在粘合物质和可铁宁的粘合体上结合有抗-可铁宁抗体的复合体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及在粘合物质和可铁宁的粘合体上结合有抗-可铁宁抗体的复合体及其用途，依据本发明专利技术的复合体在体外生物学分析方法（in?vitro?biological?assay）中可被用作分析工具，其可以保持粘合物质的特异反活性、生物学功能；以及补体依赖性细胞毒性（CDC）、抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）以及在体内的长半衰期等抗体的固有特性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在粘合物质和可铁宁的粘合体上结合有抗-可铁宁抗体的复合体及其用途
本专利技术涉及在粘合物质和可铁宁的粘合体上结合有抗-可铁宁抗体的复合体及其用途。
技术介绍
众多的肽以及适体生物药品均具有有望成为候选药物（drugcandidate）的特性，但由于其在体内容易被蛋白分解酶（proteinase）、肽酶（peptidase）以及核酸酶（nuclease）等分解，或者通过肾脏迅速排出体外，因此其半衰期通常特别短，一般仅为数分钟至数小时（SatoA.K.etal.,CurrOpinBiotechnol,17,638-642,2006）。为了解决其不稳定性及药效持续时间短的问题，通常施行将聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）与其粘合的技术（Veronese,F.M.&PasutG.,DrugDiscovToday,10,1451-1458,2005），阻碍由于体内酶引起的分解，抑制肾脏和血管内的吸收，从而延长在血中的滞留时间。但该方法的缺点在于聚乙二醇化所需时间较长，还需要根据不同粘合物质需要特定的最优化（specificoptimization），且由于PEG的粘合是异质性（heterogenous）的，因此会产生多种分子粘合体。为满足作为新型递送平台（Noveldeliveryplatform）使用的目的，半抗原（hapten）必须符合对于动物和人无毒且无生理活性的条件。可铁宁（cotinine）是尼古丁的主要代谢产物，而人类已长期暴露于尼古丁。因此，可铁宁是作为新型递送平台的合适的半抗原。并且，其在小鼠体内LD50值为2-4g/kg，相对来说非常安全的物质（RiahO.etal.,Toxicol.Lett.,109,21-29,1999），以每天服用1.8g的量，服用四天时也未发现其它副作用（Bowman,E.R.&Mc,K.H.,Jr.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,135,306-311,1962）。并且，已对可铁宁在哺乳动物体内的物质代谢过程非常清楚，并对其血清半衰期大约为16小时的事实也非常清楚（BenowitzN.L.etal.,3rdHandb.Exp.Pharmacol.,29-60,2009）。另外，还有报告称可铁宁对于人没有生理活性，3天内吸收最高达160mg的可铁宁，也未显示任何生理上及行动上的变化（Hatsukami,D.K.etal.,Pharmacol.Biochem.Behav.,57,643-650,1997）。另外，适体可以以特异的、三维的形态折叠，其类似于抗体，可与靶标高亲和性的、特异性的结合，从而被广泛用于多种分析和实验。利用适体制备与抗体结合的复合体的现有方法主要是将适体与生物素（biotin）以及异羟基洋地黄毒苷（digoxigenin）粘合，使其与亲和素（avidin）以及抗-异羟基洋地黄毒苷抗体结合形成复合体。本专利技术人利用可铁宁作为半抗原，制备了在粘合物质和可铁宁的粘合体结合有抗-可铁宁抗体结合的复合体，并发现所述复合体可保持粘合物质的特异反应性、生物学功能；以及补体依赖性细胞毒性（complement-mediatedcellcytoxicity,CDC）、抗体依赖细胞介导的细胞毒性（antibody-dependentcellcytotoxicity,ADCC）以及在体内的长半衰期等抗体的固有特性，由此完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题本专利技术的目的是提供在粘合物质和可铁宁的粘合体上结合有抗-可铁宁抗体的复合体。本专利技术的另一个目的是提供体外生物学分析方法（invitrobiologicalassay），其特征在于，将可铁宁和粘合物质的粘合体作为分析工具使用。本专利技术的另一个目的是通过在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合抗-可铁宁抗体，提供延长所述粘合物质的体内半衰期的方法。