【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种小鼠肝脏原代细胞分离方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)配制Ⅳ型胶原酶:称取0.0125gⅣ型胶原酶加入盛有20mL的Hanks培养液中,配制成终浓度为0.05%的Ⅳ型胶原酶,0.45μM滤器过滤,放入37℃水浴锅中温育;(2)取一只准备好的小鼠麻醉,肌注肝素抗凝;(3)固定,剪开皮毛,用棉签将肠胃向右拨开,露出门静脉,用细弯镊游离门静脉,垫入细线,上下各1根;(4)用10mL注射器吸取已预热的无钙D?Hanks,连接至套管针;(5)向门静脉中插入套管针,拔出一点针头,结扎细线固定针;(6)推入无钙D?Hanks6?9mL,同时用棉签轻拍肝脏,至肝脏变白;(7)剪下肝脏,放入10cm平皿中,用10mL注射器吸取胶原酶,缓缓推入,同时用棉签轻拍肝脏,观察肝脏的变化,重复4?5次,待肝脏包膜破裂,用镊子撕扯包膜;(8)将撕碎的肝脏用100目筛网滤入50mL离心管中,500rpm,4℃离心5min;(9)弃上清,加入1×PBS20mL重悬,混匀离心,此步骤重复3次;(10)加入原代细胞培养液hepatocyte?medium,接种至12孔细胞板中培养;(11)24h后换高糖DMEM培液 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:宁光,李博,李小英,洪洁,王卫庆,杨颖,张志国,
申请(专利权)人:上海交通大学医学院附属瑞金医院,
类型:发明
国别省市:
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