本发明专利技术提供了用于肝纤维化/肝硬化及肝癌早期诊断的基于微小RNA的方法和组合物。本发明专利技术还提供了微小RNA和/或所述微小RNA的检测引物在制备肝纤维化/肝硬化及肝癌诊断用组合物中的应用。本发明专利技术首次揭示并证明了血清miRNA-101-5p水平可以作为一个潜在的无创的早期诊断乙肝/肝硬化相关性肝癌的指标，同时也可以作为一个与肝纤维化/肝硬化诊断相关的指标。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，更具体地，本专利技术涉及用于肝纤维化/肝硬化及肝癌早期诊断的基于微小RNA的方法和组合物。
技术介绍
肝纤维化是肝细胞损伤后的一种修复机制，一旦发展成弥漫性伴结节性增生，使正常肝组织结构紊乱，就形成了肝硬化。肝硬化是肝癌的主要风险因素。目前，用于肝纤维化/肝硬化的诊断手段包括肝组织病理检查、临床评估、血清生化指标、影像学检查、瞬时弹性波扫描(Fitooscan)、蛋白质组学和糖组学技术。但是，这些手段要么灵敏度、特异度较低，要么费用昂贵，限制了其在临床上的便捷使用。肝癌是世界上第五大常见的癌症，也是死亡率排行第三的癌症。80%的肝癌常与慢性乙型肝炎病毒和/或丙型肝炎病毒感染有关。如此高的致死率是因为缺乏敏感而特异的无创性指标来进行早期诊断。由于早期肝癌症状不明显，通常在晚期才得以确诊，那时，由于大多存在癌细胞肝内或/及肝外转移，病人已经丧失了手术切除病灶的机会。目前，肝癌的诊断主要依赖于影像学上发现肝内肿物，包括超声、CT、核磁共振(MRI)等，同时结合血清中的肿瘤标志物如AFP等。但是，这两种方法的敏感性及特异性都不是十分令人满意。miRNA是一类小的非编码的RNA，它们在细胞的增殖、分化及凋亡过程中发挥了重要的作用。miRNA通过结合在靶mRNA的3’-非编码区的特异位点上来抑制翻译或使靶mRNA 降解。miRNA的失调可导致内环境的紊乱，最终导致肿瘤的发生。位于肿瘤相关的基因区域或脆性位点的miRNA基因在肿瘤中常常会扩增或缺失，这意味着miRNA在恶变过程中发挥了重要作用。miRNA可作为癌基因或抑癌基因，几乎所有的人类肿瘤中都可以发现miRNA 的失调。miRNA能以稳定的形式在人类的体液如血清、血浆中检测到，这使它有可能成为无创的检查指标。肝纤维化/肝硬化尤其肝癌的早期诊断可以使疾病获得根治性治疗。尽管目前对肝纤维化/肝硬化以及肝癌的相关诊断投入了很多研究，也取得一定进展，但是目前临床上肝纤维化/肝硬化及肝癌的血清学早期诊断仍然是瓶颈问题，需要敏感而特异的无创性血清学指标，尤其是基于miRNA的无创性指标。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种诊断受试者是否具有肝纤维化/肝硬化或肝癌的方法
本专利技术的另一目的在于提供微小RNA和/或所述微小RNA的检测引物在制备所述诊断组合物中的应用。本专利技术的又一目的在于提供用于检测肝纤维化/肝硬化或肝癌的诊断组合物。在本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种诊断受试者是否具有肝纤维化/肝硬化或处于肝纤维化/肝硬化的风险中的方法，其包括测定来自所述受试者的受试样品中的微小RNA的水平，其中相对于对照样品中的相应微小RNA的水平，受试样品中的微小RNA水平的改变表明受试者具有肝纤维化/肝硬化或处于肝纤维化/肝硬化的风险中。在一个实施方案中，本专利技术提供了微小RNA和/或所述微小RNA的特异性探针/ 检测引物在制备诊断组合物中的应用，其中所述诊断组合物用于通过测定来自所述受试者的受试样品中的上述微小RNA的水平从而诊断受试者是否具有肝纤维化/肝硬化或处于肝纤维化/肝硬化的风险中，其中相对于对照样品中的相应微小RNA的水平，受试样品中的所述微小RNA水平的改变表明受试者具有肝纤维化/肝硬化或处于肝纤维化/肝硬化的风险中。在某些优选的实施方案中，所述受试样品中的微小RNA的水平高于对照样品中的相应微小RNA的水平。在本专利技术的第二方面，本专利技术提供了一种诊断受试者是否具有肝癌或处于肝癌的风险中的方法，其包括测定来自所述受试者的受试样品中的微小RNA的水平，其中相对于对照样品中的相应微小RNA的水平，受试样品中的微小RNA水平的改变表明受试者具有肝癌或处于肝癌的风险中。