本发明专利技术涉及检测雌二醇的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。发光标记物是异鲁米诺发光标记物标记的雌二醇半抗原，荧光标记物是指荧光素或其衍生物标记的雌二醇单克隆抗体，分离试剂是指包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。本发明专利技术还涉及一种采用所述的试剂盒检测动物源性食品中雌二醇的方法，本方法对雌二醇检测具备较高的灵敏度、特异性和较快的检测速度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种化学发光检测试剂盒及其测试方法，具体的涉及一种检测动物组织、饲料、尿液等样品中雌二醇的磁颗粒化学发光检测试剂盒。
技术介绍
雌二醇(Estradiol，E2)是应用广泛的甾类同化 激素，被大量用于促进反刍类动物的生长，因其可以促进动物及提高畜禽瘦肉比，在禽兽养殖业曾经应用。但由于雌二醇可在动物组织内高残留，通过食物链危害人类健康，是女性儿童提前发育，男性儿童乳腺发育呈女性化；男性生殖系统发育异常或引起病变；并导致女性乳腺癌和子宫内膜异位症发生率上升，且雌二醇存在明显的致癌性，欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。中华人民共和国国务院第226号文件，《饲料和饲料添加剂管理条例》中规定雌二醇在饲料中不得检出。目前，雌二醇的检测方法常见的有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱质谱法(GC-MS)和酶联免疫法(ELISA)等。I、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。2、气相色谱-质谱法(GC-MS)灵敏度很高，假阳性率低。该方法的主要缺点是样品需要衍生化这样复杂的前期处理。虽然经过衍生化处理的样品能在质谱中给出更多的结构信息，但是衍生化会产生多个不同的产物并导致样品的部分丢失，造成实验结果的偏差。3、酶联免疫法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在I)非均相反应检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。2)酶催化反应借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种检测雌二醇药物的磁颗粒化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行雌二醇药物的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。本专利技术的另一个目的在于提供一种雌二醇药物的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。实现上述目的，本专利技术提供一种雌二醇药物检测试剂盒，其包含的主要试剂有发光标记物、突光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe3O4或Y -Fe2O3,使得微珠具有顺磁性。所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的雌二醇半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是 ABEI、AHEI 或 ABEN。 所述的试剂盒还包括标准品,质控品和浓缩洗液。所述的荧光素标记物是FITC标记雌二醇单克隆抗体。本专利技术还提供一种利用试剂盒检测雌二醇的方法，包括下列步骤I)分别吸取20 μ 1-100 μ I标准品或样本，然后加入20 μ 1-100 μ I发光标记物，再加20 μ 1-100 μ I突光素标记物,充分混匀后,37°C温育15min ；2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150 μ 1，混匀后在37°C温育5min ；3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500 μ I冲洗复合物沉淀；4)上述清洗步骤重复2-4次；5) 4)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物I和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算雌二醇的浓度。所述的发光底物的主要成分是NaOH和Η202。本专利技术中分析测试方法所用的分析仪是包括电源电路、自动注射泵I和2、测量室、发光室、光电倍增管计数器和输出系统，同时还配置有计算机与中文界面的Windows控制软件，可进行资料录入、结果汇总、质量控制、结果储存和结果查询等功能，可完成多种分析模式的编程，定量或定性报告结果，自动生成并储存、更新功能，两点自动修正标准曲线，所采用的系统是CI-2008系统。本专利技术所述的分离试剂是包被羊抗FITC单克隆抗体，其表面基团的含量是O. 1-0. 3eqm/g，其保存于含有3_6 %牛血清白蛋白，O. 2_0. 4 %吐温-20，O. 2 %叠氮化钠，PH7. 0-7. 4的磷酸盐缓冲液中。所述的FITC是异硫氰酸荧光素。所述百分含量为质量百分含量。所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物ABEI、AHEI或ABEN标记的雌二醇半抗原，其保存于含PH7. 2-7. 6，O. 1-0. 3%吐温-20，O. I %叠氮化钠的磷酸盐缓冲液中。所述百分含量是质量百分含量。所述的荧光素标记物是FITC标记的雌二醇单克隆抗体，其保存于PH7. 2-7. 6，含3-5%牛血清白蛋白，O. 2-0. 4%叠氮化钠的磷酸盐缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。雌二醇标准品溶液(Ong/ml, O. 03ng/ml, O. lng/ml, O. 3ng/ml, I. Ong/ml, 3. Ong/ml),标准品稀释液为pH7. 2,0. 3%叠氮化钠,0. lmol/L磷酸盐缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。雌二醇质控品溶液浓度分别为O. 05ng/ml，2. Ong/ml，质控品稀释液pH7. 2，O. 3%叠氮化钠，O. lmol/L磷酸盐缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。所述的浓缩洗液为pH7. 1-7. 5,0. 2-0. 4 %吐温-20，O. 2-0. 4 %叠氮化钠，O. l-0.2mol/L磷酸盐缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。本专利技术的有益效果如下I)本专利技术试剂盒的灵敏度较高，对雌二醇的检测灵敏度可达O. 03ng/ml。2)本专利技术试剂盒的检测快捷，检测时间低于20min。具体实施例方式实施例I试剂盒具体组分的制备 I)雌二醇半抗原的合成将雌二醇和溴代丁酸乙酯通过反应合成雌二醇半抗原。2)雌二醇人工抗原的制备将雌二醇半抗原与血蓝蛋白采用水溶性碳化二亚胺法进行偶联得到免疫原。3)单克隆抗体的制备动物免疫以免疫原对Balb/c小鼠进行免疫，免疫剂量为100 μ g/只，使其产生抗血清。细胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按9 I比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，得到单克隆抗体的杂交瘤细胞株。细胞冻存和复苏将杂交瘤细胞用冻存液制成IX IO9个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37°C水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。单克隆抗体的制备与纯化将Balb/c小鼠腹腔注入灭菌石蜡油O. 5ml/只，7天后腹腔注射杂交瘤细胞5X IO7个/只，7天后采集腹水。用辛酸-饱和硫本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测雌二醇的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。
【技术特征摘要】
1.一种检测雌二醇的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。2.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述的分离试剂是包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的顺磁性纳米微珠是里面包覆有Fe3O4或Y -Fe2O3,表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基团的微珠。4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的雌二醇半抗原。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述的异鲁米诺发光标记物是ABEI、AHEI 或 AffiN。6.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括标准液、质控品和浓缩洗液。7.根据权利要求1-3之一所述的试剂盒，其特征在于所述的荧光素标记物是F...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯才伟，罗晓琴，冯才茂，余厚美，刘福林，崔廷婷，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。