一种发酵液中提取硫酸软骨素的方法技术

本发明专利技术阐述了一种发酵液中提取硫酸软骨素的方法，即以研究室保藏产硫酸软骨素菌株为生产菌株，在7L罐中发酵后收集发酵液，将发酵液进行预处理，然后用乙醇沉淀和氯仿萃取去除发酵液中的蛋白质等杂质，再利用超滤离心管反复三次离心除去发酵液中的小分子物质，最后将浓缩液真空冷冻干燥48h得到硫酸软骨素纯品。本发明专利技术经过浓缩后大大节约了使用乙醇的量，氯仿可以回收利用，同时使用超滤离心管对于小量制备硫酸软骨素纯品更加快捷、方便。

【技术实现步骤摘要】

一种发酵液中提取硫酸软骨素的方法，属于生物工程领域，特别是从发酵液中而非动物中提取硫酸软骨素。
技术介绍
硫酸软骨素(chondroitin sulfate，CS)是一种酸性的黏多糖，其二糖单体由葡糖醛酸(D-GlcUA)与N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)以β-1，3键相连，糖链生成后由磺基转移酶在GalNAc的碳4位或碳6位进行硫酸化，如图1。根据其化学组成和结构差异可分为A、B、C、D、E、F、H等多种，通常从哺乳动物组织中提取得到的硫酸软骨素以CS-A、CS-C为主。CS是一类重要的生物高分子，具有广泛的生物活性，其作为安全有效的保健食品和药品在世界各国得到了广泛应用。硫酸软骨素具有以下生物活性：镇痛抗炎作用；促进成骨细胞增生，诱导新骨形成；抗肿瘤作用；抗粘连作用；免疫调节作用；调血脂、抗动脉粥样硬化作用；抗氧化、清除自由基和廷缓衰老的作用。CS还具有抗炎、抗病毒、抗过敏和加速伤口愈合的作用，如抗HIV活性。在欧、美、日等发达国家，硫酸软骨素作为保健品长期应用于防治冠心病、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种发酵液中提取硫酸软骨素的方法，其特征在于提取方法包括如下步骤：1)取0.1mL筛选的枯草芽孢杆菌(Bacillus？subtillis？BN)接种于种子培养基中，培养12h后按照10％接种量接种于7L发酵罐中进行分批发酵，发酵周期为24h。种子培养基：葡萄糖1.5％，大豆蛋白胨0.8％，酵母粉0.8％，K2HPO4·3H2O？0.04％，KH2PO40.04％。发酵培养基：葡萄糖2％，酵母粉5％，(NH4)2SO40.2％，K2HPO40.15％，KH2PO4·3H2O？0.15％，MgSO4·7H2O？0.04％，MnCl2·4H2O？0.02％。2)取发酵液在旋转蒸发仪中进行浓缩，用三...

【技术特征摘要】
1.一种发酵液中提取硫酸软骨素的方法，其特征在于提取方法包括如下步骤：
1)取0.1mL筛选的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis BN)接种于种子培养基中，培养12h
后按照10％接种量接种于7L发酵罐中进行分批发酵，发酵周期为24h。
种子培养基：
葡萄糖1.5％，大豆蛋白胨0.8％，酵母粉0.8％，K2HPO4·3H2O 0.04％，KH2PO40.04％。
发酵培养基：
葡萄糖2％，酵母粉5％，(NH4)2SO40.2％，K2HPO40.15％，KH2PO4·3H2O 0.15％，MgSO4·7
H2O 0.04％，MnCl2·4H2O 0.02％。
2)取发酵液在旋转蒸发仪中进行浓缩，用三氯乙酸调pH至4.5，常温下静置1h，再用
5mol/L的NaOH调pH至6.0，8000rpm离心15min除去菌体；
3)取上清液，加入上清体积2-3倍的乙醇，机械搅拌1h后低温静置24h。倾去部分上清，
残余液在4000rpm下离心20min，收集沉淀，加入0.3mol/L的NaCl将沉淀充分溶解，加入
0.7-1倍体...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘立明，刘佳，吴秋林，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：