免疫球蛋白级分及其方法技术

本发明专利技术涉及用作食品添加剂的含有IgA的组合物的制备。更具体地，本发明专利技术涉及制备富集IgA的乳制品提取物组合物的方法以及这样的组合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用作食品添加剂的含有IgA的组合物的制备。更具体地，本专利技术涉及制备富集IgA的乳制品提取物组合物的方法以及这样的组合物。
技术介绍
根据以前在本领域作的工作理解本专利技术。然而，以下的讨论并非承认或认可任何引用的材料在本申请的优先权日之前在澳大利亚被公开、使用或是作为公知常识的一部分。免疫球蛋白A(IgA)是在人的分泌物(包括乳汁)中主要的免疫球蛋白，其为机体提供抵抗病原体的保护，其结合到引起疾病的病毒、细菌、真菌及它们的毒素。IgA为婴儿提供抵抗上述病原体的必需保护。当口服时IgA抗体是有效的，这是因为其抵抗肠内酶的降解，因此使得其理想地作为营养品(nutraceuticals)或食品补充剂。IgA可与益生菌联用以抑制或降低由病原体引起的副作用。应用包括将IgA作为营养品成分以靶向病原体，所述病原体引起人粘膜表面例如鼻、眼、耳、肺、乳房部和阴道的感染。此外，含有IgA的产品适于肠和口部健康应用。由于通常存 在于牛奶中的IgA水平低，以商业规模提高IgA产量的现有方法是通过免疫方案以提高牛奶中的水平。典型地，牛奶包含比率为约1: 8的IgA 和 IgG0目前在全世界以实际上相同的方式使用实质上相同的方法生产用于食品消费的含有IgA的组合物。最常见的生产方法被称为超免疫法，借助此法给大量的牛施用致免疫物质(例如病毒)以产生超免疫应答。作为超免疫应答的结果，由赋予免疫性的牛产生的牛奶含有增加量的IgA，也称为“超免疫奶”。然后使用标准的膜技术浓缩所述超免疫奶以产生含有约5% w/w IgA的乳产品提取物，所述提取物可用作食品补充剂，例如婴儿配方奶。该生产超免疫奶的方法的固有问题在于，免疫法方案通常需最多达三个月在牛内产生超免疫应答，并且还需一个月收获足够数量的超免疫奶以生产商业数量的含有IgA的乳产品提取物。另外，与本专利技术的方法相比，此方法还是昂贵的。由于可变的糖基化，IgA具有在约4.5-6.5范围内的酸性等电点或pl，通常认为其不能以具有商业价值的量吸附到阳离子交换树脂上。本专利技术的方法令人惊奇地使得可以通过调节装载和洗脱条件，通过阳离子交换色谱从乳产品(例如脱脂乳)中分级IgA。这样的方法以前还未以商业规模实现。此外，本专利技术的方法还可包括在纯化乳产品的其它组分(例如乳铁传递蛋白、乳过氧化物酶或生长因子)的现有方法中，作为其一部分。此方法的一个实例是其中乳产品与阳离子交换树脂接触，随着流动相离子强度的增加，通过依次洗脱，首先洗脱富集IgA的级分，随后是贫IgA的乳过氧化物酶级分，然后是乳铁传递蛋白级分。
技术实现思路
本专利技术涉及制备富集IgA的乳产品提取物组合物的方法，其不需要超免疫牛并因此避免了与此相关的时间和成本。因此，本专利技术的目的在于提供富集IgA的乳产品提取物组合物以及其方法，所述方法可以以商业规模使用，其克服了现有技术中的至少一些缺点。术语“富集IgA的”意为在洗脱的乳产品提取物中IgA: IgG的比率与在分级之前的乳产品中的IgA: IgG的比率相比增加。根据本专利技术的一个方面，提供了制备富集IgA的乳产品提取物组合物的方法，所述组合物包含从乳产品中提取的IgA和IgG，其中IgA与IgG的相对含量与乳产品中IgA与IgG的相对含量相比升高，所述方法包括:提供:乳产品源；阳离子交换树脂；和流动相；使乳产品与阳离子交换树脂接触，使得IgA与IgG相比优先吸附在阳离子交换树月旨上;用流动相洗脱所述阳离子交换树脂；以及收集洗脱的富集IgA的级分。对本领域的技术人员而言，显而易见的是:在富集IgA的乳产品提取物组合物的制备中，所述乳产品不必局限于全牛奶，而是其它乳产品也可用作原料。在本专利技术的另一方面中，提供一种方法，其中所述乳产品选自全乳、脱脂乳、乳清和初乳。生产富集IgA的乳产品提取物组合物的特定条件可以变化，并仍产生富集IgA的级分。因此，在本专利技术一个优选的方面中，提供一种方法，其中采用含有0.05-0.4MNaCl (0.29-2.34% w/v)或等同离子强度、优选 0.08-0.35MNaCl (0.47-2.05% w/v))、更优选约0.17M NaCl (1% w/v)或等同离子强度的流动相进行洗脱。在替代方案中，可以使用其它合适的等同离子强度的流动相溶液。在本专利技术的另一方面中，流动相的pH为4.5-9，优选5.5-7.5，最优选pH约6.5。在本专利技术的另一方面中，在所述接触步骤期间，所述乳产品吸附于阳离子交换柱的流量可为6-90升每升树脂每小时(h)(线性流速60-900cm/h)。优选地，使用的流量为6-70升每升树脂每小时(h)(线性流速60-700cm/h)，更优选为6-40升每升树脂每小时(h)(线性流速60-400cm/h)。在这些流量下，已发现对于IgA的最佳分级,与阳离子交换树脂接触的乳产品的量为约16-300柱(床)体积，优选16-200柱体积，更优选16-40柱体积。在本专利技术的另一方面，在洗脱富集IgA的级分之前，用低离子强度的缓冲液(< 0.008M的盐或其等同物)或水清洗阳离子交换树脂，以除去残留在柱中的乳产品。此外，在本专利技术中可使用不同类型的阳离子交换树脂，其中优选Sepharose阳离子交换树脂珠，例如SP Sepharose Big Beads。进一步优选的是粒径范围为45-300 μ m的树脂珠。在本专利技术的另一方面中，提供一种方法，其中阳离子交换树脂包括Sepharose珠，优选在45-300 μ m的粒径范围内。本专利技术的方法 可作为连续方法或作为分批方法使用，优选连续方法。随后可处理洗脱的富集IgA的级分以降低其中的盐含量。脱脂乳含有约1-2.5%的IgG w/w和0.05-0.1 %的IgA w/w,牛血清含有20%的IgG w/w和0.4%的IgA w/w。专利技术人发现，采用本专利技术的方法获得的乳产品提取物浓缩物(洗脱物)令人惊奇地含有比预期更低水平的IgG w/w，其中IgA: IgG的比率通常在I: 2的级别上，这等同于IgA浓缩了八至十六倍。使用ELISA(酶联免疫吸附法)试剂盒进行IgA和IgG的定量。对于那些想要在食品物质中提供增加的IgA水平或作为营养品的人来说，IgA: IgG比率的增加具有重要的意义。之前未知在阳离子交换色谱洗脱物中IgA的存在和IgA与IgG的相对量(比率)。因此，本专利技术的另一方面提供一种方法，其中所得的富集IgA的乳产品提取物组合物包含至少1: 8的IgA: IgG比率，优选1: 4，更优选至少1: 2。可进一步处理富集IgA的乳产品提取物组合物，以减少存在的非IgA蛋白质的量。这可通过膜过滤、柱色谱、透析或其它已知的方法实现。对于标准化的食品物质或营养品的生产而言，这些无关蛋白质的去除可以认为是重要的。在本专利技术的另一方面中，提供富集IgA的乳产品提取物组合物，其中IgA: IgG的比率至少为1: 8，优选为1: 4，更优选为至少1: 2。根据本专利技术的另一方面，提供通过本专利技术的方法得到的富集IgA的乳产品提取物组合物。此外，本专利技术的乳产品提取物可被用作食品物质或营养品，优选作为婴儿食品物质或营养品。本专利技术的结果尤其令人惊奇，因为认为免疫球蛋白属于具有酸性等电点的一类蛋白质，因此不大可能保留在阳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备富集IgA的牛乳产品提取物组合物的方法，所述方法包括：提供：选自全乳、脱脂乳和乳清的乳产品源；包括Sepharose珠的阳离子交换树脂；和含有0.05?0.35M即0.29?2.05％w/v?NaCl或等同离子强度的流动相；使16?300柱体积的所述乳产品与所述阳离子交换树脂接触；用所述流动相从所述阳离子交换树脂洗脱富集IgA的级分；和收集洗脱的富集IgA的级分，其中所述组合物中IgA与IgG的相对含量为至少1∶4。

