【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于DNA的提取领域，特别涉及一种SBR中活性污泥样品DNA的提取方法。
技术介绍
活性污泥中细菌总DNA提取的不同方法得到的DNA纯度不同，分析DNA的纯度，用于了解微生物的群落结构，对鉴定和分离处理系统中的优势菌很重要。力求通过这多方面的研究来提高生物处理染料废水处理能力。DNA提取是分子学技术的前提条件。只有提取出了足够的并且纯度适宜的DNA，才能进行后续的实验和研究，所以DNA的提取可以说是分子生物学的关键所在。关于活性污泥中细菌总DNA提取方法:提取活性污泥DNA时，对样品进行预处理是非常必需的。活性污泥中含有大量的腐殖酸、褐菌素和重金属离子等杂质，还有一些胞外游离的DNA，它们都极大地影响DNA提取以及后续工作，采用TENP和PBS缓冲液对污泥样品进行预处理，可以去除污泥样品中的腐殖酸、各种离子、无机物及有机物等杂质，减少胞外游离DNA的污染。细胞裂解是破坏细胞壁和细胞·膜的过程。常用的裂解方法有化学、酶和机械裂解。本实验采用化学裂解法直接从废水样品中提取基因组DNA。蛋白的去除使用的是传统的苯酚氯仿抽提法。核酸的沉淀一般选择在乙醇、异丙醇...
【技术保护点】
一种SBR中活性污泥样品DNA的提取方法，包括：（1）活性污泥样样品在处理前首先混匀，采用TENP、PBS溶液和玻璃珠震荡法对样品进行预处理；将经预处理的污泥样品采用冻融法破碎，冷藏、沸水煮，再加入质量百分比浓度2%～10%的SDS缓冲液去除蛋白质；（2）加入0.6倍样品体积的异丙醇，颠倒混匀，进行沉淀；离心，倒掉上清液；自然风干，用TE缓冲液悬浮样品，溶解沉淀，即得基因组DNA粗提液；加入RNase?A，35～40℃温浴15?20min消化RNA，然后采用DNA胶回收试剂盒，按照操作说明进行纯化；（3）用紫外分光光度计测定上述纯化DNA样品在波长230、260、280nm...
【技术特征摘要】
1.一种SBR中活性污泥样品DNA的提取方法，包括: (1)活性污泥样样品在处理前首先混匀，采用TENP、PBS溶液和玻璃珠震荡法对样品进行预处理；将经预处理的污泥样品采用冻融法破碎，冷藏、沸水煮，再加入质量百分比浓度2% 10%的SDS缓冲液去除蛋白质； (2)加入0.6倍样品体积的异丙醇，颠倒混匀，进行沉淀；离心，倒掉上清液；自然风干，用TE缓冲液悬浮样品，溶解沉淀，即得基因组DNA粗提液；加入RNase A，35 40°C温浴15-20min消化RNA，然后采用DNA胶回收试剂盒，按照操作说明进行纯化； (3)用紫外分光光度计测定上述纯化DNA样品在波长230、260、280nm处的吸光光度值；将上述纯化DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色后，用紫外凝胶成像系统拍照。2.根据权利要求1所述的一种SBR中活性污泥样品DNA的提取方法，其特征在于:所述步骤(I)中的TENP溶液体积和PBS溶液体积为污水样品的3 5倍；玻璃珠直径为I 2mm, 3000 5000rpm 离心 10 30min。3.根据权利要求 1所述的一种SBR中活性污泥样品DNA的提取方法，其特征在于:所述步骤(I)中...
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