组合式抗虫BT蛋白金标快速检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种组合式抗虫BT蛋白金标快速检测试剂盒，本试剂盒由底板、上盖组成；底板内有4～8条测试带；上盖有4～8个观测窗和4～8个加样孔。本试剂盒可一步同时检测多种不同的转基因成份，不需其它任何附加仪器设备。本试剂盒操作简便、检测结果形象、准确、快速：只要将送检物品的提取液分别滴加在试剂盒的4～8个加样孔中，5-10min后，通过肉眼就可以通过观测窗直接观察到准确的检测结果。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及组合式抗虫BT蛋白金标快速检测试剂盒。技术背景在转基因植物的研制开发或在对转基因产品进行筛选或安全性评价时，往往需要对转入的外源性基因进行定性或半定量测定。有时还需要对多种外源性基因进行同时检测。苏云金芽孢杆菌(BT)具有广泛的杀虫活性，目前已发现了 800多种杀虫晶体蛋白。随着DNA重组技术的发展，将Bt杀虫晶体蛋白基因导入其他微生物或植物中，构建可产生杀虫蛋白的工程菌株或抗虫转基因植物成为研究的主要方向(Barton，et al. 1987 ；Fischhoff et al. 1987 ；Vaeck, et al. 1987 ；Perlak, et al. 1990)。大约近 20 种 Bt 杀虫晶·体蛋白基因已转入不同植物。1987年首批转Bt cry基因的抗虫烟草和番爺问世(Barton,et al. 1987 ；Fischhoff, et al. 1987 ；Vaeck,et al. 1987)。1996 年转 Bt 基因棉花、玉米及马铃薯在美国被批准商品化种植(Peferoen 1997)，这标志着苏云金杆菌杀虫晶体蛋白的应用进入新的产业化阶段。但这些BT杀虫晶体蛋白的氨基酸序列差异很大，例如CrylAC与Cry2AB的同源性为45% ；CryIAa与Cry3A的同源性只有25-30%等等(Li et al.，1991 ；Grochulski et al. ,1995)。现有的检测装置，如酶免、放免等方法的装置，受仪器(酶标仪、放免闪烁仪、离心机等)、场地等因素的限制，而且检测时间长(酶免检测时间需20hr、放免需30min Ihr)，检测成本较高，很难推广应用。以往试纸条检测的方法虽可部分克服以上不足(如美国EnviroLogix Incorporated, Strategic Diagnostics, Inc.和北京奥创金标生物技术有限公司生产的试纸条)，但每种试纸条只能检测转基因作物中单一的外源基因，实际操作中容易产生错误结果。例如如果检测者仅有Bt CrylAc检测试纸条，而检测对象中并未转入BTcryIAc基因，而是转入Bt cry 2ab等基因,那么很可能会得出检测对象不存在外源基因的错误结果，造成不必要的损失。因此，实践中迫切需要有一种可同时检测转基因植物中的不同Bt晶体蛋白，且操作简便、结果准确可靠、快速的装置
技术实现思路
本技术的目的是建立一种操作简便、结果准确可靠、快速，可同时检测多种转Bt基因成分的组合式试剂盒。本技术的技术方案是这样的一种组合式抗虫BT蛋白金标快速检测试剂盒，包括底板、上盖，底板盖入上盖后组成试剂盒；其特征是底板上放置有测试带；上盖设置有观测窗和加样孔；所述底板的上表面设置有4 8个可嵌入一条测试带的凹槽；所述测试带数量是4 8条；所述观测窗和加样孔的数量分别是4 8个。所述底板或上盖可具有卡槽，以保证底板与上盖扣紧。所述观测窗优选是长方形。试剂盒的形状是扁平的扇面形盒。在本技术的一个实例中，可以同时检测6种转Bt基因成分，在底板内可置6条不同的测试带，且上盖设置相应数量的观测窗和加样孔。