一种油菜种子携带油菜黑胫病病原菌的分子检测方法技术

本发明专利技术公开了一种可有效检测油菜籽携带油菜黑胫病病原菌的DNA提取及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)带菌种子的制备；2)取相同数量的带菌种子提取DNA，用RAPD检测经不同处理所得带菌种子的DNA质量；3)从不同带菌率的油菜种子中提取目的病原菌DNA；4)DNA的微量提取；5)模板浓度梯度检测；6)不同带菌率带菌种子DNA的提取；7)PCR扩增不同带菌率带菌种子的DNA。该方法的精确度达到2‰准确率。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种油菜种子携带油菜黑胫病病原菌的分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)带菌种子的制备：用高压灭菌、经1％NaCLO表面消毒及未经任何处理的种子制备不同带菌率的带菌种子；2)取相同数量的带菌种子提取DNA，用RAPD检测经不同处理所得带菌种子的DNA质量；3)DNA大量提取：从不同带菌率的油菜种子中用CTAB法提取目的病原菌DNA；4)DNA微量提取：取100ul经CTAB法大量提取后所得DNA再用QIAGEN试剂盒进行微量提取；5)模板浓度梯度检测：50ul的扩增体系中加10ul模板较理想；6)扩增反应体系：采用ITS引物对病菌rDNA的ITS片段进行扩增，引物序列为：ITS1(5′?...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李子钦，宋培玲，皇甫海燕，郝丽芬，赵存虎，
申请(专利权)人：内蒙古农牧业科学院，
类型：发明
国别省市：