一种基于数字PCR平台的miRNA检测质量控制试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种基于数字PCR平台的miRNA检测质量控制试剂盒，它包括人工合成的miRNA、反转录引物、检测上引物、检测下引物和DEPC水。本发明专利技术还公开了该试剂盒的使用方法。本发明专利技术试剂盒提供的人工合成miRNA序列在人体中绝对不存在类似序列，避免了可能出现的PCR假阳性扩增，不但可作为数字PCR检测的外源性内参miRNA用于质量控制，且由于miRNA分子自身结构稳定、不易降解的特点有利于其长期稳定保存。此外，本试剂盒提供的反转录茎环引物和检测引物在数字PCR平台检测时均验证可得到稳定可靠的检测结果。本发明专利技术试剂盒的使用方法操作简单、使用方便，适用于大批量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于数字PCR平台的miRNA检测质量控制试剂盒及其使用方法。
技术介绍
微滴式数字PCR(DropletDigitalTMPCR)被称为第三代PCR技术，通常在人体体液例如血浆、尿液等样本中的miRNA分子丰度普遍不高，常规PCR技术在检测这类miRNA分子时存在误差较大或难以测出的问题，正由于数字PCR在微量检测技术上的重大创新和突破，目前已成为液体活检中认知度最高的技术手段。基于数字PCR平台，在人体体液例如血清或血浆miRNA检测过程中，需要经过总miRNA提取，miRNA反转录，miRNA检测三大步骤。不同于人体组织或细胞中的miRNA检测可以使用U6或RNU6B等作为内参基因，目前还没有明确定论统一可用的血清或血浆miRNA内参，并且微滴式数字PCR采用的是绝对定量的方式，检测结果显示为样品中待检测分子的具体拷贝数浓度，因此，miRNA提取效率和miRNA反转录效率对数字PCR最终的检测结果影响甚大，但目前还没有一种方便快捷的用于数字PCR平台的miRNA检测质量控制的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点，提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于数字PCR平台的miRNA检测质量控制试剂盒，其特征在于，它包括人工合成的miRNA、反转录引物、检测上引物、检测下引物和DEPC水，所述人工合成miRNA引物序列如SEQ ID No. 1所示，所述反转录引物序列如SEQ ID No. 2所示，所述检测上引物序列如SEQ ID No. 3所示，所述检测下引物序列如SEQ ID No. 4所示。

【技术特征摘要】
1.一种基于数字PCR平台的miRNA检测质量控制试剂盒，其特征在于，它包括人工合成的miRNA、反转录引物、检测上引物、检测下引物和DEPC水，所述人工合成miRNA引物序列如SEQIDNo.1所示，所述反转录引物序列如SEQIDNo.2所示，所述检测上引物序列如SEQIDNo.3所示，所述检测下引物序列如SEQIDNo.4所示。2.如权利要求1或2所述的一种基于数字PCR平台的miRNA检测质量控制试剂盒，其特征在于，所述人工合成的miRNA浓度为3×106copies/μl，所述反转录引物的浓度为5μM，所述检测上引物和检测下引物的浓度为10μM，所述DEPC水的质量百分比浓度为1%。3.如权利要求1或2所述的一种基于数字PCR平台的miRNA检测质量控制试剂盒，其特征在于，所述人工合成的miRNA体积为8μl，所述反转录引物、检测上引物和检测下引物的体积各为1μl，所述DEPC水的体积为1ml。4.如权利要求1所述的一种基于数字PCR平台的miRNA检测质量控制试剂盒的使用方法，其特征在于，它包括以下步骤：S1.用DEPC水稀释人工合成的miRNA至原浓度的1/10倍；S2.提取生物体体液的总miR...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏亮，卢俊，杨洪吉，
申请(专利权)人：成都仕康美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51