本发明专利技术名称为“抗CiP抗体在早期类风湿关节炎诊断中的应用”。本发明专利技术提供了一种CiP及其类似物用于早期RA检测的方法。这种多肽抗原可特异性的结合早期RA患者体内的特异性抗体，具有很高的敏感性和特异性；且在IgM-RF或抗CCP抗体以及AKA、APF检测结果为阴性的早期RA患者中具有较高阳性率，有利于对IgM-RF抗体阴性或抗CCP抗体阴性患者的辅助诊断。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术名称为“抗CiP抗体在早期类风湿关节炎诊断中的应用”。本专利技术提供了一种CiP及其类似物用于早期RA检测的方法。这种多肽抗原可特异性的结合早期RA患者体内的特异性抗体，具有很高的敏感性和特异性；且在IgM-RF或抗CCP抗体以及AKA、APF检测结果为阴性的早期RA患者中具有较高阳性率，有利于对IgM-RF抗体阴性或抗CCP抗体阴性患者的辅助诊断。【专利说明】抗CiP抗体在早期类风湿关节炎诊断中的应用
本专利技术涉及抗CiP抗体在检测早期类风湿关节炎中的应用。一、
技术介绍
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以多关节侵蚀性滑膜炎症为特征的系统性自身免疫病，患病率为0.33%，我国约有500万患者，且多为中青年女性，未经正规治疗致残率达75%。我国在2006年进行的第二次全国残疾人抽样调查中，致残性关节病在导致肢体残疾的21类病因中排第2位(20.1%)，仅次于脑血管病(20.6%)，其中79.4%为RA致残。RA病情进展迅速，骨质破坏在第I年中最快，因此针对早期RA的准确诊断至关重要。近年来的大量研究表明，瓜氨酸化修饰在RA自身抗原致病机制中具有重要意义，瓜氨酸化抗原作为RA最特异的一类抗原介导了 RA自身免疫反应和抗体的产生。目前，RA的病因仍不明确，病原体的抗原可能由于存在与人体自身蛋白相似的结构，通过分子模拟机制引发RA的自身免疫反应。多项研究发现，RA发病和EB病毒、细小病毒、人类单纯孢疹病毒等病原密切相关。本专利技术人的研究发现，RA患者体内存在高滴度的针对人乳头瘤病毒CiP抗原肽的自身抗体，该抗体可通过一些较为简便的免疫学检测方法(如:酶联免疫吸附法)检测出来。并且对早期RA患者具有很高的敏感性和特异性。二、专利技术概述本专利技术的目的之一是提供能够有效检测早期RA的特异性抗原——CiP抗原肽。本专利技术的另一目的是提供了 CiP及类似物抗体用于检测早期RA的方法。本专利技术所用术语“CiP” 指具有共同序列 KRGNTXGRGRGRQGRAGSSG (Lys-Arg-Gly-Asn-Thr-Cit-Gly-Ary-Gly-Arg-Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Ala-Gly-Ser-Ser-Gly 甘胺酸-天冬酰胺-苏氨酸-瓜氨酸-甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-精氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-精氨酸-丙氨酸-甘氨酸-丝氨酸-丝氨酸-甘氨酸)的氨基酸、多肽类似物及蛋白 。我们在对人乳头瘤病毒蛋白的修饰及其抗原性的研究中发现了一段含有瓜氨酸的富含R-G序列的抗原肽序列。进一步研究发现，RA患者体内存在高滴度的针对该序列的抗体，命名为抗CiP抗体，该抗体可通过一些较为简便的免疫学检测方法(如:间接酶联免疫吸附法)检测出来，并且对早期RA的诊断具有很高的敏感性和特异性。本专利技术目是提供有效检测早期RA特异性抗原的检测方法，并应用于早期RA的诊断。基于以上研究，本专利技术人将CiP的19个氨基酸的多肽KRGNI1GRGRGRQGRAGSS( 即Lys-Arg-Gly-Asn-Thr-Cit-Gly-Ary-Gly-Arg-Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Ala-Gly-Ser-Ser-Gly 赖氨酸-精氨酸-甘胺酸-天冬酰胺-苏氨酸-瓜氨酸-甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-精氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-精氨酸-丙氨酸-甘氨酸-丝氨酸-丝氨酸-甘氨酸)做为抗原，用ELISA的方法检测早期RA，系统性红斑狼疮，干燥综合征，骨关节炎，皮肌炎/多发性肌炎，系统性硬化症及正常人血清中的抗CiP抗体，从而达到通过血清学的方法诊断早期RA的目的，为早期的临床诊断提供客观的实验室依据。