本发明专利技术涉及检测红霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。发光标记物是异鲁米诺发光标记物标记的红霉素半抗原，荧光标记物是指荧光素或其衍生物标记的红霉素单克隆抗体，分离试剂是指包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。本发明专利技术还涉及一种采用所述的试剂盒检测动物源性食品中红霉素的方法，本方法对红霉素检测具备较高的灵敏度、特异性和较快的检测速度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种直接化学发光检测试剂盒及其检测方法。特别是检测动物组织、蜂蜜、牛奶等样本中红霉素药物残留的磁颗粒竞争直接化学发光检测试剂盒。
技术介绍
红霉素类化合物属大环内酯类抗生素，主要用于抗畜禽细菌及支原体感染，亦可作猪的饲料添加剂仪促进增重和提高饲料转换率。但是红霉素类化合物能对机体产生一些副作用，如胃肠道反应、胆汁郁积性黄疸以及静滴时引起静脉炎等，还能引起坏死性肝病、精神障碍和关节炎综合症等；因此，红霉素类化合物在畜禽生产上的大量应用会导致其在畜禽产品中残留，危害公众健康。目前农业部第235号文件已规定，该药物的最高残留限量为200已规定，该。 目前，常用的红霉素的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱-质谱法(LC-MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)等方法。I、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点，检测克伦特罗残留的最低检测限为I 15Ug/Kg。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。2、气相色谱-质谱法(GC-MS)灵敏度很高，假阳性率低。该方法的主要缺点是样品需要衍生化这样复杂的前期处理。虽然经过衍生化处理的样品能在质谱中给出更多的结构信息，但是衍生化会产生多个不同的产物并导致样品的部分丢失，造成实验结果的偏差。3、液相色谱-质谱法(LC-MS)，样品不需要衍生化处理，可对尿液、血液、肝脏、毛发和眼球样品进行检测。LC-MS/MS联用，可进一步提高信噪比，所以可用于对阳性结果的确认手段。但是，无论LC-MS还是LC-MS/MS，仪器检测法与GC-MS —样，并未能解决仪器造价昂贵，操作步骤繁琐，样本前处理复杂，对操作人员专业素养要求高等问题。4、酶联免疫法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在I)非均相反应检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。2)酶催化反应借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种红霉素类药物的化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行红霉素类药物的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。本专利技术的另一个目的在于提供一种红霉素类药物的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。实现上述目的，本专利技术提供一种红霉素类药物检测试剂盒，其包含的主要试剂有发光标记物、突光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe3O4或Y -Fe2O3,使得微珠具有顺磁性。 所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的红霉素类药物半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。所述的荧光素标记物是FITC标记红霉素类药物单克隆抗体。本专利技术还提供一种利用试剂盒检测红霉素类药物的方法，包括下列步骤I)分别吸取20 μ 1-100 μ I标准品或样本，然后加入20 μ 1-100 μ I发光标记物，再加20 μ 1-100 μ I突光素标记物,充分混匀后,37°C温育15min ；2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150 μ 1，混匀后在37°C温育5min ；3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500 μ I冲洗复合物沉淀；4)上述清洗步骤重复2-4次；5)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物I和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算红霉素类药物的浓度。所述的发光底物的主要成分是NaOH和Η202。本专利技术中分析测试方法所用的分析仪是包括电源电路、自动注射泵I和2、测量室、发光室、光电倍增管计数器和输出系统，同时还配置有计算机与中文界面的Windows控制软件，可进行资料录入、结果汇总、质量控制、结果储存和结果查询等功能，可完成多种分析模式的编程，定量或定性报告结果，自动生成并储存、更新功能，两点自动修正标准曲线，所采用的系统是CI-2008系统。本专利技术所述的分离试剂是包被羊抗FITC单克隆抗体，其表面基团的含量是O. 1-0. 3eqm/g，其保存于含有 5%卵清蛋白，O. 1-0. 3% Tween-20,0. 02% NaN3, pH7. 2-7. 6，O. lmol/L的PBS缓冲液中。所述的FITC是异硫氰酸荧光素。所述百分含量为质量百分含量。所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物ABEI、AHEI或ABEN标记的红霉素类药物半抗原，其保存于含 pH7. 2-7. 4,0. 2% Tween-20,0. 01% NaN3,0. 2mol/L 的 PBS 缓冲液中。所述百分含量是质量百分含量。所述的荧光素标记物是FITC标记的红霉素类药物单克隆抗体，其保存于pH7. 2-7. 6，含3-5%酪蛋白，0. 03% NaN3,0. lmol/L的PBS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。红霉素标准品溶液(0ng/ml,0.01ng/ml,O. 03ng/ml,O. 09ng/ml,O. 27ng/ml,0. 81ng/ml)，标准品稀释液为ρΗ7· 2,0. 02% NaN3,0. 05mol/L TRIS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。红霉素质控品溶液浓度分别为O. 02ng/ml，O. 5ng/ml，质控品稀释液pH7. 2，O. 02% NaN3,0. 05mol/L TRIS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。所述的浓缩洗液为ρΗ7· 2,0. 2-0. 4% Tween-20,0. 04-0. 06 % NaN3,0. lmol/LPBS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。 本专利技术的有益效果如下I)本专利技术试剂盒可特异性检测红霉素类药物。2)本专利技术试剂盒的灵敏度较高，对红霉素类药物的检测灵敏度可达O. 01ng/ml。3)本专利技术试剂盒的检测快捷，检测时间低于20min。具体实施例方式实施例一试剂盒具体组分的制备I)红霉素类药物半抗原合成将红霉素与盐酸羟胺反应制备红霉素衍生物，衍生物再用琥珀酸酐法合成具有-COOH的红霉素类药物半抗原。2)红霉素素类药物人工抗原的制备将红霉素类药物与牛血清白蛋白(BSA)采用混合酸酐本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测红霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。
【技术特征摘要】
1.一种检测红霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。2.根据权利要求I所述的试 剂盒，其特征在于所述的分离试剂是包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的顺磁性纳米微珠是里面包覆有Fe3O4或Y -Fe2O3,表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基团的微珠。4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的红霉素半抗原。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述的异鲁米诺发光标记物是ABEI、AHEI 或 AffiN。6.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括标准液、质控品和浓缩洗液。7.根据权利要求1-3之一所述的试剂盒，其特征在于所述的荧光素标记物是F...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯才伟，陈兰珍，张禹，罗晓琴，何勇，杨昌松，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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