检测残留苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了检测残留苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒及其使用方法，属于酶联免疫吸附分析方法技术领域。所述试剂盒包括：包被苯乙醇胺A抗原的酶标板、苯乙醇胺A标准品工作液、苯乙醇胺A抗体工作液、苯乙醇胺A酶标二抗工作液、底物液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩样品稀释液。本发明专利技术的试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)方法，标准品或待测样本残留的苯乙醇胺A和酶标板上预包被的抗原共同竞争苯乙醇胺A抗体。该方法可以用于直接检测动物源性食品、尿样、动物组织和血清样品中的苯乙醇胺A，具有方便、快速、灵敏等特点，适用于大批量样品检测，本试剂盒灵敏度0.1ng/mL。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术公开了一种检测动物组织及其代谢物中苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒及其检测方法，属于酶联免疫吸附分析方法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA )
本专利技术涉及用于检测动物源食品、血液及尿液中残留的苯乙醇胺A的含量的酶联免疫试剂盒及使用该试剂盒的检测方法。
技术介绍
苯乙醇胺A(Phenylethylamine, PEA)又称为克伦巴胺,学名为2_[4_ (4_硝基苯基)丁基-2-基氨基]-I-甲氧基苯乙醇，是一种人工合成的化学物质。化学结构式如下

【技术保护点】
一种检测残留苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括酶标板96孔、苯乙醇胺A标准品工作液、苯乙醇胺A抗体工作液、苯乙醇胺A酶标二抗工作液、底物液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩样品稀释液；？？？？其中，所述酶标板是包被苯乙醇胺A抗原的酶标板，苯乙醇胺A抗原是用0.05？mol/L？？pH？9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释成1:8000比例，100微L/孔，37℃，2h，取出4℃放置过夜；取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液300微L/孔，洗板3次，1min/次；然后加入0.5%？BSA封闭，150微L/孔，37℃放置2h；取出酶标板甩掉板内液体，用洁净的毛巾包裹后拍干板内残留液体；将拍干后的酶...

【技术特征摘要】
1.一种检测残留苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括酶标板96孔、苯乙醇胺A标准品工作液、苯乙醇胺A抗体工作液、苯乙醇胺A酶标二抗工作液、底物液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩样品稀释液； 其中，所述酶标板是包被苯乙醇胺A抗原的酶标板，苯乙醇胺A抗原是用0.05 mo I/LpH 9. 6的碳酸盐包被缓冲液稀释成1:8000比例，100微 L/孔，37°C，2h，取出4°C放置过夜；取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液300微 L/孔，洗板3次，Imin/次；然后加入O. 5% BSA封闭，150微 L/孔，37°C放置2h;取出酶标板甩掉板内液体，用洁净的毛巾包裹后拍干板内残留液体；将拍干后的酶标板整齐地摆放置GMP车间恒温25°C晾干；抽检要求板内孔与孔之间，板间的OD值变异系数均小于10% ;检验合格后将酶标板密封后置4°C下保存； 其中，所述苯乙醇胺A标准品的浓度分别为O ng/mL、0. I ng/mL、0. 3 ng/mL、0. 9 ng/mL、2. 7 ng/mL、8. I ng/mL ； 其中，所述苯乙醇胺A抗体工作液是用抗体稀释液稀释成1:10000比例； 所述苯乙醇胺A酶标二抗工作液是用酶标二抗稀释液稀释成1:2000比例； 所述底物液包含O. 05 mo I/L的NaHPO4 · 12Η20、0· 025 mo I/L的一水柠檬酸(C6H8O7 ·Η20)、0· 2 mmol/L的3, 3, 5, 5-四甲基联苯胺_、0· 5 mmol/L的过氧化氢脲和5%的N, N-二甲基甲酰胺； 所述终止液是2 mol/L的硫酸(H2SO4)； 所述浓缩洗涤液是20倍浓缩洗涤液，其包含0. 05%吐温-20，0. 01 mol/L的PBST，pH值范围7. 0-7. 5之间； 所述浓缩样品稀释液是2倍浓缩稀释液，其成分为0. 01 mol/L, pH7. 4磷酸盐PBS缓冲液。2.权利要求I所述检测残留苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒的使用方法，其特征在于该方法包括以下步骤 (1)预处理待测样品，即将待测试的样品处理为液体样品，或者用有机溶剂提取待测样品，氮气吹干并将其复溶于样品稀释液工作液中； (2)将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温20 25°C平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀； (3)取包被苯乙醇胺A抗原的酶标板，加标准品/样本50mL/孔到对应的微孔中； (4)加入苯乙醇胺A抗体工作液，50mL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜道林，洪霞，张祯，薛永来，
申请(专利权)人：江苏维赛科技生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：