用于分离水溶性生物物质的方法技术

提供的是用于分离水溶性生物物质的新方法。分离剂通过经由化学键合使多糖例如纤维素或直链淀粉与载体表面结合而构成，并且使用分离剂通过层析从两个或更多个类型的水溶性生物物质的混合物中分离水溶性生物物质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及。
技术介绍
因为具有生理活性的生物物质例如以糖、核酸化合物、氨基酸、蛋白质、维生素或酸性化合物形式的物质证实体内的有效作用，几乎所有这些物质都是水溶性的，并且作为其结果，在反相条件下的层析方法频繁应用于分析几乎所有这些物质。另ー方面，近来已存在描述使用含有几个百分比到40%的水的流动相，通过含水正相层析来层析分离且分析这些生物水溶性生理活性物质的尝试的众多报道(參见例如，非专利文件I)。这个含水正相层析称为亲水作用液相层析(HILIC)，并且视为提供可容易应用于LC-MS的分析模式，因为它使弱保留且难以通过反相层析分离的化合物分离成为可能，并且仅使用挥发性有机溶剂和水用于流动相，而不使用高度浓缩的盐或离子对试剂。尽管大多数这些HILIC分离柱在大多数情况下使用ニ氧化硅、胺修饰的或酰胺修饰的分离剂，并且其他柱的例子包括聚胺、聚丙烯酸、聚こ烯、环糊精和两性离子柱，但存在在具有多种官能团、结构和物理性质的广泛范围的生物化合物的分离和分析过程中能够更有效分离的HILIC分离剂的需要(參见例如，非专利文件2)。例如，层析技术例如高效液相层析(HPLC)已知作为用于分离单糖、多糖和糖醇等的方法。用于分离此类糖的分离剂的例子包括通过使聚丙烯酰胺与ニ氧化硅凝胶化学键合获得的分离剂和通过将聚烷撑聚胺与ニ氧化硅凝胶化学键合获得的分离剂(參见例如，专利文件I和2)。此外，用于分离糖的方法的已知例子包括将由水溶胀的纤维素填充到柱管内，并且使用水和醇的混合物作为洗脱剂通过柱层析分离寡糖(參见例如，专利文件3)。另一方面，使用多糖衍生物例如纤维素的分离剂的已知例子是通过将纤维素或直链淀粉例如ニ甲基苯基氨基甲酸酯衍生物的多糖衍生物与ニ氧化硅凝胶化学键合获得的用于光学异构体分离的分离剂(參见例如，专利文件4)。[专利文件I]日本专利公开号2504005[专利文件2]日本专利公开号2558007日本专利公开号3885912[专利文件4]日本专利公开号2751004[非专利文件 I] Journal of Chromatography A, 1994,第 676 卷，第 191-202 页[非专利文件 2] Journal of Separation Science, 2006,第 29 卷,第 1784-1821 页。
技术实现思路
本专利技术提供了用于分离水溶性生物物质的新方法。本专利技术的专利技术人发现通过将多糖与ニ氧化硅凝胶化学键合获得的分离剂对于将水溶性生物物质分离成个别化合物是优异的，从而导致本专利技术的完成。 S卩，本专利技术提供了使用由载体和通过化学键合与载体表面结合的多糖组成的分离剂通过层析，用于从两个或更多个类型的水溶性生物物质的混合物中分离水溶性生物物质的方法。此外，本专利技术提供了用于分离水溶性生物物质的分离剂，其由载体和通过化学键合与载体表面结合的多糖组成。此外，本专利技术提供了上述方法和分离剂，其中水溶性生物物质是其选自糖、核酸化合物、氨基酸、水溶性维生素、具有生理活性的酸性化合物及其衍生物、和寡肽的一个或多个类型。此外，本专利技术提供了上述方法和分离剂，其中多糖是纤维素或直链淀粉。因为本专利技术使用以由载体和通过化学键合与载体表面结合的多糖组成的分离剂形式的、先前未知具有将水溶性生物物质分离成个别化合物的能力的分离剂，所以它能够提供用于分离水溶性生物物质的新方法。附图说明 图1是显示使用实施例的分离剂I通过HPLC由RI检测器获得的糖分离的层析谱的 图2是显示使用实施例的分离剂I通过HPLC由UV检测器获得的糖分离的层析谱的 图3是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由RI检测器获得的糖分离的层析谱的 图4是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由UV检测器获得的糖分离的层析谱的 图5是显示使用实施例的分离剂I通过HPLC由UV检测器获得的核酸碱基分离的层析谱的 