一种防治奶牛乳房炎的多价卵黄免疫球蛋白的制备方法及应用技术

一种防治奶牛乳房炎的多价卵黄免疫球蛋白的制备方法及应用，将其通过乳池注射应用于奶牛乳房炎的防治，达到抑杀细菌和增强牛体免疫功能的双重效果，显著降低乳汁中的体细胞数，提高治愈率，解决目前在防治奶牛乳房炎方面大量使用抗生素的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及到奶牛养殖
，特别涉及到一种防治奶牛乳房炎的卵黄免疫球蛋白(IgY)及其制备方法，此种IgY可以用作饲料添加剂或药物浸浴剂或泼洒剂的活性成分防治奶牛乳房炎。2.
技术介绍
2. I奶牛乳房炎奶业是节粮、高效、产业关联度高的产业。奶业的平稳健康发展，对于改善居民膳 食结构、提高全民身体素质，促进农村产业结构调整、农民增收及城乡协调发展，带动国民经济相关产业的发展等，都具有十分重要的意义。改革开放以来，我国奶牛养殖业发展迅速，1990年全国奶牛存栏量为268万头，2000年存栏量达490万头，2006年存栏量达到1401万头、牛奶产量3245万吨，成为仅次于美国、印度的第三大产奶国。但是，奶牛乳腺炎作为奶牛养殖业中一种常见、复杂的疾病，给各国奶业带来巨大的负面影响，是造成奶牛业经济损失的主要原因。据报道，在美国，被淘汰的奶牛中26. 5%是因为患有乳腺炎，而在芬兰、挪威和瑞典因为乳房健康问题而被淘汰的奶牛分别占35 %、19 %和22 % (储明星等，2001)。在我国，奶牛乳腺炎被认为是奶牛场最严重的疾病之一，其发病率达20 9Γ70 %，每年因乳腺炎造成的经济损失为15(Γ450亿人民币。此外，奶牛乳腺炎在造成经济损失、降低牛奶品质的同时，也间接的危害着人类的健康。乳腺炎是奶牛的一种常见多发病，分为临床型和隐性型两种。临床型乳腺炎是乳腺体或乳腺体周围结缔组织的炎症或是两者同时发炎，隐性型乳腺炎是乳腺体的部分乳腺小叶的炎症。隐形乳腺炎由于没有临床症状，易被忽视，更易造成经济损失。而奶牛乳腺炎的主要形成原因是由病原微生物引起的。已发现约有150种病原体可引起奶牛乳腺炎，其中，金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌是3种最主要的致病菌。尽管西方一些国家对此病已进行一百多年的研究，但至今仍未能提出一个彻底解决的办法。而我国对此病的研究起步较晚，始于20世纪80年代初，虽在20多年的研究中取得了显著的成绩，但仍未达到彻底解决的目标。早期，对乳腺炎防治的研究主要集中在抗生素上，自从1945年青霉素用于治疗乳腺炎以来，因其疗效显著而使抗生素治疗奶牛乳腺炎得到了不断的发展。大量抗生素在乳腺炎的治疗中得到广泛应用，如四环素、庆大霉素、红霉素、头孢菌素、多粘菌素等。抗生素的疗效与抗生素本身的性质、到达乳房的有效浓度、用药次数及给药时间等有关。在抗生素治疗奶牛乳腺炎的过程中诸多不利因素也逐渐呈现出来一，致病细菌易出现抗药性，导致耐药菌株不断出现；二，单一药物抗菌谱不够广，往往需要几种抗生素联合使用，花费较高；三，导致其他一些副作用，如肠道菌群失调，影响食欲等；四，造成牛奶中药物残留及奶牛体内药物积蓄，间接危及人类健康。GUler等检测了 265株分离自乳腺炎奶样的金黄色葡萄球菌，其中63. 3 %对青霉素和阿莫西林有耐药性，27. 9 %对四环素不敏感，对复方新诺明产生耐药性的占I. 8 %，未分离到对诺氟沙星、卡那霉素的耐药菌株。在抗生素治疗奶牛乳腺炎的诸多不利因素中，细菌耐药性导致抗生素对奶牛乳腺炎的疗效降低是急需解决的问题。中草药治疗是目前国内外关注的热门课题，中草药不仅能够抗菌消炎还具有调节机体免疫机能、行气活血、散结消肿、通经下乳等功能，在治愈乳腺炎的同时，还能促进奶牛乳汁分泌。现报道治疗乳腺炎的中草药主要有鱼腥草、蜂胶合剂、公英瓜萎汤、桃红散、复方丹参液、枇杷叶、绿草素等。其不足之处表现在一，品种较少，大多停留在散剂、煎剂等剂型上；二，生产工艺相对滞后，有效成分不能充分提取利用；三，中药配方无固定标准，使用者大多自行配方；四，奶中残留大量的中药，严重影响牛奶的风味。免疫疗法作为控制奶牛乳腺炎的新的突破口正日益受到国内外学者的关注。作为主动免疫疗法，采用疫苗防治乳腺炎是通过注入灭活菌或弱毒苗激发病牛体内的特异抗体达到杀菌消炎的目的。金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的主要致病菌，针对该菌的疫苗研究较多，包括灭活菌苗、活菌苗和亚单位苗。