【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于エ业微生物领域，涉及ー种强化两菌相互作用提高2-酮基-L-古龙酸产量的方法。
技术介绍
维生素C是机体营养、生长所必需的ー种微量水溶性维生素，在抗氧化和維持新陈代谢平衡等方面起着重要的作用。维生素C可以作为药品、保健品、食品添加剂及化妆品营养剂，它的应用范围在扩展，市场稳定。目前，我国生产维生素C的方法为“ニ步发酵法”，第一步发酵使用黑醋杆菌将山梨醇转化为L-山梨糖，第二步发酵为混合发酵，将山梨糖转化为维生素C的前体2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)。混合发酵所使用的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)混菌发酵，其中，氧化葡糖杆菌(Gluconobacteroxydans)为产酸菌，巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)为伴生菌,若不加入巨大芽孢杆菌而単独使用氧化葡糖杆菌时，生长极端缓慢，产酸效率低，当加入巨大芽孢杆菌，可使氧化葡糖杆菌生长速率提高，产酸量增加，但是，巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和氧化葡糖杆菌(Gluconobac...
【技术保护点】
一种强化两菌相互作用提高2?酮基?L?古龙酸产量的方法，其特征是包括如下步骤：(1)固体培养：取10?500μL保藏于体积浓度为15?30％的甘油水溶液中的氧化葡糖杆菌(Gluconobacter?oxydans)和10?500μL保藏于体积浓度为15?30％的甘油水溶液中的巨大芽孢杆菌(Bacillus?megaterium)分别接种于固体培养基上，28?35℃，培养24?48小时；(2)种子培养：将经步骤(1)培养的巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌分别转入种子培养基，在28?35℃，200?280r/min摇床振荡培养，24h?48h，得到巨大芽孢杆菌种子液和氧化葡糖杆菌种子...
【技术特征摘要】
1.一种强化两菌相互作用提高2-酮基-L-古龙酸产量的方法，其特征是包括如下步骤(1)固体培养取10-500yL保藏于体积浓度为15-30 %的甘油水溶液中的氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)和10-500 μ L保藏于体积浓度为15-30 %的甘油水溶液中的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)分别接种于固体培养基上,28_35°C,培养24-48小时；(2)种子培养将经步骤(I)培养的巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌分别转入种子培养基，在28-35°C，200-280r/min摇床振荡培养，24h_48h，得到巨大芽孢杆菌种子液和氧化葡糖杆菌种子液；将巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌接种到新的种子培养基中，使巨大芽孢杆菌的密度为 2X107-2X1010cfu/ml,使氧化葡糖杆菌的密度为 2X 108_2X 10ncfu/ml，在 28_35°C，200-280r/min摇床振荡培养，以24h_48h为传代周期，以体积比为1% -10%为传代比接入新的种子培养基中，传代100-200天；(3)分纯将步骤(2)获得的传代培养混菌菌株划线分纯，再分别接种于固体培养基上，28-350C培养24-48小时；再分别转入种子培养基，在28-35 V，200-280r/min摇床振荡培养24h-48h，得到进化了的巨大芽孢杆菌种子液和进化了的氧化葡糖杆菌种子液；(4)发酵将所述进化了的巨大芽孢杆菌和进化了的氧化葡糖杆菌接种到发酵培养基中，使进化了的巨大芽孢杆菌的密度为2X107-2X101(lCfu/ml，使进化了的氧化葡糖杆菌的密度为 2X108-2X10ncfu/ml,在 28-35 °C，200_280r/min 摇床振荡培养 72h_96h,获得 2-酮基-L-古龙酸或将所述原始巨大芽孢杆菌和进化了的氧化葡糖杆菌接种到发酵培养基中，使原始巨大芽孢杆菌的密度为2X 107-2X 101(lCfu/ml，使进化了的氧化葡糖杆菌的密度为 2X 107-2X 109cfu/ml，在 28-35 °C，200_280r/min 摇床振荡培养 72h_96h,获得 2-酮基_L_古龙酸。2.根据权利要求1所述的一种强化两菌相互作用提高2-酮基-L-古龙酸产量的方法，其特征是所述固体培养基的制备为按比例称取L-山梨糖10-50g，玉米浆2-10g，牛肉膏 2-10g,酵母浸粉 2...
【专利技术属性】
技术研发人员：元英进，邹旸，吕亚金，胡梦龙，汪洋，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：
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