图6是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由UV检测器获得的核酸碱基分离的层析谱的 图7是显示使用实施例的分离剂I通过HPLC由UV检测器获得的核苷分离的层析谱的 图8是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由UV检测器获得的核苷分离的层析谱的 图9是显示使用实施例的分离剂I通过HPLC由UV检测器获得的水溶性维生素分离的层析谱的 图10是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由UV检测器获得的水溶性维生素分离的层析谱的 图11是显示使用实施例的分离剂I通过HPLC由UV检测器获得的氨基酸分离的层析谱的 图12是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由UV检测器获得的氨基酸分离的层析谱的 图13是显示使用实施例的分离剂I通过HPLC由UV检测器获得的具有生理活性的酸性化合物及其衍生物分离的层析谱的 图14是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由UV检测器获得的具有生理活性的酸性化合物及其衍生物分离的层析谱的图；图15是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由UV检测器获得的核酸碱基和核苷混合物分离的层析谱的 图16是显示使用商购可得的ODS柱通过HPLC由UV检测器获得的核酸碱基分离的层析谱的 图17是显示使用商购可得的ODS柱通过HPLC由UV检测器获得的核苷分离的层析谱的 图18是显示使用商购可得的ODS柱通过HPLC由UV检测器获得的水溶性维生素分离的层析谱的 图19是显示使用商购可得的ODS柱通过HPLC由UV检测器获得的氨基酸分离的层析谱的 图20是显示使用商购可得的ODS柱通过HPLC由UV检测器获得的具有生理活性的酸性化合物及其衍生物分离的层析谱的 图21是显示使用实施例的分离剂I通过HPLC由UV检测器获得的ニ肽和三肽混合物分离的层析谱的 图22是显示使用实施例的分离剂2通过HPLC由UV检测器获得的ニ肽和三肽混合物分离的层析谱的图；和 图23是显示使用商购可得的ODS柱通过HPLC由UV检测器获得的ニ肽和三肽混合物分离的层析谱的图。具体实施例方式 在本专利技术中，使用由载体和通过化学键合与载体表面结合的多糖组成的用于水溶性生物物质的分离剂。在本专利技术中，个别水溶性生物物质使用上文提及的本专利技术的分离剂通过层析从两个或更多个类型的水溶性生物物质的混合物中分离。通常用作用于层析的分离剂的载体的载体可以用于上文提及的载体。上文提及的载体优选多孔载体。此类多孔载体的例子包括多孔无机载体和多孔有机载体。多孔无机载体的例子包括ニ氧化硅凝胶、硅藻土、多孔玻璃、羟磷灰石、氧化铝、氧化钛和氧化镁。多孔有机载体的例子包括聚丙烯酰胺和聚丙烯酸酷。上文提及的载体可以以通常用于柱层析的形式使用。此类形式的例子包括填充到柱管内的颗粒、在柱管中含有的多孔圆柱体、和在薄膜分离中使用的多孔薄膜。从通用性和分离剂的容易制备的观点来看，上文提及的载体优选是ニ氧化硅凝胶。从所得到的峰理论塔板数和压カ损失之间的平衡的观点来看，ニ氧化硅凝胶的粒径优选I Pm -1，000 um,且更优选2 um - 100 Um0从比表面积和高分子量化合物滲透到孔内之间的平衡的观点来看，ニ氧化娃凝胶的平均孔径优选I nm - 100 iim,且更优选2 nm - 500 nm。具有还原末端的多糖可以用于上文提及的多糖。此类多糖可以选自合成多糖和天然存在的多糖。从识别分析靶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.09 JP 2010-2020701.一种用于从两个或更多个类型的水溶性生物物质的混合物中分离水溶性生物物质的方法，其使用由载体和通过化学键合与载体表面结合的多糖组成的分离剂通过层析进行。2.根据权利要求1的方法，其中所述水溶性生物物质是选自糖、核酸化合物、氨基酸、水溶性维生素、具有生理活性的酸性化合物及其衍生物、和...

【专利技术属性】
技术研发人员：大西敦，滨崎亮太，
申请(专利权)人：株式会社大赛璐，
类型：
国别省市：