【技术特征摘要】
2005.05.10 AU 20059023721.种制备富集IgA的牛乳产品提取物组合物的方法，所述方法包括: 提供: 选自全乳、脱脂乳和乳清的乳产品源； 包括Sepharose珠的阳离子交换树脂；和 含有0.05-0.35M即0.29-2.05% w/v NaCl或等同离子强度的流动相； 使16-300柱体积的所述乳产品与所述阳离子交换树脂接触； 用所述流动相从所述阳离子交换树脂洗脱富集IgA的级分；和 收集洗脱的富集IgA的级分， 其中所述组合物中IgA与IgG的相对含量为至少1: 4。2.据权利要求1的方法，其中与所述阳离子交换树脂接触的所述乳产品的量是16-40柱体积。3.据权利要求1或2的方法,其中所述Sepharose珠在45-300μ m的粒径范围内。4.据权利要求1的方法，其中用含有0.17M即I % w/v的NaCl或等同离子强度的流动相进行洗脱。5.据权利要求1或2的方法，其中在洗脱富集IgA的级分之前，以低离子强度即< 0.008M的盐或其等同物的缓冲液或水清洗所述阳离子交换树脂以除去保留在柱中的未结合乳产品。6.据权利要求1或2的方法，其中用pH在5.5-7.5范围内的流动相进行洗脱。7.据权利要求1或2的方法，其中在所述乳产品与所述树脂接触的步骤期间，所述阳离子交换树脂经受6-90升每升树脂每小时的流量。8.据权利要求7的方法，其中所述接触流量为6-70升每升树脂每小时。9.据权利要求7的方法，其中所述接触流量为6-40升每升树脂每小时。10.据权利要求1或2的方法，其中所述方法为连续方法或分批方法。11....

【专利技术属性】
技术研发人员：安德鲁·布朗，彼得·霍布曼，理查德·佩因，米歇尔·罗尼，
申请(专利权)人：墨累古尔本合作有限公司，
类型：发明
国别省市：