本专利技术的另一个目的是通过在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合抗-可铁宁抗体，提供诱导所述粘合物质结合的细胞发生补体依赖性细胞毒性的方法。本专利技术的另一个目的是通过在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合抗-可铁宁抗体，提供诱导所述粘合物质结合的细胞发生抗体依赖细胞介导的细胞毒性的方法。本专利技术的另一个目的是通过在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合抗-可铁宁抗体，提供将所述粘合物质在体内的分布变化为一般抗体在体内的分布状况的方法。技术方案为了实现所述目的，本专利技术提供在粘合物质和可铁宁的粘合体上结合有抗-可铁宁抗体的复合体。为了实现所述另一个目的，本专利技术提供体外生物学分析方法，其特征在于，将可铁宁和粘合物质的粘合体作为分析工具使用。为了实现所述另一个目的，本专利技术通过在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合抗-可铁宁抗体，提供延长所述粘合物质的体内半衰期的方法。为了实现所述另一个目的，本专利技术通过在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合抗-可铁宁抗体，提供诱导所述粘合物质结合的细胞发生补体依赖性细胞毒性的方法。为了实现所述另一个目的，本专利技术通过在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合抗-可铁宁抗体，提供诱导所述粘合物质结合的细胞发生抗体依赖细胞介导的细胞毒性的方法。为了实现所述另一个目的，本专利技术通过在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合抗-可铁宁抗体，提供将所述粘合物质在体内的分布变化为一般抗体在体内的分布状况的方法。附图说明本专利技术所述以及其它的目的和特征，将通过所附的附图和下述对于本专利技术的说明更加明确。图1是对于实施例2中纯化的抗-可铁宁抗体进行考马斯亮蓝染色的凝胶图片。图2以及图3是实施例（3-1）中合成的可铁宁-WKYMVm-NH2粘合体，以及实施例（3-2）中合成的可铁宁-AS1411以及可铁宁-派加他尼粘合体的结构式。图4是表示在试验例1中施行的，分析抗-可铁宁IgG抗体对于可铁宁的亲和性的曲线图。图5是表示可铁宁-WKYMVm-NH2/抗-可铁宁IgG复合体对于FPR2细胞受体的特异性结合能力的曲线图。图6至图8分别是分析可铁宁-WKYMVm-NH2/抗-可铁宁IgG复合体的细胞内钙浓度变化、超氧化物产生程度以及趋化性的结果。图9是比较可铁宁-WKYMVm-NH2粘合体以及可铁宁-WKYMVm-NH2/抗-可铁宁IgG复合体在小鼠体内半衰期的曲线图以及直方图。图10是表示抗-可铁宁IgG在血清中的体内半衰期的曲线图。图11是表示可铁宁-WKYMVm-NH2/抗-可铁宁IgG复合体在败血症模型中的改善的治疗效果的曲线图。图12是比较可铁宁-派加他尼粘合体以及可铁宁-派加他尼/抗-可铁宁IgG复合体在小鼠体内半衰期的曲线图。图13以及图14表示可铁宁-AS1411/抗-可铁宁IgG复合体对于核仁素细胞受体的特异性结合能力的试验结果。图15是对可铁宁-AS1411/抗-可铁宁IgG复合体进行蛋白免疫印迹的结果。图16是表示利用可铁宁-AS1411/抗-可铁宁IgG复合体的核仁素的免疫沉淀试验结果。图17是表示可铁宁-派加他尼/抗-可铁宁IgG复合体对于血管内皮生长因子（VEGF）的结合性的曲线图。图18是表示阿昔单抗、阿昔单抗-可铁宁粘合体以及可铁宁-阿昔单抗/抗-可铁宁IgG复合体对于整合素α2bβ3的反应性的曲线图。图19是可铁宁-阿昔单抗/抗-可铁宁IgG复合体对于血本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.04.15 US 61/476,0181.一种在可铁宁和粘合物质的粘合体上结合有抗-可铁宁抗体的复合体，所述粘合物质选自WKYMVm-NH2肽、AS1411适体、哌加他尼、阿昔单抗以及胰岛素组成的组中；所述粘合物质通过聚乙二醇连接体或者氨基连接体C6与可铁宁连接。2.如权利要求1所述的复合体，其特征在于，所述粘合体结合于抗-可铁宁抗体的抗原结合部位。3.如权利要求1所述的复合体，其特征在于，所述抗-可铁宁抗体选自所述抗体、抗体片段和以及包含所述抗体和抗体片段作为构成成分的融合蛋白质的组；所述抗体片段选自Fab、ScFv以及结构域抗体。4.一种体外生物学分析方法，其特征在于，其将...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑埈昊，朴仙荣，黄度彬，李花京，
申请(专利权)人：首尔大学校产学协力团，
类型：
国别省市：