本发明专利技术涉及预防、诊断、治疗、预后细菌感染相关疾病的方法和试剂。首次证明含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2(CRISPLD2)可结合细菌的LPS和单链DNA，其血清浓度与细菌感染引起的严重脓毒血症及浓毒性休克密切相关。以CRISPLD2蛋白为靶分子，检测个体血清CRISPLD2浓度，预测个体对细菌感染的敏感性，并通过跟踪CRISPLD2血清水平预后细菌感染引起的严重脓毒血症及浓毒性休克。且，通过提高血清中CRISPLD2蛋白的浓度，可预防和治疗细菌感染引起的严重脓毒血症及浓毒性休克。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域；更具体地，本专利技术涉及预防、诊断、治疗、预后细菌感染相关疾病的方法和试剂，特别是提供了一种混合细菌感染引起的严重脓毒血症及感染性休克预后，预防和治疗的新方法·。
技术介绍
细菌感染引起的脓毒血症至今仍然是危害人类健康的急性综合症，脓毒血症目前是美国排位第10的主要死亡原因，在中国脓毒血症的发病率和死亡率也不容乐观。全球每年至少有1800万例脓毒症发生，占世界总人口的O. 3%，我国估计为300万例/年计算。保守预测我国严重脓毒症和脓毒性休克病人为174万病人。革兰氏阴性以及阳性细菌引起的脓毒血症主要原因是由于细菌或细菌毒素侵入血流引起。健康者在病原菌入侵后，一般仅表现为短暂的菌血症，细菌可被人体的免疫防御系统迅速消灭，并不引起明显症状；但各种免疫防御功能缺陷者(包括局部和全身屏障功能的丧失)，都易诱发脓毒血症。放射治疗、广谱抗菌素、细胞毒类药物的应用，以及各种大手术致严重的开放性创伤等都是脓毒血症的重要诱因。单一微生物感染是指微生物培养中可以检出一个孤立的微生物体；多种微生物感染是指微生物培养中可以检出超过一个的微生物体，即多个微生物体。与单一微生物感染相比较，多种微生物感染引起的脓毒血症伴有较高并发症风险，较长的病程以及较高死亡率。细菌感染引起的脓毒血症以及浓毒性休克的诊断、预防治疗工作仍然面临许多挑战，监测血流中的微量细菌和细菌毒素都是可行的诊断方法但存在严重缺点，而且缺乏统一的标准。近20多年，发现一些可以应用于诊断的分子靶点的人血清分子可以应用于细菌感染的诊断，例如 B 型尿肽(B-type natriuretic peptide)、降血 I丐素原(Procalcitonin)、细菌聚脂多糖结合蛋白(LBP)、细菌渗透性增强蛋白(BPI)、可溶性⑶14(s⑶14)、Endocan等。其中降血钙素原(Procalcitonin)已被广泛应用于脓毒血症、严重脓毒血症、浓毒性休克的分类以及诊断，但它们都不能准确、有效预测浓毒性休克的发生。目前感染免疫学研究认为，引起脓毒血症以及浓毒性休克的病源分子主要是革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)、细菌核酸(DNA)、糖肽(PGN)以及磷脂壁酸(LTA);又发现细菌的单链DNA(ssDNA)可以保护个体，降低混合细菌感染的死亡率。革兰氏阴性菌感染往往伴随其它细菌的感染。多种抗原的病理协同作用还有待进一步研究，其原理有待揭示。因此，本领域迫切需要发现新的病理机制、开发的新的、有效地对严重脓毒血症以及浓毒性休克进行预后、预防和治疗的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供预防、诊断、治疗、预后混合细菌感染以及多种微生物感染相关疾病的方法和试剂。在本专利技术的第一方面，提供含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2(CRISPLD2)及其编码基因的用途，用于制备预防、缓解或治疗细菌感染或细菌感染相关疾病的药物。在一个优选例中，所述的药物用于阻断脂多糖(LPS)与靶细胞受体结合；或抑制脂多糖(LPS)诱导的炎症因子(如肿瘤坏死因子)释放。在另一优选例中，所述的药物用于从源头上控制脂多糖(LPS)诱导的一系列病理反应，以及修饰单链DNA的免疫调控功能。在另一优选例中，所述的含LC⑶和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2通过结合细菌单链DNA(ssDNA)和/或脂多糖(LPS)预防、缓解或治疗脓毒血症、严重脓毒血症或感染性休克。在本专利技术的另一方面，提供含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2或其编码基因的用途，用于制备诊断或预后脓毒血症、严重脓毒血症或感染性休克的试剂或试剂盒。在另一优选例中，所述的脓毒血症、严重脓毒症以及感染性休克是格兰氏阴性细菌及多种微生物感染引起的脓毒血症、严重脓毒症以及感染性休克。