石杉碱甲的单克隆抗体制备方法及其酶联免疫检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及免疫化学及分析生物技术领域，尤其涉及石杉碱甲的单克隆抗体制备方法及其酶联免疫检测试剂盒。本发明专利技术的目的是提供一种石杉碱甲含量的ELISA检测和分析方法，利用制备的石杉碱甲人工抗原免疫动物，将免疫小鼠的皮细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，制备抗石杉碱甲的单克隆抗体，制备石杉碱甲的酶联免疫检测试剂盒检测石杉碱甲的含量。本发明专利技术有益效果：本发明专利技术特异性强，样品前处理简便，灵敏度高，便于进行现场监测。所需仪器设备简单，检测成本低、时间短、过程简化，样品量少，实用性强，可以满足中医药开发利用及其有关研究单位批量检测相关植物体内石杉碱甲含量的需要。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫化学及分析生物
，尤其涉及石杉碱甲的单克隆抗体制备方法及其酶联免疫检测试剂盒。
技术介绍
石杉碱甲(huperzine A, HupA),是从石杉科石杉属植物蛇足石杉[Huperzinaserrata(Thumb. )Trev]的酹性部分中提取的一种新型石松类天然生物碱。作为第二代乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)抑制剂,具有高效、高选择性、可逆性等特点。目前石杉碱甲主要用于阿尔兹海默病(alzheimer’s disease, AD)的治疗,可显著改善记忆功能损伤和行为与心境障碍。国内外学者研究证实，石杉碱甲对血管性痴呆(vascular dementia, VD)、智力低下、精神分裂症、重症肌无力等患者有一定的治疗作用。石杉属植物以石杉碱甲作为药用成分的定量指标，目前最常用的检测方法有薄层扫描法(TLCS)、紫外分光光度法(UV)、核磁共振波谱法(NMR)、高效液相色谱法(HPLC)及其联用技术等，但存在对实验室和仪器化程度要求高，将待测成分从样品中分离提取并去除共存杂质干扰的前处理过程十分复杂，需经提取、分离、纯化和衍本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种石杉碱甲单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1利用戊二醛法合成石杉碱甲人工抗原，所述石杉碱甲人工抗原的结构如结构式1所示：所述结构式1中，R为BSA、OVA、KLH、HSA，BSA是牛血清白蛋白，OVA是卵清蛋白，KLH是钥孔血蓝素，HSA是人血清白蛋白；步骤2利用步骤1所得的石杉碱甲人工抗原制备石杉碱甲单克隆抗体；步骤21用石杉碱甲人工抗原免疫小鼠，检测其效价；步骤22将效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG下融合，获得阳性杂交瘤细胞，并采用有限稀释法进行阳性杂交瘤细胞的亚克隆；步骤23采用小鼠体内诱导法生产石杉碱甲单克隆抗体；步骤24采用辛酸硫酸铵沉淀法、免疫...

【技术特征摘要】
1.一种石杉碱甲单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 步骤I利用戊二醛法合成石杉碱甲人工抗原，所述石杉碱甲人工抗原的结构如结构式I所示2.根据权利要求I所述的石杉碱甲单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤I具体为将半抗原石杉碱甲与戊二醛搅拌反应2h ;另取含BSA的0. OlM pH 7. 2磷酸盐缓冲溶液PBS与上述溶液继续搅拌2-3h ;加入硼氢化钠继续搅拌Ih ;然后用蒸馏水或0. OlM pH7.2的PBS透析4-5天；离心得到上清液，即得免疫原；所述的半抗原石杉碱甲与BSA的质量比为3 8。3.如权利要求I所述的石杉碱甲单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤2具体为 步骤21将步骤I所得石杉碱甲人工抗原即免疫原与弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂等体积乳化后，皮下、肌肉多点免疫Balb/c小鼠，每两周加强免疫一次，免疫4-6次，检测其效价； 步骤22将效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG下融合，获得阳性杂交瘤细胞，并采用有限稀释法进行阳性杂交瘤细胞的亚克隆； 步骤23采用小鼠体内诱导法生产单克隆抗体，将阳性杂交瘤细胞注入预先腹腔注射液体石蜡的小鼠腹腔内，...

【专利技术属性】
技术研发人员：余宇燕，吴水生，滕海英，邹艳辉，
申请(专利权)人：福建中医药大学，
类型：发明
国别省市：