获取miRNA候选靶基因的方法及其专用反转录引物技术

本发明专利技术公开了获取miRNA的候选靶基因的方法及其专用反转录引物。该方法包括：1）以带茎环结构和目的miRNA种子序列的DNA为反转录引物，获取与目的miRNA种子序列互补的mRNA对应的cDNA第一条链，得到A库；2）以带特异接头和14-20个脱氧胸腺嘧啶核苷酸的DNA为反转录引物，获取真核生物目的组织的mRNA对应的cDNA第一条链，得到B库；所述反转录引物B的结构是特异接头-T14-20；3）将所述A库和所述B库合成双链cDNA后进行杂交得到杂交DNA分子，扩增所述杂交DNA分子上所述目的miRNA种子序列和所述特异接头之间的DNA片段，根据所述扩增产物得到目的miRNA的候选靶基因。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及获取miRNA候选靶基因的方法及其专用反转录弓I物。
技术介绍
微小RNA (microRNA, miRNA)是一类小分子非编码RNA，约为22碱基大小。其通过结合靶基因的3’非翻译区(3’ UTR)造成靶基因mRNA的降解或靶蛋白翻译的抑制。研究表明miRNA的生物功能是通过调控靶基因而实现的，miRNA通过作用于相应靶mRNA，参与细胞增殖、凋亡、分化、代谢、发育、肿瘤转移等多种生物学过程。控制着包括动、植物器官形成、发育、代谢以及某些疾病的发生。miRNA以不完全配对方式与靶基因相结合，这种不完全配对模式使得miRNA及其靶基因的调控网络非常复杂，即一条miRNA可以同时作用若干甚至上百个功能基因，一个功能基因也可能受高达数十条miRNA所调控。很难通过分子生物学实验加以一一验证。Bartel 等(Friedman, R.C., K.K.Farh, C.B.Burge, and D.P.Bartel.2009.Most mammalianmRNAs are conserved targets of microRNAs.Genome Resl9:92-105)研究本文档来自技高网...

【技术保护点】
获取miRNA候选靶基因的方法，包括：1）以名称为反转录引物A的带茎环结构和目的miRNA种子序列的DNA为反转录引物，对真核生物目的组织的mRNA进行反转录，该反转录记为反转录A，获取与所述目的miRNA种子序列互补的mRNA对应的cDNA第一条链，得到A库；所述反转录引物A的结构是茎环结构?miR?X，所述茎环结构满足如下条件：所述茎环结构的茎部序列完全配对，且CG含量为57%?62%，环部不配对碱基数≤6个，且能值低于?30.00kcal/mol；所述miR?X是所述目的miRNA种子序列，是由10个脱氧核糖核苷酸组成的单链DNA，所述miR?X的5′至3′方向是3′至5′方向单链DNA...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：甘尚权，高蕊，王立民，沈敏，王新华，刘守仁，
申请(专利权)人：新疆农垦科学院，
类型：发明
国别省市：