预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体及其制备方法和应用，抗体的制备方法：将保藏编号为CCTCCNO:M2012024的鮰爱德华氏菌（Edwardsiellaictaluri）灭活后分次接种产蛋禽，获得含抗鮰爱德华氏菌的抗体的免疫蛋；上述抗体可应用在预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的药物中。本发明专利技术的特点在于：该抗体特异性高、无毒、无残留、无耐药性、无生物安全隐患；制备该抗体的方法简单、较为快速；尤其是该抗体可以制成粉剂，作为饲料添加剂或者预配料直接投喂或全池泼洒，克服了其他抗体药物只能注射或浸泡才能有效的缺点，使用十分方便，大大降低了劳动强度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗体及其制备方法和应用，具体涉及一种用于预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
黄颡鱼、鮰鱼、鲶鱼等无鳞鱼是我国优质的名贵淡水鱼类，这些鱼类不仅肉质鲜嫩、少肌间刺,而且营养价值高,深受广大消费者的喜爱。然而近年来,各地的黄颡鱼、美国叉尾鮰、鲶鱼的养殖区暴发一种流行病，其主要症状为鳍条基部、口腔、下颌、鳃盖、眼眶充血，头顶正中部位皮下发红，严重时头骨裂开，在头顶部出现一条狭长的溃烂出血带，呈现典型的“红头病”症状。该种疾病具有传染性强、死亡率高等特点，已成为制约无鳞鱼尤其是黄颡鱼养殖业的健康发展的瓶颈问题。目前各养殖区采取的应对方法主要是使用广谱抗菌素，然而该种方法不仅会增加治疗成本，而且还会带来耐药性的产生及鱼体内残留抗生素的超标等诸多问题。因此，寻找一种特异性高又无残留的抗红头病抗生素替代品成为黄颡鱼养殖业亟需解决的问题。从免疫学角度出发，制备特异性的抗病原菌的抗体，是防病治病的可持续发展思路。目前，公开号为CN101829321A的专利文献已公开了制备抗黄颡鱼红头病疫苗的方法用福尔马林灭活菌苗得到安全可靠的疫苗，通过浸泡和注射的方式给药，免疫保护达70%-95%。然而这种疫苗在规模化养殖中使用有一定的局限性①劳动强度大；②受免鱼容易受伤，造成继发性疾病；③预防工作要提前做好，对于病鱼无治疗作用。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种使用方便、不会损伤鱼类、既可以预防又可以治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体及其制备方法。为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体的制备方法，其特征在于，用经灭活剂灭活的鮰爱德华氏菌BRK-ADHSJ (Edwardsiella ictaluri BRK-ADHSJ)分次接种产蛋禽，获得免疫蛋，前述免疫蛋中含有抗爱德华氏菌的抗体。前述的预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体的制备方法，其特征在于，前述鮰爱德华氏菌BRK-ADHSJ为保藏编号为CCTCC N0:M2012024的菌株。前述的预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体的制备方法，其特征在于，前述灭活剂为甲醛。预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体，其特征在于，利用如下的方法制得用经灭活剂灭活的鮰爱德华氏菌BRK-ADHSJ分次接种产蛋禽，获得免疫蛋，前述免疫蛋中含有抗鮰爱德华氏菌BRK-ADHSJ的抗体。前述的预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体，其特征在于，前述鮰爱德华氏菌3BRK-ADHSJ为保藏编号为CCTCC N0:M2012024的菌株。前述的抗体应用在制备预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的药物中。前述的应用，其特征在于，用新鲜的免疫蛋经海藻糖微包膜后喷雾干燥制成含有前述抗体的粉剂，前述粉剂作为饲料添加剂或者预配料直接投喂。前述的应用，其特征在于，用水做辅料，将前述抗体制成水剂或者专用的浸浴剂使用。本专利技术的有益之处在于预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体特异性高、无毒、无残留、无耐药性、无生物安全隐患；制备该抗体的方法工业化程度高，效率高；将该抗体应用到制备预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的药物中，与广谱抗生素的使用不同，使用含有该抗体的药物不会改变病鱼的免疫状态，使用抗体后病鱼的免疫系统依然能够对其他外源侵害做出有效的反应；该抗体不仅可以制成水剂或者专用的浸浴剂使用，尤其可以制成粉剂，作为饲料添加剂或者预配料直接投喂或全池泼洒，克服了其他抗体药物只能注射或浸泡才能有效的缺点，使用十分方便，大大降低了劳动强度。