本发明专利技术涉及检测链霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。发光标记物是异鲁米诺发光标记物标记的链霉素半抗原，荧光标记物是指荧光素或其衍生物标记的链霉素单克隆抗体，分离试剂是指包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。本发明专利技术还涉及一种采用所述的试剂盒检测动物源性食品中链霉素的方法，本方法对链霉素检测具备较高的灵敏度、特异性和较快的检测速度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种化学发光检测试剂盒及其应用法，特别是检测动物性食品和饲料生产中链霉素残留量的磁颗粒化学发光检测试剂盒。
技术介绍
链霉素(Sti^ptomycin)是氨基糖苷类抗生素的一种，对格兰是阴性菌和部分革兰氏阳性菌特别是结核分歧杆菌具有显著的抗菌活性。链霉素主要作用域细胞的核糖体，通过抑制细菌蛋白质的生物合成而呈现杀菌的作用。正是由于其独特的抗菌活性，所以自1943年首次在灰色链球菌属中发现链霉素以来，他被广泛用于多种疾病的治疗和动物饲料添加剂，并在人、畜传染病的防治方面发挥了巨大作用。同时，链霉素对人又有一定、有时甚至是严重的毒副作用。链霉素引起的主要毒副作用是耳毒性。因其能选择性的损害第八对脑神经，导致前庭功能损害和耳蜗神经损害。严重时可造成永久性的耳聋。链霉素对鸡、羊、牛、猪的各类炎症有很好的疗效，所以现在经常被添加到动物的饲料中，用于动物疾病的预防和治疗。但凡使用过链霉素的动物，在一定时期内其产品都有残留，所以在动物食品中残留会对人类健康造成威胁和影响。我国对食品中链霉素残留的测定方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、微生物法和酶联免疫吸附法(ELISA)等。I、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点，HPLC法虽然是一种较理想的药物残留分析方法，但链霉素分子中没有紫外发光团和荧光团，在化学分析中需要见他转变成具有紫外发光团或荧光团的衍生物才能进行分析，这给检测工作带来了极大困难。而且HPLC法使用的仪器价格昂贵，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。2、微生物法是我国近年来才开始的研究，该方法的可靠检测限可达O. lug/ml，低于国家规定残留量的最高限量。该方法灵敏度高。操作简便、检测结果准确，但其涉及到微生物培养，还需培训专门技术人才和建立专用实验室，技术含量仍然很高，一般检测单位很难做到。3、酶联免疫吸附法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在I)非均相反应检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。2)酶催化反应借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种检测链霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行链霉素残留的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。本专利技术的另一个目的在于提供一种链霉素残留的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。实现上述目的，本专利技术提供一种链霉素检测试剂盒，其包含的主要试剂有发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。 所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe3O4或Y -Fe2O3,使得微珠具有顺磁性。所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的链霉素半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是 ABEI、AHEI 或 ABEN。所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。所述的荧光素标记物是FITC标记链霉素单克隆抗体。本专利技术还提供一种利用试剂盒检测链霉素的方法，包括下列步骤I)分别吸取20 μ 1-100 μ I标准品或样本，然后加入20 μ 1-100 μ I发光标记物，再加20 μ 1-100 μ I突光素标记物,充分混匀后,37°C温育15min ；2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150 μ 1，混匀后在37°C温育5min ；3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500 μ I冲洗复合物沉淀；4)上述清洗步骤重复2-4次；5) 4)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物I和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算链霉素的浓度。所述的发光底物的主要成分是NaOH和Η202。本专利技术中分析测试方法所用的分析仪是包括电源电路、自动注射泵I和2、测量室、发光室、光电倍增管计数器和输出系统，同时还配置有计算机与中文界面的Windows控制软件，可进行资料录入、结果汇总、质量控制、结果储存和结果查询等功能，可完成多种分析模式的编程，定量或定性报告结果，自动生成并储存、更新功能，两点自动修正标准曲线，所采用的系统是CI-2008系统。本专利技术所述的分离试剂是包被羊抗FITC单克隆抗体，其表面基团的含量是O. 1-0. 369111/^，其保存于含有3%卵清蛋白，0. 2% Tween-20,0. 2% NaN3, pH7. 6 的 tris 缓冲液中。所述的FITC是异硫氰酸荧光素。所述百分含量为质量百分含量。所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物ABEI、AHEI或ABEN标记的链霉素半抗原标记其保存于含PH7. 2,0. 4% Tween-20,0. 3% NaN3的tiis缓冲液中。所述百分含量是质量百分含量。所述的荧光素标记物是FITC标记的链霉素单克隆抗体，其保存于PH7. 2，含6%牛血清白蛋白，O. 4% NaN3的tris缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。链霉素标准品溶液(0ng/ml,0.01ng/ml,0. 03ng/ml,0. lng/ml,O. 5ng/ml, I. Ong/ml)，标准品稀释液为pH7. 4,0.3% NaN3,0. 05mol/L tris缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。链霉素质控品溶液浓度分别为O. 02ng/ml,0. 8ng/ml，质控品稀释液ρΗ7· 4,0. 3%NaN3,0. 05mol/L tris缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。所述的浓缩洗液为PH7. 6,0. 3% Tween-20,0. 3% NaN3,0. 2mol/L PBS 缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。 本专利技术的有益效果如下I)本专利技术试剂盒可特异性检测链霉素，对其他药物无交叉。2)本专利技术试剂盒的灵敏度较高，对链霉素的检测灵敏度可达O. O lng/ml ο3)本专利技术试剂盒的检测快捷，检测时间低于20min。具体实施例方式实施例一试剂盒具体组分的制备I)链霉素半抗原的合成将双氢链霉素用琥珀酸酐法改造其分子结构中的胍基为羧基，制备链霉素类药物半抗原。2)免疫原的制备将链霉素半抗原与甲状腺蛋白采用活化酯法(NHS-DCC^i)进行偶联得到免疫原。3)单克隆抗体的制备动物免疫以免疫原对Balb/c小鼠进行免疫，免疫剂量为100 μ g/只，使其产生本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测链霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。
【技术特征摘要】
1.一种检测链霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。2.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述的分离试剂是包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的顺磁性纳米微珠是里面包覆有Fe3O4或Y -Fe2O3,表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基团的微珠。4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的链霉素半抗原。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述的异鲁米诺发光标记物是ABEI、AHEI 或 AffiN。6.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括标准液、质控品和浓缩洗液。7.根据权利要求1-3之一所述的试剂盒，其特征在于所述的荧光素标记...
【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，冯才伟，余厚美，王鑫，陈炜玲，崔廷婷，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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