一种获得巴戟天体细胞再生植株的方法及其培养基技术

本发明专利技术公开了一种获得巴戟天体细胞再生植株的方法及其培养基。所述培养基为成套培养基，包括诱导培养基、增殖培养基和/或生根培养基；所述诱导培养基为在MS基本培养基中添加细胞分类素(6-BA或KT)0.1mg/L和生长素（2,4-D或NAA）0.1mg/L；所述增殖培养基为在MS基本培养基中添加细胞分类素(6-BA)1.0—2.0mg/L和生长素（2,4-D或NAA）0.5mg/L；所述生根培养基为在1/2—1/8MS基本培养基中添加NAA?0.01—0.1mg/L。本发明专利技术的优点如下：诱发巴戟天不定芽的时间短，从接种带节茎段至获得1-3cm长的不定芽只需15天；增殖频率高，繁殖系数为（46—56）/50天；生长周期短、且苗齐苗壮、生长良好。本发明专利技术为巴戟天组培快繁提供了一种高效的方法和途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种获得巴戟天体细胞再生植株的方法及其培养基。
技术介绍
巴戟天(Morinda off icinalis How.)是菌草科多年生木质藤本植物，肉质根入药，根皮含蒽醌化合物，环烯醚萜甙、植物留醇及多糖、低聚糖等药用成分。具有补肾壮阳、强筋骨、祛风湿等功效，用途十分广泛，是目前我国出口创汇和内需的主要中药品之一，力口上近年来巴戟天的市场需求量大，以至巴戟天的栽培规模不断扩大，由于巴戟天种植是剪取自身藤条作为种苗，对于大规模种植时所需种苗产生了瓶颈制约，本技术是利用植物细胞的全能性进行苗木培育植物体的每一个细胞都携带着一套完整的基因组，并具有发育为完整植株的潜能，因为每个细胞都是来自于受精卵，所以有与受精卵具有相同的遗传物质。基于植物此特点，有必要对巴戟天进行组培快繁研究，为种植户提供优质、大量巴戟天种苗，切实解决巴戟天苗木需求的瓶颈，提高巴戟天种植产量。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种用于获得巴戟天(Morinda officinalis How.)体细胞再生植株的成套培养基，它含有独立包装的培养基A (即诱导培养基)，所述培养基A为由MS基本培养基、细胞分裂素、生长素、蔗糖或葡萄糖、和凝固剂制成的固体培养基；所述培养基A中的所述细胞分裂素的含量为O. lmg/L ；所述培养基A中的所述生长素的含量为0. lmg/L ο在上述成套培养基中，所述培养基A中的所述细胞分裂素为6-BA或KT ；和/或，所述培养基A中的所述生长素为2，4-D或NAA ；和/或，所述培养基A中的所述蔗糖或葡萄糖的含量为20g/L ；和/或，所述培养基A中的所述凝固剂为琼脂，所述琼脂在所述培养基A中的含量为 7 — 8g/L。在上述成套培养基中，还可含有独立包装的培养基B (即增殖培养基)，所述培养基B为由MS基本培养基、细胞分裂素、生长素、蔗糖和凝固剂制成的固体培养基；所述培养基B中的所述细胞分裂素的含量为I. 0—2. 0mg/L ；所述培养基B中的所述生长素的含量为0. 5mg/L。在上述成套培养基中，所述培养基B中的所述细胞分裂素为6-BA ；和/或，所述培养基B中的所述生长素为2，4-D或NAA ；和/或，所述培养基B中的所述蔗糖的含量为20g/L ；和/或，所述培养基B中的所述凝固剂为琼脂，所述琼脂在所述培养基B中的含量为 7 — 8g/L。在上述成套培养基中，还可含有独立包装的培养基C (即生根培养基)，所述培养基C为由1/2 —1/8的MS基本培养基、NAA和凝固剂制成的固体培养基；所述培养基C中的所述NAA的含量为O. 01—0. lmg/L,如O. 01mg/L、0. 05mg/L或O.lmg/L ；所述培养基C中的所述凝固剂具体为琼脂，所述琼脂在所述培养基C中的含量为4—6g/L。本专利技术的另一个目的是提供一种获得巴戟天(Morinda officinalis How.)体细胞再生植株的方法，所述方法包括将所述巴戟天的带节茎段用所述培养基A进行诱导培养 获得巴戟天不定芽的步骤。所述方法还可包括将所述巴戟天不定芽用所述培养基B进行扩繁培养以获得更多不定芽的步骤。所述方法还可包括将所述巴戟天不定芽用所述培养基C进行生根培养的步骤。在上述方法中，所述将所述巴戟天的带节茎段用所述培养基A进行诱导培养前，包括将所述巴戟天的带节茎段按照包括如下步骤I) -2)的方法进行消毒的步骤I)用体积百分含量为75%的乙醇溶液浸泡30秒；2)用有效氯质量百分含量为10%的次氯酸钠溶液浸泡20分钟。