一种高效分泌表达重组人生长激素的操纵子、载体和工程菌及载体和工程菌的制备方法技术

一种高效分泌表达重组人生长激素的操纵子、载体和工程菌及载体和工程菌的制备方法，属于医药生物工程技术领域。本发明专利技术的操纵子，包括大肠杆菌色氨酸启动子、经过优化改造的大肠杆菌碱性磷酸酶信号肽的编码序列和重组人生长激素的编码序列。本发明专利技术的表达载体是：将序列表中操纵子和重组人生长激素的编码序列依次通过EcoRI和XbaI、XbaI和BamHI克隆至pBR322中得到的表达质粒，命名为pTPS-hGH。本发明专利技术提供的工程菌是：用含有病发明专利技术操纵子的表达质粒转化W3110大肠杆菌菌株得到的工程菌，命名为TPS-hGH。本发明专利技术的有益效果是能够使重组人生长激素在大肠杆菌中实现高效的分泌表达，可获得较高的重组人生长激素产量，利于工业规模的生产和加工。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药生物工程领域，具体涉及一种高效分泌表达重组人生长激素的操纵子、载体和工程菌。
技术介绍
人生长激素(human growth hormone, hGH)是由脑垂体前叶嗜酸性粒细胞分泌的肽类激素，由191个氨基酸构成，分量约22kD，无糖基化，链内有四个Cys，形成两对二硫键(C54 一 C165，C182 — C189)，正常成年人血浆hGH水平约为l_5ng/ml，半衰期约为15-20分钟。生长激素能影响几乎所有的组织类型和细胞，甚至包括免疫组织、脑组织及造血系统，其主要作用是刺激骨、软骨细胞的生长和分化，调节蛋白质、糖类及脂肪的代谢，对人体新陈代谢等各种生理功能有广泛的调节功能。(I)人生长激素最明显的作用是促进骨骼、软骨组织的生长。它刺激蛋白质和胶原蛋自的合成，加速组织对循环系统中游离氨基酸的摄取和利用。(2)促蛋白质合成。hGH能促进氨基酸进入细胞，加速蛋白质合成，减少尿素、肌酸和氮的排出。在蛋白质合成中，hGH可增加tRNA的合成，增强对机体氨基酸的摄取能力。 (3)促代谢作用 hGH能够促进三大营养物质的代谢。hGH对糖和脂肪的作用主要体现在两方面:一方面是胰岛素样作用，即增加葡萄糖的摄取和氧化以及抵抗脂肪分解的作用；另一方面，hGH具有明显抗胰岛素的作用。hGH还使脂肪的分解加快，血液中自由脂肪酸含量增加。(4)免疫调节作用 hGH通过促进骨髓细胞成熟刺激吞噬细胞迁移，触发吞噬细胞产生超氧阴离子和细胞因子以及提高调理素的活力，在刺激B细胞产生免疫球蛋白等方面起重要作用，增强免疫防御功能。在临床上，生长激素己经应用于因内源性生长激素缺乏所引起的儿童生长缓慢、性早熟治疗、重度烧伤治疗等等。目前，由于生长激素具有加速新陈代谢、修复受损组织、抗衰老、提高机体免疫力等作用，生长激素的应用又进入了倍受女性喜爱的美容领域并倍受美容界的青睐。大肠杆菌作为目前最为方便简易的重组蛋白表达系统，结构复杂的异源蛋白在其胞质中表达时常形成包涵体而失去活性，在纯化提取时需要经过变性复性步骤，不仅条件难于控制，目的产物的活性和收率也损失很大，从而对实际生产应用形成了制约。而分泌型基因重组人生长激素的氨基酸含量、一级结构及空间构象与人体自身分泌的生长激素完全相同，具有与人体内源生长激素同等的作用。因此，利用合适的信号肽将异源蛋白引导至大肠杆菌的周质腔中的分泌表达方式是解决此问题的有效手段。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高效分泌表达重组人生长激素的操纵子、含有前述操纵子序列的表达载体、和含有上述操纵子的表达质粒转化得到的分泌表达重组人生长激素的工程菌，最终实现重组人生长激素在大肠杆菌中的高效分泌表达，克服现有技术存在的上述不足。本专利技术提供的高效分泌表达重组人生长激素的大肠杆菌操纵子，包括:大肠杆菌色氨酸启动子(SEQ1)、经过优化改造的大肠杆菌碱性磷酸酶信号肽的编码序列(SEQ2)和重组人生长激素的编码序列(SEQ3)，其序列如下:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效分泌表达重组人生长激素的大肠杆菌操纵子，包括：大肠杆菌色氨酸启动子（SEQ1）、经过优化改造的大肠杆菌碱性磷酸酶信号肽的编码序列（SEQ2）和重组人生长激素的编码序列（SEQ3），其序列如下：。523713dest_path_image001.jpg

【技术特征摘要】
1.一种高效分泌表达重组人生长激素的大肠杆菌操纵子，包括:大肠杆菌色氨酸启动子(SEQ1)、经过优化改造的大肠杆菌碱性磷酸酶信号肽的编码序列(SEQ2)和重组人生长激素的编码序列(SEQ3)，其序列如下:2.含有权利要求1所述操纵子序列的表达载体，其特征是:将序列表中SEQl和SEQ4依次通过EcoRI和Xba1、XbaI和BamHI克隆至pBR322中得到的表达质粒，命名为pTPS_hGH。3.—种分泌表达重组人生 长激素的工程菌，其特征是:利用权利要求2所述的表达质粒转化W3110大肠杆菌菌株得到的工程菌，命名为TPS-hGH。4.一种权利要求2所述操纵子序列的表达载体pTPS-hGH的构建方法，其特征是:将序列表中SEQl和SEQ4依次通过EcoRI和Xbal、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张博学，张军，李庆春，杜研，鞠蒙蒙，
申请(专利权)人：吉林修正药业新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：