基于能量共振转移的荧光试纸条及制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种基于能量共振转移的荧光试纸条及制备方法与应用。该荧光试纸条包含底衬、样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫依次紧密相连、且附着在底衬上；其中，结合垫上附着荧光受体标记的抗体；层析膜上设置检测线和校准线，检测线靠近结合垫，校准线靠近吸水垫；检测线上附着有荧光物质标记的抗原，校准线上附着有荧光物质标记的蛋白；荧光物质标记的抗原与荧光受体标记的抗体能通过抗原抗体反应特异性结合，荧光物质标记的蛋白与荧光受体标记的抗体不反应。该荧光试纸条具有操作安全、简便、灵敏、低成本以及快速等优点，应用范围广，能够用于单项检测或者一检多项等快速检测项目。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及荧光免疫层析检测领域，属于干化学检测方法的一种，特别涉及一种基于能量共振转移的荧光试纸条及制备方法与应用。
技术介绍
免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列检测抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子，小分子的实验方法。在免疫学检测中，国内外主要采用放射性免疫技术，酶联免疫吸附法，免疫电化学分析技术，胶体金免疫层析法等方法实现定量或者定性检测。但是这些方法都存在不同程度的缺点①放射性免疫和酶联免疫吸附法检测有很高的灵敏度，但是需要配套的大型仪器，对检测环境有一定的要求，检测时间较长，从而不宜在基层推广。 ②胶体金免疫层析试纸条具有成本低，快速，高效，高通量检测等特点。经过多年的研究，胶体金免疫层析试纸条在原材料的选择，胶体金颗粒的释放和跑板，检测结果的稳定性等各方面有很成熟的工艺流程。但是由于胶体金颗粒信号放大作用有限，所以胶体金免疫层析试纸条灵敏度不高，并且胶体金免疫层析试纸条很难实现定量检测。③与胶体金免疫层析试纸条相比，荧光免疫层析试纸条具有灵敏度高，可实现准确检测的目的。荧光免疫层析试纸条的示踪剂有单个荧光染料，荧光乳胶微球，镧系元素，量子点等。单个荧光染料信号放大能力有限，并且在光照条件线容易发生荧光淬灭现象，影响了试纸条的灵敏度和稳定性。镧系元素具有比较好的稳定性，但是量子产率较低，影响了试纸条的灵敏度。量子点具有激发光谱宽，发射光谱窄，斯托克斯位移大、稳定性高等特点，但是量子点也有一些不足量子点亮度中等、价格较高，这些影响了试纸条的灵敏度，增加了试纸条的研发和生产的成本，并且量子点含有重金属元素，具有一定的毒性。荧光乳胶微球具有荧光信号强，稳定性高，易于和蛋白标记等优点，是一种很好的免疫层析试纸条的示踪剂。但是荧光乳胶微球也有不足之处相比胶体金颗粒，荧光乳胶微球生产成本高，生产难度更大、和胶体金免疫层析试纸条相比，基于荧光乳胶微球的免疫层析试纸条在颗粒的释放和跑板，结果的稳定性等方面的研究不是很成熟。根据检测的对象和使用抗原抗体的不同，试纸条对荧光乳胶微球的粒径和荧光光谱有不同的要求，而除过国外一些大公司，国内的荧光乳胶微球生产公司难以提供各种荧光光谱和粒径的荧光微球。因此，仍需进一步研究，以期获得一种高灵敏度、操作简单、快速、低成并且可定量检测的方法。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种基于能量共振转移的的荧光试纸条。本专利技术的另一目的在于提供上述荧光试纸条的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述荧光试纸条的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种基于能量共振转移的的荧光试纸条，包含底衬、样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫依次紧密相连、且附着在底衬上；其中，结合垫上附着荧光受体标记的抗体；层析膜上设置检测线和校准线，检测线靠近结合垫，校准线靠近吸水垫；检测线上附着有荧光物质标记的抗原，校准线上附着有荧光物质标记的蛋白；荧光物质标记的抗原中的抗原与荧光受体标记的抗体中的抗体能通过抗原抗体反应特异性结合，荧光物质标记的蛋白中的蛋白与荧光受体标记的抗体中的抗体不反应；所述的基于能量共振转移的的荧光试纸条，还包含塑料外壳，塑料外壳包裹底衬和附着在底衬且依次紧密连接样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；其中，塑料外壳上设置有加样孔和观察孔，加样孔位于样品吸收垫的位置，观察孔位于检测线和校准线区域；塑料外壳的作用是防止基于能量共振转移的的荧光试纸条受到污染以及便携易用；所述的底衬为不透水物质，优选为聚氯乙烯(PVC)；所述的样品吸收垫的材质优选为玻璃纤维； 