新的7α-羟类固醇脱氢酶敲除突变体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及新的微生物7α-羟类固醇脱氢酶(7α-HSDH)敲除突变体，和将其用于产生具有不同功能性的其他的HSDHs（例如3α-、7β-或者12α-HSDH）的用途，以及由此产生的HSDH酶在胆酸化合物的酶促反应中，并且特别是在熊去氧胆酸(UDCA)的产生中的用途。本发明专利技术尤其涉及合成UDCA的新方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新的 α-羟类固醇脱氢酶敲除突变体及其用途本专利技术涉及新的微生物7α-羟类固醇脱氢酶(7C1-HSDH)敲除突变体，和将其用于产生不同功能性的其他的HSDHs (例如3 α -、7 β -或者12 a -HSDH)的用途，以及由此产生的HSDH酶在胆酸化合物的酶促反应中，并且特别是在熊去氧胆酸(UDCA)的产生中的用途；本专利技术尤其涉及合成UDCA的新方法。专利技术背景:活性物质熊去氧胆酸(UDCA)和相关的非对映异构体鹅去氧胆酸(⑶CA)已经多年被应用于胆结石的药物治疗。这两种化合物仅在第7位的C原子上的羟基的构型不同(UDCA: β-构型，⑶CA: α-构型)。在现有技术中，描述了产生TOCA的多种方法，其完全用化学方法进行或者由化学和酶处理步骤的组合组成。在每种情况下，起点是胆酸(CA)或者从胆酸生成的⑶CA。因此产生UDCA的经典的化学方法可以以图示表示如下:

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.27 EP 10164003.5;2010.12.16 EP 10015726.21.重组微生物，其中抑制了7α-羟类固醇脱氢酶(7C1-HSDH)的酶活性，同时可表达地含有功能不同的羟类固醇脱氢酶(例如，3 α -、3 β -、7 β _、11 α -、11 β -、12 α -、12 β _、17 α -、17 β -、20 α -或 20 β -HSDH,尤其 3α-、7β -或 12 α -HSDH)的酶活性。2.权利要求1要求保护的重组微生物，其中通过同源重组或者通过基因破坏(特别是通过插入抑制编码的基因产物的酶功能的核酸序列)敲除编码7 a -HSDH的核酸序列。3.前面权利要求的一个要求保护的重组微生物，其来源于表达7a -HSDH的前体微生物，特别是内源表达7 a -HSDH的前体微生物，特别是埃希氏菌属细菌，尤其大肠杆菌。4.前面权利要求的一个要求保护的重组微生物，其重组表达在功能上不同于7 a -HSDH 的 HSDH,特别是如 3 α -、7 β -和 / 或 12 a -HSDH05.前面权利要求的一个要求保护的重组微生物，其中所述被敲除的7a -HSDH具有根据SEQ ID NO: 10的氨基酸序列或者由根据SEQ ID ΝΟ:9的核酸序列编码。6.前面权利要求的一个要求保护的重组微生物，其中所述表达的功能上不同于7 a -HSDH的HSDH含有以下的氨基酸序列的一个: a)3 a -HSDH 序列，其选自 SEQIDNO: 29 和 31 b)7 β -HSDH 序列，其选自 SEQIDNO: 25 和 c)12 a-HSDH 序列，其选自 SEQIDNO: 12，14，16 ;或 d)从上述衍生的氨基酸序列，其编码与a)，b)和c)下的序列的一个具有至少50%的同一性程度的HSDH。7.用于重组产生功能上不同于7a -HSDH的所希望的HSDH的方法，其中在表达所希望的HSDH的条件下培养7 a -HSDH酶活性受抑制的如前述权利要求之一要求保护的重组微生物，并且分离由此表达的HSDH，其中在所述分离的HSDH中基本上检测不到功能性的7 a -HSDH08.重组HSDH，其选自 3α-、3β-、7β-、11α-、11β-、12α-、12β_、17α-、17β-、20 α -或20 β -HSDH,特别地选自3 α -、7 β -和12 a -HSDH,所述重组HSDH不被7 a -HSDH酶或酶活性污染，可从权利要求1至6的一个要求保护的重组微生物获得。9.权利要求8要求保护的重组HSDH，其包含选自下组的氨基酸序列: ...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·施密德，M·布劳恩，L·刘，A·艾格纳，D·沃伊斯特博茨，
申请(专利权)人：细胞制药有限公司，
类型：
国别省市：