本专利技术的抗抗体多肽及其类似物可通过酶联免疫吸附法对RA患者进行检测，其检测方法为本领域技术人员所熟知的。同时，检测的CiP抗体类型可为IgG型、IgA型、IgM型或其它类型的免疫球蛋白。本专利技术所述的CiP可以用本领域人员所熟知的固相合成法方法得到。【专利附图】【附图说明】图1.酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗CiP抗体原理示意图。图2.注:抗Cit-HPV47_E2345_362抗体不同亚型在RA、其他风湿性疾病患者及健康对照滴度(AU值)比较。由图可见，ELISA方法检测抗CiP抗体(IgG、IgM、IgA)的AU值在早期RA血清中的平均水平明显高于其它风湿免疫病和正常人对照组$均< 0.05或< 0.01)。【具体实施方式】实施例1抗CiP的设计及合成选取HPV47型转录调节蛋白E2蛋白的第345-362位氨基酸序列(E2345—362)，以瓜氨酸替代其第348位上的精氨酸，合成CiP抗原多肽，以固相合成法合成，高效液相层析法进行纯化。其序列如下:KRGNTXGRGRGRQGRAGSSG(即 Lys-Arg-Gly-Asn-Thr-C`it-Gly-Ary-Gly-Arg-Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Ala-GIy-Ser-Ser-Gly赖氨酸-精氨酸-甘胺酸-天冬酰胺-苏氨酸-瓜氨酸-甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-精氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-精氨酸-丙氨酸-甘氨酸-丝氨酸-丝氨酸-甘氨酸)。研究表明:上述抗CiP抗体在早期RA患者血清中具有显著高于其他相关疾病的抗体滴度，敏感性和特异性较好，对早期RA的诊断具有重要的意义。实施例2抗CiP抗体对早期RA患者血清中抗体的检测本研究采用酶联免疫吸附法(即ELISA法)对早期RA，系统性红斑狼疮，干燥综合征，骨关节炎，皮肌炎/多发性肌炎，系统性硬化症及正常人血清中的抗CiP抗体进行检测，以评价该多肽抗体在各种疾病中的分布。首先将CiP包被于酶联免疫吸附微孔板上，与待测血清一起孵育，如果血清中存在的抗CiP抗体，该抗体就会与包被的固相抗原结合，形成抗原-抗体复合物。将未结合的抗体及其它成分冲洗干净后，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG抗体(IgG-HRP)一起孵育，此时IgG-HRP就会与抗原-抗体复合物结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，洗去未结合的成分，加入底物，若血清中含有抗CiP抗体，则会显出特定的颜色，且抗体滴度越高颜色越深。加终止液后在450nm波长下测定OD值。检测原理示意图见说明书附图1。本研究共检测102例早期类风湿关节炎(RA)，31例系统性红斑狼疮(SLE)，30例原发性干燥综合征(PSS)，38例骨关节炎(OA)，20例皮肌炎/多发性肌炎(DM/PM)，30例系统性硬化症(SSC)以及40例正常人血清中的抗CiP抗体。每板均设阳性对照、阴性对照。根据ROC曲线选择诊断RA的最佳临界点。AU值=(A肽-A非特异背景)待测血清/ (A肽-A非特异背景)标准血清X 100，标准血清为阳性标准血清。本实施例主要通过以下几个方面阐明本专利技术多肽在早期RA患者诊断中的意义:1、抗CiP抗体阳性率在早期类风湿关节炎、其他结缔组织病及正常人的比较。本研究用ELISA方法检测了抗CiP抗体在各组病人及正常人的阳性率，见表1。应用t检验比较各组数据，结果显示，CiP抗体在早期RA中的的阳性率显著高于其他结缔组织病和正常人，P值均<0.05。各对照组血清中的Ci本文档来自技高网...
【技术保护点】
CiP序列为KRGNTXGRGRGRQGRAGSSG(即Lys?Arg?Gly?Asn?Thr?Cit?Gly?Ary?Gly?Arg?Gly?Arg?Gln?Gly?Arg?Ala?Gly?Ser?Ser?Gly赖氨酸?精氨酸?甘胺酸?天冬酰胺?苏氨酸?瓜氨酸?甘氨酸?精氨酸?甘氨酸?精氨酸?甘氨酸?精氨酸?谷氨酰胺?甘氨酸?精氨酸?丙氨酸?甘氨酸?丝氨酸?丝氨酸?甘氨酸)的多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：栗占国，孙晓麟，李桂叶，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：
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