在另一优选例中，所述的细菌感染是格兰氏阴性细菌及多种微生物感染，可以包含格兰氏阳性细菌。在另一优选例中，所述的细菌感染是混合细菌感染。在另一优选例中，所述的混合细菌感染以及多种微生物感染包括内源性格兰氏阴性和阳性细菌混合感染或外源性格兰氏阴性感染。在另一优选例中，所述的细菌选自(但不限于)大肠杆菌，葡萄球菌，沙门氏菌，克雷伯氏菌，不动杆菌。在本专利技术的另一方面，提供特异性识别含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2或其编码基因的试剂的用途，用于制备诊断或预后细菌感染脓毒血症、严重脓毒血症以及感染性休克的试剂盒。在另一优选例中，所述的特异性识别含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2或其编码基因的试剂选自(但不限于)特异性扩增含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2基因的引物；特异性识别含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2基因的探针；或特异性结合含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2的抗体或配体。在另一优选例中，所述的特异性识别含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2的试剂是抗含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2的抗体，如多克隆抗体。在本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断或预后脓毒血症、严重脓毒血症以及感染性休克的试剂盒，它包括容器，以及位于容器中的特异性识别含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2或其编码基因的试剂；较佳地，为用于检测CRISPLD2血清浓度的试剂，如多克隆抗体。在本专利技术的另一方面，提供一种预防或治疗细菌感染或细菌感染相关疾病的方法，包括步骤提高需要的哺乳动物对象的血清中含LCCD结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2的浓度。在本专利技术的另一方面，提供一种预防、缓解或治疗细菌感染或细菌感染相关疾病的方法，该方法包括给予细菌感染者含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、显示了 ELISA检测的标准曲线。·图2、显示了重组CRISPLD2的鉴定结果。其中，A、10% SDS-PAGE胶分离纯化重组CRISPLD2分子，考马斯蓝鉴定；B、抗CRISPLD2抗体免疫印迹；C、抗c-myc-标记抗体免疫印迹。各泳道如下1，4和6为培养基中的CRISPLD2 ；2为分子量标准；3和5为对照培养基。图3、应用BIAcore技术测定的分子相互作用；CRISPLD2与LPS和单链DNA(OND)结合。其中，A、E.col i LPS(E. col1-LPS)与 CRISPLD2 结合解离的传感图。B、金黄色葡萄球菌(S. aureus) LTA (Aureus-LTA)与CRISPLD2结合解离的传感图。C、E-coli糖脂(PGN)与CRISPLD2结合解离的传感图。D、人工合成细菌单链GPC-DNA (0DN2006)与CRISPLD2结合解离的传感图。E、人工合成细菌单链CPG-DNA (0DN2006 (Ctr))与CRISPLD2结合解离的传感图。F、人工合成双链RNA(PolyI = C)与CRISPLD2结合解离的传感图。图4、盲肠结扎手术和穿刺诱导混合细菌感染脓毒血症以及低剂量LPS腹腔注射后血清CRISPLD2浓度的时间动力学曲线。A为大鼠盲肠结扎手术和穿刺诱导低度及中度混合细菌感染后血清CRISPLD2浓度变化。B为低剂量LPS腹腔注本文档来自技高网...
【技术保护点】
含LCCD和R3H结构域的半胱氨酸富集的分泌蛋白2或其编码基因的用途，用于制备预防、缓解或治疗细菌感染或细菌感染相关疾病的药物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王志勤，江宏铨，张新，M·K·霍夫曼，
申请(专利权)人：上海人类基因组研究中心，上海南方基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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