本发明专利技术公开了聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸-聚乙二醇-汉防己甲素和柔红霉素共聚物纳米粒及其制备和应用，具体步骤包括共聚物溶解在有机溶剂（O）中，形成油相聚合物，将药物溶解到水相(W1)中，再将水相慢慢加入至油相中乳化形成初乳(W1/O)，将制得初乳迅速加入至另一水相(W2)中，复乳化形成复乳(W1/O/W2)，将复乳化的纳米粒溶液中有机相挥干，高速冷冻离心机离心溶液，沉淀物用水重旋，离心，重复操作两次，制得PLGA-b-PLL-g-PEG包载的汉防己甲素和柔红霉素共聚物纳米粒。本发明专利技术共聚物纳米粒载体制备方法简便，药物装载方法适于工业化生产，环境污染少。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及高分子材料
和纳米靶向肿瘤给药领域，具体涉及PLGA-PLL-PEG-汉防己甲素/柔红霉素的制备，聚乳酸羟基こ酸-聚赖氨酸_聚乙ニ醇聚合物为骨架的纳米载药系统在传递抗肿瘤药物的应用。
技术介绍
化疗是目前治疗癌症的主要方法，然而化疗过程中产生的多药耐药(mult1-drugresistance, MDR)常常导致癌症化疗达不到预期效果。肿瘤细胞一旦对某种药物产生耐受，对其他多种化疗药物也会产生交叉耐受，这ー现象称为多药耐药。据美国癌症协会统计表明，肿瘤年死亡率中，90%以上肿瘤患者的死因都与多药耐药有关。因此，如何逆转多药耐药成为癌症治疗亟待解决的关键问题。长期以来，多药耐药逆转剂的研究一直是血液病领域研究的热点问题。现已证明，由MDRl基因编码的P-糖蛋白(P-gp)过度表达是肿瘤细胞产生MDR的重要原因。Ρ-gp的本质是ー种能量依赖性药物排出泵，可消耗细胞能量将细胞内药物泵出细胞外，从而使细胞内药物浓度下降，药物作用减弱直至丧失，最终导致MDR和肿瘤化疗的失败。因此，逆转MDRl基因与P-gp过度表达成为提高化疗成功率的关键因素。目前，针对P-gp过表达而开发的肿瘤耐药逆转剂主要有钙离子通道阻滞剂、环孢菌素类等。这些化疗药物虽然体外可以完全或部分逆转MDR，但其普遍存在的问题是特异性差，且产生逆转作用的剂量远大于其产生毒性的限制剂量，对心血管系统、免疫系统等有明显的不良反应，因而不适于应用于临床。环孢菌素D衍生物(PSC-833)由瑞士诺华公司研制，是迄今为止国际上第一个进入到临床随机试验的P-gp抑制剂，但由于PSC-833临床试验未见明显耐药逆转作用，目前其上市进程已被全面叫停，意味着目前临床上MDR面临着无药可用的境地。因此，继续寻找新型低毒高效的MDR逆转剂依然是目前研发相关药物的主要方向。而中药及其有效成分，由于其低毒且源自天然植物的特性，逐渐成为MDR抑制剂的研发重点，如汉防己甲素、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱等陆续被证明具有逆转肿瘤多药耐药的作用。汉防己甲素(Tet)是植物汉防己的根中的主要活性成分，是ー种对心脏低毒性的钙通道拮抗剂，能够抑制mdrl活化从而抑制P-gp的过度表达，其体外逆转MDR的活性是维拉帕米的10倍，同时具有显著的体内逆转活性，是非常具有开发前景的第三代MDR逆转剂。汉防己甲素对人白血病耐药细胞株K562/A02具有较强的MDR逆转作用，可以增强柔红霉素(DNR)对K562/A02的细胞毒作用。随着汉防己甲素浓度的增加K562/A02细胞中高表达的耐药相关的可溶性钙结合蛋白(SORCIN)基因及sorcin蛋白的表达先增强后减弱，显示汉防己甲素对K562/A02耐药逆转呈浓度依赖性，汉防己甲素可能通过调整SORCIN基因及蛋白的表达參与逆转K562/A02的耐药性；p21蛋白的表达随着TET浓度的増加逐渐增强；mdrl基因的表达随着汉防己甲素浓度的増加不断降低；P_gp的表达随着Tet浓度的增加而逐渐减弱。汉防己甲素作用后，可明显降低K562/A02细胞NF-KB蛋白核转位和胞核NF-KB蛋白表达水平，可能通过抑制NF-KB活化逆转K562/A02细胞多药耐药性。同时，动物实验表明，汉防己甲素在荷瘤鼠体内可达到良好的疗效及安全性。然而汉防己甲素具有半衰期短、有局部刺激性、在水中溶解度低、注射给药毒性较高的等问题，且汉防己甲素常规用药很难达到靶细胞，因此开发具有长效、低毒、低刺激性的汉防己甲素新型载药系统势在必行。采用高分子聚合物和天然的高分子材料装载的药物纳米载体可以有效提高抗肿瘤效果，目前成为国际上抗肿瘤研究关注的重点领域。