用于固定配体的新型粘合表面制造技术

本发明专利技术的主题是一种复合物，包含：具有至少两个表面的载体，其中之一具有粘合剂涂层，至少一种固定在该粘合剂表面上的配体。在本发明专利技术框架内实现的配体选自蛋白质、肽、抗体、核酸、糖或寡糖、毒素、杀虫剂、激素、除草剂、杀真菌剂和神经递质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于固定配体的新型粘合表面
本专利技术涉及包含固定在涂布于载体表面之一(enduit sur I’ une des faces dusupport)的粘合剂上的至少一种配体的新型复合物(complexe)。
技术介绍
使用固定在载体上的配体是常见的，尤其在诊断试验领域和在生物工艺学领域。这些系统允许使用大量的分子，如在用于DNA或RNA分析的芯片的情况下。已经广泛描述了配体在载体上的固定(Sambrook等人，1989)。该固定方法被证实是困难、昂贵、漫长和部分有效的。它们基于吸附、离子或共价键合、或在凝胶或聚合物类型的基质中捕集配体。已经开发了方法，由此专利申请WO 2005/114417描述了使用施加到粘性载体上的球状蛋白层，随后向球状蛋白的层上施加交联剂，该蛋白质催化剂通过与交联剂的反应固定在该表面上。文献WO 03/072 752描述了能够以干燥形式、高点密度固定蛋白质并具有高信噪比的在带有聚偏二氟乙烯(PVDF)的疏水性和聚合层的刚性基底上制得的蛋白质芯片。
技术实现思路
本专利技术能够通过使用包含具有至少两个表面且其中一个表面具有粘合剂和固定在所述粘合表面上的至少一种配体的涂层的复合物克服了上述缺陷。在本专利技术的上下文中，沉积在该粘合表面上的配体可以具有蛋白质性质:蛋白质、寡肽、多肽、抗体，具有核酸性质:DNA、RNA、寡核苷酸(即引物)，其还有可能是糖(寡糖或多糖)或小分子，其任选是合成的，如毒素、杀虫剂、激素、除草剂、杀真菌剂或神经递质。由此，当配体为蛋白质类型时，无需对粘合表面进行预处理。所用载体可以由玻璃或塑料板、聚酯膜或可以用粘合剂涂布的任何其它材料组成。在本专利技术的特定实施方案中，该载体在其两个表面上都具有粘合剂涂层(图1)。粘合剂是普通粘性聚合物，其可以具有活化表面。可以提及的实例包括非反应性粘合剂，如苯乙烯-丁二烯共聚物、丁腈橡胶、聚(乙酸乙烯酯)及其聚合物、聚乙烯醇缩乙醛，压敏粘合剂如聚丙烯酸酯、硅橡胶、聚(乙烯醚)，或者反应性粘合剂如双组分聚氨酯粘合剂、环氧粘合剂、厌氧性丙烯酸类或氰基丙烯酸酯。例如，已经使用下列材料:-3M 7966WDL (粘合剂 3M? 200MP)-5 Stars Double Sided Display Tape Polypropylene,3M?0ptically Clear Overlaminating Film 76991，Ultra Clear Removable Overlaminating Film 76991。选择该配体以使得与规定的抗配体(antiligand)特异性相互作用。取决于基底的性质和固定方式(通过亲合力、共价等等)。可以将该配体官能化以获得更好的固定。各种配体可以同时基质化(matrixed)到同一载体上并且该基质的设计可以进一步包括相同探针的若干复制品(图1)。对于蛋白质配体，无需对粘合剂表面进行预处理，配体可以直接沉积(点样步骤(etape de spotting))到该表面上。对于寡核苷酸配体(ligands oligonucl6otidiques),可以进行使用多官能交联齐U(优选戊二醛)的表面预处理步骤以改善固定的配体的活性。由此，根据另一方面，本专利技术的主题是包含载体的复合物，所述载体的表面之一上具有粘合剂涂层，所述粘合表面例如通过交联剂的作用被官能化。在一种特定实施方案中，该配体也被官能化。本专利技术的主题还是制备上述复合物的方法。在本专利技术的特定实施方案中，配体在缓冲液，例如盐水缓冲液(根据用作配体的生物分子的性质选择)中稀释并使用例如非接触型压电点样仪或通过将涂布的载体浸溃在包含该配体的溶液中来沉积在涂布的载体的表面上。当配体溶液(ligand en solution)以液滴形式沉积时,沉积液滴的尺寸以及由此在表面上形成的斑点的尺寸(50-1000微米)、斑点密度(每平方毫米1-25个)以及基质的格式可以随着期望的应用领域和生物分子的性质而改变。官能化载体的步骤可以在配体沉积前进行，例如用交联剂如戊二醛处理该粘合表面。取决于所述应用领域，可以在沉积该配体和任选在室温下干燥的步骤后进行后处理步骤。该后处理步骤可以由加热(例如在163°C下I分钟)、洗涤(盐水缓冲液等等)和/或饱和(以减少背景噪音)该复合物组成。本专利技术的复合物可用于制备尤其用于分析的设备。此类设备包含基本刚性的载体(support sub s tant i e 11 ement rigide),所述载体包含至少一个限定(d6limitant)包含至少两个孔口(ouvertures)的内部腔室的孔,所述孔口的至少一个被本专利技术的复合物密封。