一种化妆品微生物的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种化妆品种微生物的检测方法的改进。用SCDLP增菌液代替生理盐水稀释样品，进行菌落总数、霉菌和酵母菌检测，SCDLP增菌后，用卵磷脂吐温80营养琼脂培养，对粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌筛选检测，结合生化酶反应进行鉴定。改良法操作简便快捷，适合化妆品日常微生物的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
—种化妆品微生物的检测方法专利
本专利技术涉及化妆品微生物检验
，具体的说，本专利技术涉及一种化妆品中细菌的检验
。
技术介绍
随着生活水平的不断提高，化妆品已经成为人们日常生活中不可或缺的必需品。化妆品的种类与数量与日俱增，同时其卫生质量倍受管理部门和消费者的重视，而化妆品微生物学指标(菌落总数、霉菌和酵母菌、粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌)是日常化妆品检测的必检指标(除少数含有75%乙醇和染发产品以外)。 化妆品是人们的日常用品，化妆品因原料中存在油脂、蛋白质、淀粉、维生素、水分等众多营养性成分，为微生物的滋生和繁殖提供了良好的营养环境。微生物会将化妆品中的营养成分代谢分解，致使化妆品腐败变质，不仅使化妆品的色、香、味及剂型发生变化，而且可能对使用者的健康造成严重危害。因此，化妆品中一些有害微生物的分离与检测是当前化妆品卫生质量控制的重要问题。随着我国经济的快速发展，人民的生活水平不断提高，对化妆品的需求量也越来越大。人们在使用化妆品的同时，对化妆品卫生指标也越来越重视。由于一些工厂对化妆品生产过程中的微生物标准控制得不好，造成上市的部分化妆品细菌含量严重超标，甚至检出了致病菌。这种消息常见诸报端，引起了消费者的恐慌。如何控制好微生物指标，确保生产出卫生指标合格的产品，更好地为广大消费者服务，是摆在化妆品制造厂商面前一个急需解决的重要课题。
技术实现思路
为了使化妆品微生物检测进一步简单快捷，本专利技术针对目前《化妆品卫生规范》方法中对应的检测方法，对微生物的检测方法进行了如下的改良简单方便，更利于实际应用。本专利技术提供了对化妆品中微生物的检验方法进行了改进。本专利技术的技术方案:针对目前《化妆品卫生规范》方法中对应的检测方法，结合日常检测，我们发现，粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌在卵磷脂吐温80营养琼脂培养基上菌落形态比较典型，同时也比较好辨认，为了使化妆品微生物检测进一步简单快捷，本专利技术用S⑶LP增菌液代替生理盐水直接稀释样品，用S⑶LP增菌液代替乳糖胆盐对粪大肠菌群增菌，将SCDLP增菌液增菌后的样品，转种在卵磷脂吐温80营养琼脂培养基上分离，直接在此培养基中挑取可疑的粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌菌落进行革兰氏染色和进一步的生化鉴定，省略伊红美兰、乙酰胺和BP三种培养基对粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌三种致病菌的分离。卵磷脂吐温80营养琼脂不含有抑制细菌生长的物质，是广谱培养基，因此，粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌，在卵磷脂吐温80营养琼脂上均应生长良好。本文尝试SCDLP增菌后用卵磷脂吐温80营养琼脂平板对三种致病菌进行分离，试验表明三种菌在卵磷脂吐温80营养琼脂平板上均生长良好，并伴有典型菌落特征。有益效果:本专利技术化妆品中微生物的检验方法与现有技术相比，用增菌液代替生理盐水以及糖胆盐对粪大肠菌群增菌，将增菌后的样品，转种在卵磷脂吐温80营养琼脂培养基上分离，直接在此培养基中挑取可疑的菌群、菌落进行革兰氏染色和进一步的生化鉴定，省略了对粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌三种致病菌的分离。改进后的检验法简单明了，可操作性强，大大降低了分析成本，方法简单，无复杂步骤，易于推广应用，可以用于化妆品的日常快速检测。下面，结合实施例对本专利技术化妆品中微生物的检验方法的技术特征作进一步的说明。I备检液制备 样品1:10备检液无菌操作称取亲水性样品称IOg(ml) ±0.1g(ml)加到90ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中；疏水性样品称10g(ml) ±0.1g(ml)加5ml经灭菌的吐温80，加到75mlS⑶LP增菌液的玻璃瓶中，经充分混匀制成1:10的样品制备液。样品1:100备检液吸取以上样品备检液10ml，加到90ml S⑶LP增菌液的稀释瓶中，制成1:100的样品备检液。阳性对照浓度为IO2的大肠埃希菌标准菌株AMMS8099和白色念珠菌ATCC10231作为菌落总数和霉菌和酵母菌 阳性对照。