附图说明图I是保藏编号为CCTCC N0:M2012024的菌株16S rRNA基因序列与鮰爱德华氏菌标准菌株(AB453281. K EU285522. UEF015475. I)的 16S rRNA 基因序列比对图。具体实施例方式以下结合具体实施例对本专利技术作具体的介绍。预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体的制备方法，包括如下步骤①分离纯化病原菌；②确定该分离纯化所得病原菌为鮰爱德华氏菌BRK-ADHSJ (Edwardsiellaictaluri BRK-ADHSJ);③获取含抗鮰爱德华氏菌BRK-ADHSJ的抗体的免疫蛋。第一步分离纯化黄颡鱼“红头病”病原菌I、材料试验病鱼为具典型“红头病”症状的黄颡鱼，采自于浙江湖州某养殖场。2、方法首先，取活的具典型症状的病鱼，用无菌生理盐水冲洗体表2次，用接种环于肝脏、肾脏和头部发红部位的脑组织取样。然后，在TSA、普通营养琼脂培养基上进行平板划线，28°C恒温培养48h后，挑取形态特征一致的优势菌落进行分离培养3次，再接种于TSB液体培养基上继续扩大培养。最后，菌液加甘油于-80°C保存，作为试验用菌株待用。第二步确定第一步分离纯化所得病原菌为鮰爱德华氏菌BRK-ADHSJ实施例一人工感染试验I、材料试验用健康黄颡鱼为取自苏州吴江某养殖场的健康黄颡鱼鱼种，规格为35 土 5g，塑料袋充氧运回实验室，于水族缸内暂养，试验水体经连续充氧循环过滤，使用自动控温仪控制试验水温(28±1) °C，暂养期间不投饵。2、方法黄颡鱼暂养5天后开展人工感染试验。取_80°C保存的试验用菌株，接种在TSA平板上，28°C培养48 h。无菌生理盐水冲洗下培养物并倍比稀释成不同浓度的菌悬液。肌肉注射暂养稳定后的试验鱼，每尾注射O. 2 mL，对照组注射等量生理盐水，每试验浓度组设置重复组。试验鱼放置于20 L的水族缸，每缸放养10尾，内循环过滤处理氨氮、亚硝酸盐及增氧，控温仪自动控温在28 °C，每天观察、记录试验鱼死亡情况，及时取出死鱼，连续观察14天。人工感染的结果见表I :表I分离到的菌株人工感染120h后的试验结果权利要求1.预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体的制备方法，其特征在于，用经灭活剂灭活的鮰爱德华氏菌(Mdwardsiella icia7 ri)分次接种产蛋禽,获得免疫蛋,上述免疫蛋中含有抗鮰爱德华氏菌的抗体。2.根据权利要求I所述的预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体的制备方法，其特征在于，上述鮰爱德华氏菌为保藏编号为CCTCC N0:M2012024的菌株。3.根据权利要求2所述的预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体的制备方法，其特征在于，上述灭活剂为甲醛。4.预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体，其特征在于，利用权利要求I所述的方法制得。5.根据权利要求4所述的预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体，其特征在于，上述爱德华氏菌为保藏编号为CCTCC N0:M2012024的菌株。6.权利要求4所述的抗体在制备预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的药物中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，用新鲜的免疫蛋经海藻糖微包膜后喷雾干燥制成含有上述抗体的粉剂，上述粉剂作为饲料添加剂直接投喂。8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，用水做辅料，将上述抗体制成水剂全池泼洒。全文摘要本专利技术公开了一种预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体及其制备方法和应用，抗体的制备方法将保藏编号为CCTCCNO:M2012024的鮰爱德华氏菌(Edwardsiellaictaluri)灭活后分次接种产蛋禽，获得含抗鮰爱德华氏菌的抗体的免疫蛋；上述抗体可应用在预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的药物中。本专利技术的特点在于本文档来自技高网...

【技术保护点】
预防及治疗鱼类鮰爱德华氏菌病的抗体的制备方法，其特征在于，用经灭活剂灭活的鮰爱德华氏菌（Edwardsiella？ictaluri）分次接种产蛋禽，获得免疫蛋，上述免疫蛋中含有抗鮰爱德华氏菌的抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘海燕，宋学宏，包光明，郭培红，张志华，刘金龙，
申请(专利权)人：无锡贝瑞康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：