高效RNA干扰联合Bt基因双重防治番茄根结线虫的方法技术

本发明专利技术“高效RNA干扰联合Bt基因双重防治番茄根结线虫的方法”，属于植物病虫防治领域。以转入有RNA干扰载体pCAGC1341-TGPM01RNAi的转基因番茄为宿主植物转化外植体，转入表达Bt-Cry6A晶体蛋白的载体，获得双重抗根结线虫的转基因番茄品种。本发明专利技术还提供了转基因的优化方法。本发明专利技术合成的基因是对密码子进行优化的。将优化后的编码Bt-Cry6A晶体蛋白的人工基因以及转有该基因的番茄品种，显示比转化单一基因的抗线虫效果好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物病虫防治
，高效RNA干渉基因和杀线虫Bt基因聚合转化番茄，双重效果共同防治根结线虫。
技术介绍
根结线虫病严重危害我国蔬菜、棉花、花生、烟草等多种经济作物和水稻、玉米等粮食作物的重要生物灾害，近年来农业种植结构与布局调整后问题进一歩突出。目前对于作物线虫病害的防治主要依赖于杀线虫剂，由于杀线虫剂防治效果差导致农业减产，加之不合理使用带来了产品污染和生态环境破坏。因此，作物线虫病害的严重危害，直接威胁着我国的粮食安全和农产品安全。利用植物介导的RNAi沉默线虫的关键基因成为潜在的最有价值的防治策略，可实现对植物线虫RNAi介导的分子调控(Urwin et al., 2002; Atkinson etal.，2003; Victoria et al.，2008)。根结线虫和胞囊线虫的生长和繁殖所需的营养物质是通过寄生在植物根部提供，利用植物表达线虫特异基因的dsRNA可实现对植物线虫的RNAi介导的分子调控。从微生物资源中挖掘抗线虫基因是另ー个重要的途径。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)产生的内毒素是ー种对鳞翅目、鞘翅目、双翅目、本文档来自技高网...

【技术保护点】
高效RNA干扰联合Bt基因双重防治番茄根结线虫的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）以转入有RNA干扰载体pCAGC1341?TGPM01RNAi的转基因番茄为宿主植物转化外植体，（2）构建含有外源基因的表达载体，所述外源基因指编码苏云金芽孢杆菌的Bt?Cry6A晶体蛋白的基因，（3）将表达载体转入宿主植物转化外植体中，筛选阳性转化子。

【技术特征摘要】
2011.11.18 CN 201110369832.71.效RNA干扰联合Bt基因双重防治番茄根结线虫的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)以转入有1 嫩干扰载体？046(:1341-16 11011 嫩1的转基因番茄为宿主植物转化外植体， (2)构建含有外源基因的表达载体，所述外源基因指编码苏云金芽孢杆菌的Bt-Cry6A晶体蛋白的基因， (3)将表达载体转入宿主植物转化外植体中，筛选阳性转化子。2.据权利要求1所述的方法，所述构建好的重组表达载体指PBI121-06。3.据权利要求2任一所述的方法，所述将重组表达载体转入宿主植物转化外植体中，筛选阳性转化子，其特征在于采用农杆菌介导的转化，所述农杆菌为根瘤农杆菌EHA105。4.权利要求3所述的方法，所述将重组表达载体转入宿主植物转化外植体中，筛选阳性转化子，包括如下步骤: (1)准备宿主植物转化外植体， (2)制备根瘤农杆菌转化液， ...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国华，王殿东，田雪亮，王运生，茆振川，杨宇红，谢丙炎，
申请(专利权)人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，
类型：发明
国别省市：