电转染的方法及设备技术

本发明专利技术涉及电转染的方法及设备。方法中包括了对细胞进行1次500～1500V，20～60μs的正向高压脉冲放电，暂停600～1200μs，接着1个500～1500V，20～60μs的负向高压脉冲放电，再暂停600～1200μs，再接着1个500～1500V，10～50μs的正向高压脉冲放电，随后1个100～300V，20～100ms的低压电泳电场放电。本发明专利技术的电转染的方法及设备，能够大幅度提高电转染的成功率，在外周血单核细胞转染绿色荧光蛋白细胞学实验结果中转染效率达到了50％左右，为开发肿瘤的生物治疗药物提供了关键技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及转基因的方法和设备，特别适合但不仅限于对原代淋巴细胞转基因中的电转染的方法及设备。
技术介绍
肿瘤免疫治疗领域中，采用转基因技术设计靶向肿瘤细胞的效应T淋巴细胞是很有前景的免疫治疗新方法。同种异体骨髓的干细胞移植成功和向高度恶性血液癌症患者输注淋巴细胞的临床案例表明，人体免疫系统可以控制甚至消灭残余病灶。输入外源淋巴细胞的主要并发症是移植物抗宿主反应，除了攻击肿瘤细胞也要攻击正常细胞。由于自体免疫系统的耐受机制，自体淋巴细胞不包含高亲和力效应细胞，通过转基因技术使自体淋巴细胞具有靶向肿瘤抗原并杀伤肿瘤细胞成为肿瘤免疫治疗的新方向。筛选和克隆出针对肿瘤抗原的特异性T细胞受体，通过转基因技术把该T细胞受体转入患者外周血T淋巴细胞，然后扩增和激活，回输患者体内，具有靶向性的T淋巴细胞就能杀伤肿瘤细胞，同时又不会杀伤正常组织细胞。尤其对发生转移和产生化疗药物抵制的肿瘤干细胞采用过继性T淋巴细胞治疗能取得好的效果，这弥补了手术和化疗手段治疗肿瘤干细胞的不足。到目前为止，肿瘤免疫治疗中使用过继性转基因T细胞，都采用逆转录病毒载体才能产生有效的稳定的治疗效果，这也导致一些安全隐患。本文档来自技高网...

【技术保护点】
电转染的方法，其特征包括：对细胞进行四次放电，放电之间进行两次暂停：第一次放电：电压为500～1500V的正向脉冲，持续时间20～60μs；第一次暂停：暂停持续时间600～1200μs；第二次放电：电压为500～1500V的负向脉冲，持续时间20～60μs；第二次暂停：暂停持续时间600～1200μs；第三次放电：电压为500～1500V的正向脉冲，持续时间10～50μs；第四次放电：电压为100～300V的正向电泳电场，持续时间20～100ms。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：莫邦辉，马雨，王永生，魏于全，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：