Watson等采用活的金黄色葡萄球菌苗,Nordhaug 等采用灭活的金黄色葡萄球菌苗治疗奶牛乳腺炎。金黄色葡萄球菌有多种血清型，引起乳腺炎的主要是5、8和336三种血清型的金黄色葡萄球菌。Ma等以5株此三种血清型的金黄色葡萄球菌的混合菌苗治疗奶牛乳腺炎。目前使用的亚单位苗主要针对金黄色葡萄球菌的荚膜多糖、细菌毒素及黏附因子等菌体的组成部分或分泌物。这些疫苗只能一定程度地预防乳腺感染，对已经感染的乳腺疗效不佳。大肠埃希氏杆菌J5 (0111:B4)是一种粗糙型变种，具有不完全O-多糖成分，核心抗原暴露在外，容易产生免疫应答。Hogan等以该疫苗免疫奶牛，可使奶牛临床型乳腺炎的发生率降低，但并没有减少乳腺感染革兰阴性的菌几率，产奶量和阴性对照组比较也无明显差异。但这些疫苗只能一定程度地预防乳腺感染，对已经感染的乳腺疗效不佳，同时，由于致病因素复杂，目前的疫苗很难对各种乳腺炎都起到良好的治疗效果，多联疫苗有望解决此问题。卵黄免疫球蛋白(egg yolk immunoglobulin, IgY),又称为卵黄抗体,是大量存在于禽类卵黄中的免疫球蛋白。当用某种抗原免疫雌性禽类后，机体可产生针对这一抗原的持久性应答，血清中首先产生相应的特异性抗体，随后这些抗体会被选择性地转移到卵黄中。IgY具有无毒、无残留、不产生抗药性等优点，发展前景备受瞩目。目前研究较多的是鸡卵黄抗体。IgY的特点及优越性体现在如下方面一，禽类与哺乳类种系发生学距离远，因此禽类更适于生产抗哺乳动物抗原的抗体，并且IgY比哺乳动物IgG对抗原的亲和力更高。二，化学性质稳定。卵黄抗体作为一种具有生物活性的免疫球蛋白，在贮存、生产和加工以及摄食及消化过程中，保证抗体活性的稳定性是非常关键的。多项试验表明，鸡IgY具有较好的稳定性，耐酸、耐碱、耐热。三，在实际生产中，动物的采血不仅对动物本身是极大的应激，而且费时、费工，大规模生产是不切实际的，而利用蛋鸡生产抗体要方便的多。四，IgY作为外源性抗体给予动物口服或外用后，可与抗原物质发生特异性结合，从而发挥其中和、抑制、清除病原体(如细菌、毒素、病毒等)的生物学功能。五，IgY来源于卵黄，作为药物使用，不会导致不良反应，也不会因为蓄积而造成中毒。基于IgY的上述种种优良特性，人们先后开发了一些用于口服或注射的卵黄抗体产品，这些产品在防治人畜疾病方面均取得了一定的效果。2. 2金黄色葡萄球菌外毒素与乳房炎关系2.2.1 PVL杀白细胞素及α-毒素与乳房炎的关系Bramley等在小鼠乳房炎模型中发现，表达α-毒素及β-毒素的金葡菌与其突变株相比明显更易于在乳腺中定殖并增殖，而且这项研究表明α -毒素表达株可使60%的小鼠在48小时内致死，α-毒素突变株可引起慢性乳房炎，但是小鼠并不死亡。奶牛乳腺内的嗜中性粒细胞(PMNs)是机体对抗感染的主要杀伤性细胞。Barrio等研究表明，O. InM的PVL-杀白细胞素在Ih内就可裂解掉约90%的PMNs。由于金葡菌可表达众多细胞外毒素，所以很难建立动物模型考察单一毒素(只表达一种毒素)对乳房炎的作用，研究人员只能将毒素纯化或者通过定点突变的方式使细菌不能表达某一毒素，从而考察其在乳房炎中的作用。这些方法虽本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防治奶牛乳房炎的多价卵黄免疫球蛋白的制备方法，其特征如下：采用5型、8型和336型三种血清型金黄色葡萄球菌全菌及其外分泌毒素经灭活处理后分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂混合，充分乳化，制成弗式完全佐剂疫苗和弗式不完全佐剂疫苗；初免采用弗氏完全佐剂疫苗，二免和三免采用弗式不完全佐剂疫苗；第三次免疫后，定期收集免疫鸡蛋的蛋黄，获得特异性卵黄免疫球蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种防治奶牛乳房炎的多价卵黄免疫球蛋白的制备方法，其特征如下采用5型、8型和336型三种血清型金黄色葡萄球菌全菌及其外分泌毒素经灭活处理后分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂混合，充分乳化，制成弗式完全佐剂疫苗和弗式不...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐永平，王林会，李晓宇，金礼吉，甄宇红，尤建嵩，续繁星，卢亚楠，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：