一种低血凝活性且高α-葡萄糖苷酶活性的芸豆凝集素的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种低血凝活性且高α-葡萄糖苷酶活性的芸豆凝集素的制备方法。具体包括下列步骤：芸豆粗提物的制备；硫酸铵沉淀；亲和层析；离子交换层析；以10-50MPa的压力均质；以5-50kV/cm的电场强度的脉冲电场处理；将处理后的芸豆凝集素取出，经冷冻干燥得到芸豆凝集素粉末。本发明专利技术发现经过这种方法处理以后，对比80-120℃热处理20-40min，芸豆凝集素的血凝活性降低同时α-葡萄糖苷酶抑制活性大部分保留，即一方面有效的降低了芸豆的抗营养性，另一方面提高了其有益的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品生物化学领域，具体属于一种能够有效降低芸豆凝集素的血凝活性同时保持其高α-葡萄糖苷酶抑制活性的新型制备方法。
技术介绍
芸豆凝集素■)是芸豆籽粒中的一类非免疫来源的糖蛋白，文献报道其具有双重特性:一方面，由于凝集素是植物在长期进化过程中形成的抵御病虫害和动物消化的成分之一，因此对人体具有一定的抗营养作用，能可逆地结合特异单糖或寡聚糖，促使血红细胞发生凝集或沉淀；另一方面，它还具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，抗HIV病毒和抑制T淋巴细胞的结合等有益的生理活性。近年来的研究表明，α -葡萄糖苷酶与糖尿病、艾滋病、恶性肿瘤等疾病的发生机制有重要关系，是治疗这些疾病的潜在靶点。因此，对α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究具有重要意义。糖尿病的发病率逐年上升，而且趋于年轻化，已成为严重威胁人类健康的第三大疾病。抗糖尿病药物的研究受到国内外学者的广泛重视。α-葡萄糖苷酶抑制剂能够可逆性抑制小肠刷状缘的α -葡萄糖苷酶的活性，从而延迟多糖、双糖转化为可吸收的葡萄糖，故降低餐后的血糖高峰，此外还可持续地、较温和地促进胰岛素的分泌。目前临床已通过抑制α-葡萄糖苷酶的活性来治疗非胰岛素依赖性糖尿病本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种低血凝活性且高α?葡萄糖苷酶活性的芸豆凝集素的制备方法，其特征在于包括下列步骤：（1）芸豆提取物的制备：将芸豆预先浸泡后与tris缓冲液混合匀浆，0?4℃静置过夜提取，四层纱布过滤后离心，取上清液，得芸豆提取物；（2）硫酸铵沉淀：向上清液中加入固体(NH4)2SO4至饱和度10%?90%，0?4℃静置过夜，离心取沉淀；将沉淀溶于蒸馏水，0?4℃透析8?12?h，除盐，冷冻干燥得芸豆凝集素粗品；（3）亲和层析：采用Affi?gel?blue柱，流动相A是10?100?mmol/L?tris?HCl，pH?6.8?7.4，流速为0.5?2mL/min，并用流动相A溶解凝集素粗提物；流动相B是在...

【技术特征摘要】
1.一种低血凝活性且高α-葡萄糖苷酶活性的芸豆凝集素的制备方法，其特征在于包括下列步骤: (1)芸豆提取物的制备:将芸豆预先浸泡后与tris缓冲液混合匀浆，0-4°C静置过夜提取，四层纱布过滤后离心，取上清液，得芸豆提取物； (2)硫酸铵沉淀:向上清液中加入固体(NH4)2SO4至饱和度10%-90%，0-4°C静置过夜，离心取沉淀；将沉淀溶于蒸馏水，0-4°C透析8-12 h，除盐，冷冻干燥得芸豆凝集素粗品； (3)亲和层析:采用Aff1-gel blue 柱，流动相 A 是 10-100 mmol/L tris-HCl, pH6.8-7.4，流速为0.5-2mL/min,并用流动相A溶解凝集素粗提物；流动相B是在流动相A中加入NaCl至浓度为1-3 mol/L,并用其进行洗脱；用280 nm的紫外光检测，收集各个蛋白峰，放入透析袋0-4°C对水透析12-36 h，冷冻干燥，分别检测其血凝活性，保留活性最高的组分进行下一步分离纯化； (4)离子交换柱层析:采用Cm-Sepharose柱,本步骤采用的流动相A是10-100mmol/L乙酸-乙酸铵，pH 4.5-5.5，流速为0.5-2mL/min,并用流动相A溶解上一步分离纯化得到的组分；流动相B是在本步骤流动相A中加入NaCl至浓度为0.05-1.2 mol/L,并用其进行洗脱；用280 nm紫外光检测，收集各个蛋白峰，放入透析袋0-4°C对水透析12-36 h，冷冻干燥，分别检测其血凝活性，收集活性最高的组分即为芸豆凝集素； (5)均质处理:将分离纯化得到的芸豆凝集...

【专利技术属性】
技术研发人员：任娇艳，赵谋明，崔春，刘岑岑，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：