本发明专利技术涉及检测林可霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。发光标记物是异鲁米诺发光标记物标记的林可霉素半抗原，荧光标记物是指荧光素或其衍生物标记的林可霉素单克隆抗体，分离试剂是指包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。本发明专利技术还涉及一种采用所述的试剂盒检测动物源性食品中林可霉素的方法，本方法对林可霉素检测具备较高的灵敏度、特异性和较快的检测速度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种直接化学发光检测试剂盒及其检测方法。特别是检测动物组织、 肾脏、牛奶、鸡蛋、蜂蜜等样本中林可霉素药物残留的磁颗粒竞争直接化学发光检测试剂盒。技术背景林可霉素(Lincomycin,LIN)是由链霉菌 Stretomyces Iincolnensis 产生的一类碱性抗生素，对大多数革兰氏阳性菌以及某些厌氧的革兰氏阴性菌有效，可致转氨酶升高及黄疸，可引起过敏反应，可引起低血压或心脏骤停，可引起耳鸣、眩晕等反应。大环内酯类是一类具有14元或16元碳内酯环共同化学结构的抗菌药，主要作用域需氧革兰氏阳性菌和阴性菌、厌氧菌，以及军团菌、胎儿弯曲菌、衣原体和支原体等。大环内酯类及其代谢产物在动物的组织及器官内蓄积达到一定的浓度后，可造成前庭和耳蜗神经的损害，导致眩晕和听力减退，严重者会造成肝肾的损害。目前，常用的检测林可霉素残留量的方法有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)等方法。I、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。2、液相色谱-质谱法(LC-MS)，样品不需要衍生化处理，可对尿液、血液、肝脏、毛发和眼球样品进行检测。LC-MS/MS联用，可进一步提高信噪比，所以可用于对阳性结果的确认手段。但是，无论LC-MS还是LC-MS/MS，仪器检测法未能解决仪器造价昂贵，操作步骤繁琐，样本前处理复杂，对操作人员专业素养要求高等问题。3、酶联免疫法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在I)非均相反应检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。2)酶催化反应借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。
技术实现思路
3本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种检测林可霉素的化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行林可霉素的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。本专利技术的另一个目的在于提供一种林可霉素的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。实现上述目的，本专利技术提供一种林可霉素检测试剂盒，其包含的主要试剂有发光标记物、突光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe3O4或Y -Fe2O3,使得微珠具有顺磁性。 所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的林可霉素半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是 ABEI、AHEI 或 ABEN。所述的试剂盒还包括标准品,质控品和浓缩洗液。所述的荧光素标记物是FITC标记林可霉素单克隆抗体。本专利技术还提供一种利用试剂盒检测林可霉素的方法，包括下列步骤I)分别吸取20 μ 1-100 μ I标准品或样本，然后加入20 μ 1-100 μ I发光标记物，再加20 μ 1-100 μ I突光素标记物,充分混匀后,37°C温育15min ；2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150 μ 1，混匀后在37°C温育5min ；3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500 μ I冲洗复合物沉淀；4)上述清洗步骤重复2-4次；5)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物I和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算林可霉素的浓度。所述的发光底物的主要成分是NaOH和Η202。本专利技术中分析测试方法所用的分析仪是包括电源电路、自动注射泵I和2、测量室、发光室、光电倍增管计数器和输出系统，同时还配置有计算机与中文界面的Windows控制软件，可进行资料录入、结果汇总、质量控制、结果储存和结果查询等功能，可完成多种分析模式的编程，定量或定性报告结果，自动生成并储存、更新功能，两点自动修正标准曲线，所采用的系统是CI-2008系统。本专利技术所述的分离试剂是包被羊抗FITC单克隆抗体，其表面基团的含量是O. l-o. 3eqm/g，其保存于含有 1-3% BSA,O. 01-0. 1% Tween-20,0. 02% NaN3, pH7. 2-7. 6 的tris缓冲液中。所述的FITC是异硫氰酸荧光素。所述百分含量为质量百分含量。所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物ABEI、AHEI或ABEN标记的林可霉素半抗原，其保存于含pH7. 2-7. 6,0. 1-0. 3% Tween-20,0. 01% NaN3的tris缓冲液中。所述百分含量是质量百分含量。所述的荧光素标记物是FITC标记的林可霉素单克隆抗体，其保存于PH7. 2，含4-7%BSA,O. 03% NaN3的tris缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。林可霉素标准品溶液(Ong/ml,O. 025ng/ml, O. 075ng/ml, O. 225ng/ml, O. 675ng/CN 102928409 A书明说3/7页ml, 2. Ong/ml)，标准品稀释液为ρΗ7· 2,0. 02% NaN3,0. 05mol/L tris缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。林可霉素质控品溶液浓度分别为O. 05ng/ml, I. 5ng/ml,质控品稀释液ρΗ7· 2, O. 02% NaN3,0. 05mol/L tris缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。所述的浓缩洗液为ρΗ7· 4,0. 2% Tween-20,0. 02% NaN3,0. 05mol/L tris 缓冲液。 所述百分含量为质量百分含量。本专利技术的有益效果如下1)本专利技术试剂盒可特异性检测林可霉素药物，对其他药物无交叉反应。2)本专利技术试剂盒的灵敏度较高，对林可霉素的检测灵敏度可达O. Olng/ml。3)本专利技术试剂盒的检测快捷，检测时间低于20min。具体实施方式实施例一试剂盒具体组分的制备I)林可霉素半抗原的合成将林可霉素通过琥珀酸酐法合成具有羧基的林可霉素半抗原。2)林可霉素人工抗原的制备将林可霉素半抗原与牛血清白蛋白(BSA)采用混合酸酐法进行偶联得到免疫原。3)单克隆抗体的制备动物免疫以免疫原对Balb/c小鼠进行免疫，免疫剂量为100 μ g/只，使其产生抗血清。细胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按9 I比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，得到单克隆抗体的杂交瘤细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测林可霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。
【技术特征摘要】
1.一种检测林可霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。2.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述的分离试剂是包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的顺磁性纳米微珠是里面包覆有 Fe3O4或Y -Fe2O3,表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基团的微珠。4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的林可霉素半抗原。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述的异鲁米诺发光标记物是ABEI、 AHEI 或 AffiN。6.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括标准液、 质控品和浓缩洗液。7.根据权利要求1-3之一所述的试剂盒，其特征在于所述的荧...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯才伟，冯静，罗晓琴，岳欣荣，聂雯莹，张荃，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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