在上述方法中，所述诱导培养的光照条件为先黑暗培养7天再按照如下光照条件培养每天24小时中光照12小时，光照的强度为1000—30001UX，其余时间为黑暗；所述诱导培养的温度为26°C—28°C ；和/或，所述扩繁培养的光照条件为先在每天24小时中光照12小时、光照强度为20001UX、其余时间为黑暗的条件下培养7天，再移至每天24小时中光照12小时，光照强度为1000— 1500LUX，其余时间为黑暗的条件下培养；所述扩繁培养的温度为26°C—28°C ；和/或，所述生根培养的光照条件为先在每天24小时中光照12小时，光照强度为1000— 1500LUX，其余时间为黑暗的条件下培养，再移至1000-20001UX条件下培养；所述生根培养的温度为22°C。所述MS基本培养基的溶剂为水，溶质及其浓度如表I所示。使用本专利技术所提供的培养基和培养方法进行巴戟天体细胞再生植株培养的优点如下诱发巴戟天不定芽的时间短，从接种带节茎段至获得l-3cm长的不定芽只需15天，而现有技术一般为20-30天；增殖频率高，繁殖系数为(46-56)/50天，现有技术一般为6/50天；生长周期短、且苗齐苗壮、生长良好。本专利技术为巴戟天组培快繁提供了一种高效的方法和途径。附图说明图I为巴戟天经诱导培养获得的带不定芽的茎段。图2为巴戟天不定芽经扩繁培养获得的丛生芽。图3为巴戟天的生根培养。图4为包括根茎叶的巴戟天再生植株。图5为经组织培养获得的巴戟天再生植株移栽后的杯苗。具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中所用的MS基本培养基的溶剂为水，溶质及其浓度如表I所示。表I. MS基本培养基 大量元素j培养基中浓度(g· L/1) NH4NO31.65KNO^~L9 KH2PO4O. 17 MgSO4 · 7H20O. 37 CaCl2 · 2H200. 44 微量元素培养基中浓度(m g · L'1) FeSO4 · 7H2027. 8 Na2EDTA37. 3 MnSO4 · 4H2022. 3 ZnSO4 · 4Η20δΓθ H3BO36.2 Κ 0.83 Na2MoO4 · 2Η20O. 25 CuSO4 · 5Η20O. 025 CoCl2 · 6Η20O. 025 有机成分培养基中浓度(mg · L/1) 甘氨酸270盐酸硫胺素0Π盐酸吡哆素 烟酸VB50Γδ 肌醇100实施例I、获得巴戟天体细胞再生植株的方法I、外植体的获取选择生长优良的巴戟天(Morinda officinalis How.)枝条,采集巴戟天新梢生至30 50 cm的茎，选择晴好的天气，剪下新枝，除去叶子，留一小段叶柄，立即放入装有少量清水的塑料袋运回组培室；先用自来水冲洗15分钟，去掉老叶，剪成约3 cm 5 cm长的带节茎段。2、外植体的消毒将步骤I获得的巴戟天带节茎段在超净工作台中进行如下消毒处理用体积百分含量为75%的乙醇溶液浸泡30秒；除去液体后用无菌水洗一遍；用有效氯质量百分含量为10%的次氯酸钠溶液浸泡20分钟，除去液体用无菌水洗三至五次；用无菌吸水纸吸干巴戟天带节茎段表面水 份。3、芽的诱导培养无菌条件下，将经步骤2消毒处理过的带节茎段的两端伤口剪去，获得I一2cm长的带节茎段，插入诱导培养基中进行不定芽诱导培养；培养的光照条件为先黑暗培养I周再按照如下光照条件培养:每天24小时中光照12小时，光照的强度为1000— 3000LUX，其余时间为黑暗；培养温度为26°C—28°C ;空气湿度在70%以下。经上本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于获得巴戟天（Morinda？officinalis？How.）体细胞再生植株的成套培养基，其特征在于：所述成套培养基中含有独立包装的培养基A，所述培养基A为由MS基本培养基、细胞分裂素、生长素、蔗糖或葡萄糖、和凝固剂制成的固体培养基；所述培养基A中的所述细胞分裂素的含量为0.1mg/L；所述培养基A中的所述生长素的含量为0.1mg/L。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：秦垂新，罗江清，姚松君，郭爱玲，郑志娟，梁展，陈伟文，孙君社，郑志安，张秀清，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，高要市董福行农副产品种植管理有限公司，
类型：发明
国别省市：