纳米载体具有主要优点如下(I)具有较高的药物包载能力，能够包载的药物范围较广，可以是疏水性的药物也可以是亲水性药物，并且无论单方药还是复方药均可包载；(2)有缓释作用，能够延长药物的作用时间；(3)通过修饰可形成亲水端，从而防止蛋白质的吸附，躲避网状内皮系统的捕捉；(4)粒径小且分布窄，易通过生理屏障，在体内具有独特的分布特征。纳米粒在体内的分布主要取决于粒径的大小和表面形态，与核内包裹的药物性质关系不大；(5)可在保证药效的前提下，減少给药剂量，从而减轻或避免毒副作用。 目前用于制备纳米给药系统的载体种高分子载体材料有多种，如聚α-羟基酸，、乳酸-羟基こ酸共聚物(PLGA)、交联聚酯、聚氰基丙烯酸烷酯(PACA)、天然蛋白、壳聚糖、明胶等。本专利技术选择PLGA-PLL-PEG共聚物作为汉防己甲素的载体。以PEG-PLL-PLGA共聚物作为药物载体的优势明显(I)能够有效減少PLGA被网状内皮系统的摄取，从而增加载体的稳定性，延长其体循环时间；(2)可以通过调节PEG-PLL链的长度来影响聚合物体内的降解性和药物的释放行为，改善药物的释放动力学特征；(3)在共聚物载体上引入PLL可有效增加细胞的摄取率，提高药物疗效；(4)PEG-PLL与PLGA共聚后可以增强聚合物的亲水性，增强了载体对亲水性药物的装载能力。目前PLGA-PLL-PEG共聚物作为载体的合成技术已相对比较成熟。PLGA-PLL-PEG载体已被广发应用于多个领域，如应用PLGA-PLL-PEG载体连接R⑶蛋白作为人造血小板用于创伤性出血的治疗；应用PLGA-PLL-PEG包载脑原性神经因子BDNF用于神经蛋白损伤的治疗；应用PLGA-PLL-PEG载体，采用复乳溶剂挥发法包裹SiRNA，用于肿瘤细胞的基因干扰等。柔红霉素作为ー种周期非特异性化疗药，主要用于各种类型的急性白血病(包括粒细胞性、淋巴细胞性和单核细胞性以及粒-単核细胞性)、慢性粒细胞性白血病、恶性淋巴瘤，是ー种非常好的抗肿瘤模型药物。但因柔红霉素易诱发不可逆性心脏毒性，从而限制了它的临床应用。而通过药物载体系统可以改变阿霉素的体内分布，減少其毒副反应的发生。本专利技术采用PLGA-PLL-PEG共聚物同时包载了柔红霉素与汉防己甲素，可以考察汉防己甲素的MDR逆转效果，以期开发可用于临床的低毒高效的主动靶向耐药逆转剂。參考文献陈宝安，董颖，张鹏，程坚，周云，盛茗，王婷，高峰.汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞多药耐药的研究.中华血液学杂志2002; 23 (12) :660-1.Brannon-Peppas L, Blanchette JO. Nanoparticle and targeted systemsfor cancer therapy. Adv Drug Deliv Rev.2004, 56(11):1649-1659.Bertram JP, Rauch MF, Chang K, Lavik EB. Using Polymer Chemistryto Modulate the Delivery of Neurotrophic Factors from DegradabIe Microspheres:Delivery of BDNF. Pharm Research. 2010, 27(I):82-91. Zhou J，Patel TRj Fu Mj Bertram JPj Saltzman WM. Octa-functional PLGA nanoparticles for t本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种聚乳酸羟基乙酸?聚赖氨酸?聚乙二醇?汉防己甲素和柔红霉素共聚物纳米粒，其特征在于聚乳酸羟基乙酸与聚赖氨酸连接为嵌段结构，聚赖氨酸与聚乙二醇之间为接枝结构，聚乳酸羟基乙酸?聚赖氨酸?聚乙二醇聚合物的分子量为4×104?5×105；所述纳米粒子粒径范围为100?1000nm；聚乳酸羟基乙酸?聚赖氨酸?聚乙二醇聚合物包载的药物为汉防己甲素和柔红霉素；包载药物使用的方法为自乳化溶剂挥发法、乳化溶剂挥发法、复乳化溶剂挥发法。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈宝安，王永禄，刘苒，李学明，郭莉婷，陈卫，程坚，殷海祥，张孝平，鲍文，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：
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