50 u g/mL杨梅素从Oh至24h处理H印G2细胞对Ifepcidin表达通路相关蛋白的影响，western blot检测BMP-SMAD通路蛋白水平；图2为杨梅素显著抑制BMP6诱导的BMP-Smad信号通路下游基因的表达；A:杨梅素(50 ii g/mL)和BMP6 (10ng/mL)共处理H印G2细胞12小时，对H印G2细胞Hepcidin mRNA表达的抑制效果；B:杨梅素(0~IOOii g/mL)和BMP6 (10ng/mL)共处理H印G2细胞12小时，对HepG2细胞Hepcidin表达的抑制效果，western blot分析磷酸化Smadl/5/8 ；图3为杨梅素显著抑制BMP6诱导的BMP-Smad信号通路下游基因的转录；不同浓度的杨梅素(O-lOOii g/mL)和BMP6 (10ng/mL)共处理H印G2细胞24小时，荧光素酶报告基因检测HAMP基因的转录情况。(五)【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此:实施例1:1.材料和方法1.1实验原料制备Myricetin购自SIGMA公司。溶于无菌二甲基亚砜DMSO中，配置成所需浓度。人源BMP6购自R&D Systems公司。1.2细胞株人肝癌细胞株IfepG2及人肾脏细胞株HEK293由中国科学院上海生命科学院细胞库提供。培养条件:含10% FBS (GIBCO)的DMEM高糖型培养基(GIBCO)，37°C、5%C02饱和湿度培养箱。1.3RNA 提取和 Realtime-PCRTrizol (Life Technologies)法提取细胞和组织的RNA,具体操作按说明书进行。参考其次文献，NanodroplOOOSpectrophotometer 上检测 RNA 纯度(0D260/0D280 ~1.9 ~2.1)及 RNA 浓度(ng/μ 1)，调整 RNA 浓度到 I μ g/μ I。2.0 μ g RNA 经 DNase (Promega)处理后，M-MLV 反转录酶(Promega)和 Oligo (dT)18primer (Takara Bio Inc.)进行反转录。CFX96Real_Time System (Bio-Rad)中进行 Realtime PCR,检测体积为 IOul,试剂米用iQ SYBR Green Supermix (Bio-Rad),引物序列如下:HAMP:forward CAGCTGGATGCCCATGTTCreverse CAGCAGCCGCAGCAGAA ；ACTIN:forward CACGGCATCGTCACCAACTreverse CACGCAGCTCATTGTAGAAGGT ；1.4Luciferase突光素酶报告基因检测按照FuGENE? HD Transfecti本文档来自技高网...
【技术保护点】
杨梅素在制备BMP?Smad通路小分子抑制剂中的应用。
【技术特征摘要】
1.杨梅素在制备BMP-Smad通路小分子抑制剂中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述杨梅素用于制备防治BMP-Smad紊乱引起的疾病的药物。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述杨梅素用...
【专利技术属性】
技术研发人员：王福俤，穆明道，伍爱民，杜晓利，安鹏，吴谦，邵丹丹，沈筱筠，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：
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