一种基因工程包涵体的洗涤方法技术

本发明专利技术公开了一种基因工程包涵体的洗涤方法，该方法采用中空纤维膜处理基因工程包涵体的洗涤，可实现连续自动操作，工艺过程简单，操作方便，提高了生产效率，得到的包涵体收率高、纯度高、特别适合于大规模工业化生产上的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及，特别涉及了一种利用中空纤维滤膜对基因工程包涵体进行洗涤的方法。
技术介绍
基因重组技 术可以用来大量生产自然界极其微量的功能蛋白或多肽，大肠杆菌等原核生物因其生长速度快，营养要求低，通常作为基因重组技术的首选宿主菌。然而，用大肠杆菌高效表达的重组蛋白常常会形成不溶性的且无活性的包涵体。包涵体是重组基因在表达过程中因蛋白质的二级结构错误折叠所形成的一种致密性的结构，这种结构有利于重组蛋白不被胞内蛋白酶水解，保证了重组蛋白的高效表达。基因工程包涵体可以通过变性剂将其溶解，再缓慢除去变性剂，从而使其恢复天然活性。由于基因包涵体不仅仅含有重组蛋白，还有外膜蛋白，质粒DNA和其他杂质，因此为了提高包涵体的质量，增加其中重组蛋白的含量，以利于重组蛋白重新折叠恢复其天然构象，通常需要将包涵体经过充分洗涤，以除去细胞膜等脂溶性组分，杂蛋白，核酸等物质， 提高包涵体的纯度。包涵体洗涤的传统方法为第一次洗涤加入含一定比例去垢剂(曲拉通、吐温等)的缓冲液，将包涵体悬液搅拌洗涤一定时间后离心去除上清，收集沉淀；第二次洗涤加入含低浓度变性剂(2-4M脲、1-2M盐酸胍)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因工程包涵体的洗涤方法，其特征在于包括如下步骤：a、膜平衡：取中空纤维膜，用纯化水润洗平衡，调整进水流速使过膜压力为5～15?bar，透过通量为10～30?LMH；b、第一次洗涤：配制洗涤缓冲液Ⅰ，按5～15：1（V/W）加入包涵体，搅拌使成悬浮液，将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5～15?bar，透过通量为10～30?LMH，包涵体悬液被浓缩3～5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液Ⅰ的组成为20～100?mM?Tris?HCl，1～5%?曲拉通?X?100，pH9.0，或者组成为20～100?mM?Tris?HCl，1～5%?吐温?20，pH9.0；c、第二次洗...

【技术特征摘要】
1.一种基因工程包涵体的洗涤方法，其特征在于包括如下步骤a、膜平衡取中空纤维膜，用纯化水润洗平衡，调整进水流速使过膜压力为5 15 bar，透过通量为10 30 LMH ；b、第一次洗涤配制洗涤缓冲液I，按5 15:1 (V/W)加入包涵体，搅拌使成悬浮液， 将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5 15 bar，透过通量为10 30 LMH, 包涵体悬液被浓缩3 5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液I的组成为 20 100 mM Tris-HCl，I 5% 曲拉通-Χ-100，ρΗ9· 0，或者组成为 20 100 mM Tris-HCl，I 5% 吐温-20，pH9. O ；C、第二次洗涤配制洗涤缓冲液II，按5 15 :1 (V/W)加入步骤b处理后的包涵体浓缩液，搅拌使成悬浮液，将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5 15 bar，透过通量为10 30 LMH,包涵体悬液被浓缩3 5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液II的组成...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵志全，熊继元，柳常青，
申请(专利权)人：鲁南新时代生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：