蛋白质唾液酸化的快速和准确分析制造技术

本发明专利技术涉及用于分析糖蛋白质的唾液酸化的方法和试剂盒。糖蛋白质样品在三个条件下分别孵育：含β-半乳糖苷酶，含β-半乳糖苷酶+α-唾液酸酶，不含酶。酶处理后，用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法（HPAEC?PAD）定量测定样品中总的半乳糖，非唾液酸化的半乳糖和在培养基中的外源半乳糖。所述值的测定可以推导出糖蛋白质的唾液酸化的百分比。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白质唾液酸化的快速和准确分析
本专利技术描述的是用于分析蛋白质唾液酸化的分析方法。
技术介绍
许多蛋白质行使它们的生物学功能需要糖基化。通常，末端，“加帽”，糖基链的碳水化合物是唾液酸残基。唾液酸包括一个N-和O-连接的神经氨酸家族。N-连接的唾液酸通过将乙酰基或羟乙酰基部分连接到神经氨酸的氨基酸残基而形成，分别形成N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)和N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)。如果神经氨酸的氨基被羟基基团取代，这会产生3-脱氧-D-甘油-D-半乳糖-2-非酮糖(nonulosonic)酸(KDN)。O-连接的唾液酸是用甲基，乙酰基，乳酰基，硫酸，或磷酸基团取代Neu5Ac，Neu5Gc,或KDN的一个或多个羟基而形成。因此，存在大量且不同种类的唾液酸。此外，一般来说，由于这些修饰的许多生物学功能，有相当大的兴趣来分析蛋白质唾液酸化作用。唾液酸化作用对药代动力学和蛋白质生物疗法的功效是重要的。因此，已研发了一些分析方法用来评估糖蛋白的唾液酸含量。例如，基于抗体的测定方法可用于确定特定的碳水化合物部分。末端唾液酸残留可以从目标糖蛋白进行酶分离并通过HPLC分析。然而，这本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于测定蛋白质的唾液酸含量的方法，其特征在于，该方法包括：（a）制备用于分析的蛋白质；（b）酶处理制备的蛋白质，包括：将制备的蛋白质分成多个蛋白质样品，包括（i）至少一个蛋白质样品作为培养基样品（反应A）；（ii）在至少一个蛋白质样品中加入至少β?半乳糖苷酶（反应B）；（ⅲ）在至少另一个蛋白质样品中加入至少β?半乳糖苷酶和α?唾液酸酶（反应C）；并孵育多个蛋白质样品；以及（c）利用HPAEC?PAD色谱法分析多个蛋白质样品；（d）测定多个蛋白质样品的碳水化合物含量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.14 US 61/507,6431.一种用于测定蛋白质的唾液酸含量的方法，其特征在于，该方法包括: (a)制备用于分析的蛋白质； (b)酶处理制备的蛋白质，包括:将制备的蛋白质分成多个蛋白质样品，包括 (i)至少一个蛋白质样品作为培养基样品(反应A)； (ii)在至少一个蛋白质样品中加入至少半乳糖苷酶(反应B)； (iii)在至少另一个蛋白质样品中加入至少半乳糖苷酶和α-唾液酸酶(反应C);并孵育多个蛋白质样品；以及 (c)利用HPAEC-PAD色谱法分析多个蛋白质样品； Cd)测定多个蛋白 质样品的碳水化合物含量。2.根据权利要求1所述的方法，其中，进一步包括: Cf)利用HPAEC-PAD色谱法分析多个阳性和阴性对照； (g)利用HPAEC-PAD色谱法分析多个标准品；以及 (h)将多个蛋白质样品与多个标准品和对照进行比较。3.用于测定蛋白质的唾液酸含量的HPAEC-PAD色谱法的应用，其特征在于，包括: (a)制备用于分析的蛋白质； (b)酶处理制备的蛋白质，包括:将制备的蛋白质分成多个蛋白质样品，包括 (i)至少一个蛋白质样品作为培养基样品(反应A)； (ii)在至少一个蛋白质样品中加入至少半乳糖苷酶(反应B)； (iii)在至少另一个蛋白质样品中加入至少半乳糖苷酶和α-唾液酸酶(反应C);并孵育多个蛋白质样品；以及 (c)利用HPAEC-PAD色谱法分析多个蛋白质样品； ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王子豪，J·斯隆，K·维，
申请(专利权)人：基立福有限公司，
类型：
国别省市：