一种短须裂腹鱼心脏细胞系的构建和超低温冷冻保存方法技术

本发明专利技术涉及一种短须裂腹鱼心脏细胞系的构建和超低温冷冻保存的方法，属于淡水水生生物细胞培养和超低温冷冻保存技术领域。该方法是以短须裂腹鱼心脏组织为材料，采用组织块法和两酶消化法，在含有胎牛血清和细胞生长因子，pH值为7.0-7.2?的M199培养液中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养；具体包括制备细胞培养液、原代培养及传代培养步骤。本发明专利技术的有益效果在于：1、操作简便；2、降低了纯组织块法对心脏细胞的损伤；3、构建的短须裂腹鱼心脏细胞系形态为成纤维样，生长状态良好，能够连续传代并直接应用于生物学特性研究，满足了对短须裂腹鱼种质资源保存和理论研究及应用的需要；4、该构建方法也适用于其他鱼类构建心脏细胞系。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种短须裂腹鱼心脏细胞系的构建和超低温冷冻保存方法，其特征在于该方法的步骤如下：（1）?制备PBS消毒液和细胞培养液PBS消毒液：向PBS中加入抗生素，使青霉素浓度为200IU/ml，链霉素浓度为200μg/ml，两性霉素B浓度为20?μg/ml；基础培养液：向M199培养液中加入胎牛血清，使胎牛血清体积占总体积的10%；原代培养液：向M199培养液中加入胎牛血清、细胞生长因子bFGF和抗生素，使胎牛血清体积占总体积的15%，bFGF浓度为10ng/ml，青霉素浓度为150IU/ml，链霉素浓度为150μg/ml，两性霉素B浓度为20?μg/ml；传代培养液：向M199培养液中加入胎牛血清、细...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓爱，潘晓赋，杨君兴，刘倩，陈小勇，
申请(专利权)人：中国科学院昆明动物研究所，
类型：发明
国别省市：