大肠埃希菌AMMS8099、金黄色葡萄球菌NICPBP26112、铜氯假单胞菌NICPBP10211标准菌株，菌液浓度为IO1混合液IOml加入90mlSCDLP增菌液中作为致病菌的阳性对照。2菌落总数检测 吸取1:10和1:100备检液及阳性对照液各2ml分别注入标识好的2块无菌平皿中，每块平皿注入Iml ;另取2块平皿做空白对照，将平皿倾入卵磷脂吐温80营养琼脂，置(36± I) V恒温生化培养箱培养48h后进行菌落计数。3霉菌和酵母菌检测 1:10和1:100备检液及阳性对照液各2ml分别注入标识好的2块无菌平皿中，每块平皿注入Iml ;另取2块平皿做空白对照，将平皿倾入虎红琼脂，置(28±1)°C恒温生化培养箱培养48h后观察结果，培养72h后进行菌落计数。4粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的检测 4.1增菌将上述1:100增菌液、空白对照和阳性对照置于(36±1) °C恒温生化培养箱，增菌24h备检。4.2转种将培养后增菌液在已制备好的卵磷脂、吐温80营养琼脂平板上进行细菌划线分离，置(36± I) °C培养24h。转种后若无细菌生长,则报告每克样品中未检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌；若有细菌生长，则对所有形态不同的菌落进行革兰氏染色，若发现革兰阴性杆菌和革兰阳性球菌者，进一步鉴定。4.3鉴定方法 a.粪大肠菌群的鉴定:粪大肠菌群在卵磷脂吐温80营养琼脂平板上呈中等大小、灰白的、半透明、中间凸起有菌心，湿润菌落；革兰氏染色为无芽孢阴性杆菌。将可疑菌落细菌分别接种至蛋白胨水(靛基质试验)和EC肉汤管中，置(44±0.5)1:培养2411。靛基质试验阳性，EC肉汤管产气,则报告检出粪大肠菌群。 b.铜绿假单胞菌的鉴定:铜绿假单胞菌在卵磷脂吐温80营养琼脂平板上菌落比粪大肠菌群小，呈白色、不透明较湿润，可产生绿色的绿脓菌素；革兰氏染色为阴性杆菌，将可疑菌进行五项生化反应。氧化酶试验、绿脓菌素试验为阳性；或液化明胶、硝酸盐还原试验和42°C生长试验三者皆为阳性时，均报告检出铜绿假单胞菌。c.金黄色葡萄球菌的鉴定:由于有卵磷脂存在，金黄色葡萄球菌在卵磷脂吐温80营养琼脂培养基上菌落周围可产生与Baird Parker平板相似的透明晕圈，革兰氏染色为阳性葡萄球菌。将可疑菌进行甘露醇发酵和血浆凝固酶试验。经证实为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，即报告检出黄金色葡萄球菌。5 结果1:10及1:100稀释液无菌落生长时，菌落总数及霉菌和酵母菌结果报告为<10 CFU/go没有致病菌检出时，报告为未检出。检测样品中有3件样品菌落总数超标，4件样品菌落总数及霉菌和酵母菌同时超标。1件样品菌落总数及霉菌和酵母菌、粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌均超标。对样品不合格率进行X 2检验，无统计学意义(P > 0.05)。空白对照和阳性对照均符合试验要求。从上述结论我们可以看出，用S⑶LP增菌液代替生理盐水稀释样品进行菌落总数及霉菌和酵母菌检测时发现:同一样品采用SCDLP增菌液为稀释液，菌落总数在数值上稍高于生理盐水。经分析认为，大多数的化妆品中均含有不同种类和剂量的防腐剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化妆品中微生物的检验方法，通过SCDLP增菌液代替生理盐水稀释样品，进行菌落总数、霉菌和酵母菌检测，SCDLP增菌后，用卵磷脂吐温80营养琼脂培养，对粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌筛选检测，并结合生化酶反应进行鉴定。

【技术特征摘要】
1.一种化妆品中微生物的检验方法，通过S⑶LP增菌液代替生理盐水稀释样品，进行菌落总数、霉菌和酵母菌检测，SCDLP增菌后，用卵磷脂吐温80营养琼脂培养，对粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌筛选检测，并结合生化酶反应进行鉴定。2.如权利要求1所述的化妆品中微生物的检验方法，其特征在于，所述的1:10备检液制备方法为，无菌操作条件下，称取亲水性样品10g(ml) ±0.1g(ml)加到90ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，疏水性样品称IOg(ml) ±0.1g(ml)加 5ml经灭菌的吐温80，加到75ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀制成。3.如权利要求1所述的化妆品中微生物的检验方法，其特征在于，所述菌落总数的检测方法为倾入卵磷脂吐温80营养琼脂，置(...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭狄，
申请(专利权)人：中山鼎晟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：