所述的结合垫的材质优选为聚酯膜或者玻璃纤维素膜；所述的层析膜的材质优选为硝酸纤维素膜；所述的吸水垫的材质优选为吸水纸；所述的荧光物质优选为荧光染料、荧光乳胶微球、镧系元素、量子点、发荧光的聚合物或荧光蛋白；更优选为荧光乳胶微球；所述的荧光受体优选为胶体金纳米颗粒、银纳米颗粒或碳纳米颗粒；更优选为胶体金纳米颗粒或石墨烯等可以使检测线上荧光信号淬灭的物质；所述的抗原为完全抗原，优选为完全抗原Cr-iEDTA-BSA或完全抗原CP-AM0Z-BSA ；所述的抗体优选为抗Cr-EDTA抗体或抗呋喃它酮代谢物抗体；所述的蛋白为与抗原或抗体不反应的物质，优选为牛血清白蛋白或卵清蛋白；所述的荧光受体标记的抗体优选通过如下方法制备得到将荧光受体与抗体混合，搅拌均匀；再加入牛血清白蛋白封闭即可；所述的荧光受体标记的抗体更优选通过如下方法制备得到①将荧光受体物质的pH调节为7. 8 8. 2，边搅拌边加入抗体，搅拌反应；②再加入牛血清白蛋白，搅拌反应；离心，沉淀物为荧光受体标记的抗体；步骤①中所述的抗体为抗Cr-EDTA抗体或抗呋喃它酮代谢物抗体；步骤①和步骤②中所述的搅拌反应的时间为25 35min ；所述的荧光物质标记的抗原优选通过如下方法制备得到通过N-羟基琥珀酰亚胺和碳二亚胺的作用，将抗原与荧光物质进行偶联得到；所述的荧光物质标记的抗原更优选通过如下方法制备得到( I)将荧光物质、N-羟基琥珀酰亚胺和碳二亚胺混匀后反应；离心收集沉淀物，用三蒸水分散并且混匀；(2)接着加入抗原，混匀后避光反应；(3)再加入牛血清白蛋白，混匀后反应；离心后收集沉淀物，得到荧光物质标记的抗原；其中，荧光乳胶微球、N-羟基琥珀酰亚胺、碳二亚胺、抗原和牛血清白蛋白按质量比90 100 4 6 0. 3 10 配比；步骤(I)中所述的荧光物质优选为荧光乳胶微球；步骤(I)中所述的反应的条件优选为20 30°C反应30min ；步骤(2)中所述的避光反应的条件优选为20 30°C反应120min ；步骤(2)中所述的抗原优选为完全抗原Cr-iEDTA-BSA或完全抗原CP-AM0Z-BSA ；步骤(3)中所述的反应的条件优选为20 30°C反应120min ；所述的荧光物质标记的蛋白优选通过如下方法制备得到通过N-羟基琥珀酰亚胺和碳二亚胺的作用，将牛血清白蛋白与荧光物质进行偶联得到；所述的荧光物质标记的蛋白更优选通过如下方法制备得到·( I)将荧光物质、N-羟基琥珀酰亚胺和碳二亚胺混匀后反应；离心收集沉淀物，用三蒸水分散并且混匀；(II)接着加入蛋白，混匀后反应；离心后收集沉淀物，得到荧光物质标记的蛋白；其中，荧光乳胶微球、N-羟基琥珀酰亚胺、碳二亚胺和蛋白按质量比90 100 4 6 10配比；所述的蛋白优选为牛血清白蛋白或卵清蛋白；步骤(I)中所述的荧光物质优选为荧光乳胶微球；步骤(I)中所述的反应的条件优选为20 30°C反应30min ；步骤(II)中所述的反应的条件优选为20 30°C反应120min ；所述的基于能量共振转移的的荧光试纸条的制备方法，包含以下步骤( I)将荧光受体标记的抗体分散在结合垫上；(2)将荧光物质标记的抗原呈直线型附着在层析膜上，形成检测线；将荧光物质标记的蛋白呈直线型附着在层析膜上，形成校准线；检测线和校准线为平行关系；(3)在底衬上将样品吸收垫、步骤(I)得到的结合垫、步骤(2)得到的层析膜和吸水垫依次相互搭接，其中层析膜上的检测线靠近结合垫，校准线远离结合垫，靠近吸水垫；得到基于能量共振转移的的荧光试纸条；步骤(I)优选为用喷金划膜仪将荧光受体标记的抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于能量共振转移的的荧光试纸条，包含底衬、样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫依次紧密相连、且附着在底衬上；其特征在于：结合垫上附着荧光受体标记的抗体；层析膜上设置检测线和校准线，检测线靠近结合垫，校准线靠近吸水垫；检测线上附着有荧光物质标记的抗原，校准线上附着有荧光物质标记的蛋白；荧光物质标记的抗原与荧光受体标记的抗体能通过抗原抗体反应特异性结合，荧光物质标记的蛋白与荧光受体标记的抗体不反应。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：唐勇，付强强，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：