此类设备可以取通常用于诊断试验或生物工艺学领域的12-、24_或96-孔板形式或微流体网络形式。制备此类设备的方法包括将本专利技术的复合物密封到载体上以便封闭该腔室的至少一个所述孔口，该粘合表面包含朝向该腔室内部取向的配体。用配体改性的该粘合表面可以容易地与用于产生准备使用的分析工具的各种类型材料组装(图2和3)。例如，粘性载体可以与无底96孔板组装以产生常规用于分析目的的固体有底板。该粘性载体也可以与各种微流体网络连接，所述微流体网络由通道、流动池或混合器组成。组装的微流体部件可以由任何可用于此类应用的材料组成(玻璃、硅、塑料和其它聚合物材料)。本专利技术的主题还是检测和/或定量抗配体的方法，包括使用如上所述的设备或复合物。在使得配体与抗配体之间相互作用的条件下放置所述复合物或设备以便与可能含有抗配体的样品接触，任选加入标记的检测分子，并最后检测和/或定量由配体与抗配体之间相互作用产生的信号。在此类方法中，抗配体可以源自于生物样品如血清、血液或血浆，环境样品如水、气体、空气或土壤的样品，或者来自于农产品行业的样品如食品。除了由配体/抗配体相互作用组成的关键步骤之外，可以根据用于标记和检测该相互作用的策略本身的要求增加一个或多个步骤(图4)。在这种情况下，例如，如果需要附加的标记步骤(例如，在生物素组靶与抗生蛋白链菌素分子之间的相互作用)，可以采用两种策略:-两步骤方案:I)培育抗配体溶液(配体/抗配体相互作用)；2)培育标记的分子的溶液(例如共轭的抗生蛋白链菌素);-一步骤方案:I)培育含有抗配体与标记的分子的单一预混合溶液。根据应用和要求，可以使用各种检测方法，例如:-使用标记的比色法，例如:-采用碱性磷酸酶/BCIP的指示剂体系；-米用辣根过氧化酶-ABTS的指不剂体系；-金粒子，等等；-使用如下的标记的化学发光法:-辣根过氧化酶-具有化学发光底物的体系；-碱性磷酸酶-具有化学发光底物的体系。也可以使用放射线照相术或放射性的检测和/或定量。附图描述胤1:本专利技术的复合物的示意图，显示了(A)载体(S)，其一个表面涂有粘合剂(ad)，配体(L)固定在粘合剂上；(B)载体(S)，其两个表面涂有粘合剂(ad)，配体(L)固定在两个表面之一上。Ml:本专利技术的设备的组件的示意图(A)微流体网络，(B) 96-孔板。M3:本专利技术的微流体网络的组件的示意图。S1:检测样品中抗配体的过程的示意图。表示检测信号的强度与样品中寡核苷酸(抗配体)浓度之间相互关系的曲线。Se:表示检测信号的强度与样品中CRP (抗配体)浓度之间相本文档来自技高网...

【技术保护点】
复合物，包含：?具有两个表面的载体，其中一个表面具有粘合剂涂层，?至少一种配体，所述固体固定在该粘合表面上，其特征在于粘合剂选自压敏粘合剂如聚丙烯酸酯、硅橡胶、聚乙烯醚，或非反应性粘合剂如苯乙烯?丁二烯共聚物、丁腈橡胶、聚(乙酸乙烯酯)及其聚合物、聚乙烯醇缩乙醛，或反应性粘合剂如双组分聚氨酯粘合剂、环氧粘合剂、厌氧性丙烯酸类或氰基丙烯酸酯。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.01.14 FR 11/503081.复合物，包含: -具有两个表面的载体，其中一个表面具有粘合剂涂层， -至少一种配体， 所述固体固定在该粘合表面上，其特征在于粘合剂选自压敏粘合剂如聚丙烯酸酯、硅橡胶、聚乙烯醚，或非反应性粘合剂如苯乙烯-丁二烯共聚物、丁腈橡胶、聚(乙酸乙烯酯)及其聚合物、聚乙烯醇缩乙醛，或反应性粘合剂如双组分聚氨酯粘合剂、环氧粘合剂、厌氧性丙烯酸类或氰基丙烯酸酯。2.如权利要求1所要求保护的复合物，其特征在于该配体选自蛋白质、肽、抗体、核酸、糖或寡糖、毒素、杀虫剂、激素、除草剂、杀真菌剂和神经递质。3.如前述权利要求之一所要求保护的复合物，所述粘合表面被官能化，例如通过交联剂的作用。4.如权利要求1至3之一所要求保护的复合物，其中该配体被官能化。5.如前述权利要求之一所要求保护的复合物，其特征在于粘合剂还涂布在该载体的另一表面上。6.包含刚性载体的分析设备，所述载体包含至少一个限定包含至少两个孔口的内部腔室的孔，该腔室的所述孔口的至少一个被如权利要求1至5任一项所要求保护的复合物密封。7.如权利要求6所要求 保护的设备，选自分析板，例如12-、24_或96-孔板或微流体网络。8.如权利要求1至5所要求保护的复合物的用途，用于制备如权利要求6和7之一所要求保护的分析设备。9.制备如权利要求1至5之一所要求保护的复合物的方法，包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：本杰明·科尔吉耶，加埃利·莱戈夫，席琳·曼东，洛奇·布卢姆，克利斯朵夫·马奎特，
申请(专利权)人：国家科学研究中心，克劳德贝尔纳大学，法国里昂国立应用科学院，
类型：
国别省市：