在一个实施方案中，本专利技术提供了微小RNA和/或所述微小RNA的特异性探针/ 检测引物在制备诊断组合物中的应用，其中所述诊断组合物用于通过测定来自所述受试者的受试样品中的上述微小RNA的水平从而诊断受试者是否具有肝癌或处于肝癌的风险中， 其中相对于对照样品中的相应微小RNA的水平，受试样品中的所述微小RNA水平的改变表明受试者具有肝癌或处于肝癌的风险中。 在某些优选的实施方案中，所述受试样品中的微小RNA的水平低于对照样品中的相应微小RNA的水平。在某些优选的实施方案中，所述受试者是肝纤维化/肝硬化患者。在某些优选的实施方案中，所述受试者是乙肝阳性受试者，优选地，所述受试者是乙肝表面抗原(HBsAg)阳性受试者，更优选地，所述受试者是乙肝表面抗原阳性的肝炎患者，最优选地，所述受试者是乙肝表面抗原阳性的肝纤维化/肝硬化患者。在本专利技术的第三方面，本专利技术提供了一种用于检测肝纤维化/肝硬化或肝癌的诊断组合物，其中所述诊断组合物包含微小RNA的特异性探针/检测引物。在本专利技术某些优选的实施方案中，所述微小RNA为miRNA-101，优选地，所述微小 RNA 选自 miRNA-101-1、miRNA-101_2、miRNA-101-5p 和 miRNA-101_3p 中的一种或更多种， 更优选地，所述微小RNA为miRNA-101-5p。在本专利技术某些优选的实施方案中，所述受试样品来自受试者的体液，优选地，来自血液，更优选地，来自血清。在本专利技术某些优选的实施方案中，所述特异性探针/检测引物的核酸序列包含 SEQ ID NO:5。在本文中，术语“微小RNA”、“miRNA”和“miR”可交换地使用，指来自miR基因的未加工的或加工的RNA转录物。未加工的miR基因转录物也称作“miR前体”并且通常包括长度约70-100个核苷酸的RNA转录物，通过RNA酶(例如Dicer或RNAase III，如大肠杆菌的RNAase III)消化将miR前体加工成长度约18-26个核苷酸的活性RNA分子。该长度约18-26个核苷酸的活性RNA分子也称作“加工的”miR基因转录物或“成熟”miRNA。应当理解的是本文所用术语“微小RNA”、“miRNA”或“miR”包括一种或多种miR-寡核苷酸，包括成熟miR、前-miR (pre_miR)、原-miR (pri_miR)和它们的变体。在某些实施方案中,还可使用各种miR核酸的混合物。在本文中，术语“miRNA-ΙΟ ”或“miR-ΙΟ ” 指目前包括 miRNA-101-l、 miRNA-101-2、miRNA-101-5p、miRNA-101-3p 的 miRNA家族。术语“miRNA-ΙΟ ”或“miR-ΙΟ ” 也包括任何迄今未鉴定的miRNA-ΙΟ 家族的成员。用于本专利技术中的“miRNA-ΙΟ ”或 “miR-ΙΟ ”的特征如表I所示。在本专利技术某些优选的实施方案中，可使用各种miR-ΙΟ 核酸的混合物，例如 miRNA-101-l、miRNA-101-2、miRNA-101-5p 和 miRNA-101_3p 的各种组合所获得的混合物。表I.用于本专利技术中的miRNA-ΙΟ 的特征权利要求1.一种诊断受试者是否具有肝纤维化/肝硬化或处于肝纤维化/肝硬化的风险中的方法，其包括测定来自所述受试者的受试样品中的微小RNA的水平，其中相对于对照样品中的相应微小RNA的水平，受试样品中的微小RNA水平的改变表明受试者具有肝纤维化/肝硬化或处于肝纤维化/肝硬化的风险本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种诊断受试者是否具有肝纤维化/肝硬化或处于肝纤维化/肝硬化的风险中的方法，其包括测定来自所述受试者的受试样品中的微小RNA的水平，其中相对于对照样品中的相应微小RNA的水平，受试样品中的微小RNA水平的改变表明受试者具有肝纤维化/肝硬化或处于肝纤维化/肝硬化的风险中。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：闾军，谢云，郭佳，田洲，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京佑安医院，
类型：发明
国别省市：
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