所述底板内的6条测试带，第一条用于检测BT-Cry IAc蛋白，第二条用于检测BT-CrylAh蛋白，第三条用于检测BT-Cry 2AB蛋白，第四条用于检测BT-Cry 9C蛋白，第五条用于检测BT-Cry 3A蛋白，第六条用于检测BT-Cry IAa蛋白。所述测试带是一种具有检测系统主体膜反应体系功能的检测材料，由高分子纤维膜、塑料等多层材料制成。六种蛋白的测试带均可分为质控区和检测区，质控区可包被羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG多克隆抗体；BT-Cry IAc蛋白测试带的样品检测区包被BT-Cry IAc的单克隆抗体或多克隆抗体；BT-CrylAh蛋白测试带的样品检测区包被BT-Cry IAh的单克隆抗体或多克隆抗体；BT_Cry 2AB蛋白测试带的样品检测区包被BT-Cry 2AB的单克隆抗体或多克隆抗体；BT-Cry 9C蛋白测试带的样品检测区包被BT-Cry 9C的单克隆抗体或多克隆抗体；BT-Cry 3A蛋白测试带的样品检测区包被BT-Cry 3A的单克隆抗体或多克隆抗体；BT-Cry IAa蛋白测试带的样品检测区包被BT-Cry IAa的单克隆抗体或多克隆抗体。当不同外源基因转入植物，并在植物中表达，将产生不同目的蛋白(BT-Cry IAc,BT-CrylAh, BT-Cry 2AB, BT-Cry 9C, BT-Cry 3A 和 BT-Cry IAa)，因此通过检测样品中是否含有上述六种蛋白来确定该基因是否存在。如果外源基因转入植物，发生基因沉默，无目的蛋白产生，将不能达到预期目的(杀虫等)。本技术的目的是这样实现的当底板盖入上盖后，每个观测窗和加样孔各分别对应一条测试带，通过盒盖上的加样孔和观测窗可进行加样和观察检测结果，每个观测窗可分别检查一种基因。每个观测窗分为测试区(T)和质控区(C)两部分，可在上盖上用字母C、T标示出；检测时，将送检物品的同一种提取液分别滴加在试剂盒的六个加样孔中，5-10min后，用肉眼通过上盖的观测窗可以直接观察到准确的检测结果。对于每个观测窗来说，用以下方式判断检测结果I、阴性(-)反应状况观测窗质控区(C)出现一条紫红色条带。检测结果待检样品中不含待检基因或其含量在其阈值以下。2、阳性(+)反应状况观测窗质控区(C)出现一条紫红色条带，在测试区(T)内同时出现紫红色条带。检测结果待检基因含量在阈值以上。3、无效反应状况质控区(C)未出现紫红色条带。检测结果表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。本技术所述试剂盒的优点在于经济高效一个检测盒可同时检测6种不同的转基因成份，大大降低了使用成本；简便快速6种不同的转基因成份一步法操作，同时检测，不需其他任何附加仪器设备。直接将待测样品液滴加在加样孔中，5-10min可出结果；检测结果直观不借助任何仪器，用肉眼可观察到结果；应用广泛可检测玉米、棉花、烟草、油菜、大豆、水稻等多种农作物的叶片、种子及加工产品。由于本技术提供的组合式抗虫BT蛋白金标快速检测试剂盒同时可对植物样品进行 BT-Cry IAc,BT-Cry IAh,BT-Cry 2AB、BT-Cry 9C、BT-Cry 3A 和 BT-Cry IAa 分析，检测快速、特异、敏感、方便，特别适用于转基因产品的研制开发和转基因产品的快速筛选，可用于边防、海关植物检测、食品安全检测及种子经营销售部门现场、快速筛查待测样品。以下结合附图和实施例，进一步举例说明本技术的
技术实现思路
。 附图说明图I和图2是本技术组合式抗虫BT蛋白金标快速检测试剂盒的结构示意图，其中图I是底板的俯视图，底板有六条测试带；图中，3是测试带。图2是试剂盒上盖的俯视图，上盖有6个观测窗；图中，I是加样孔，2是观测窗。具体实施方式本技术组合式抗虫BT蛋白金标快速检测试剂盒中的测试带的制备以制备BT-Cry IAh的测试带来举例说明实施例I制备测试带I. BT-Cry IAh单抗腹水的制备小鼠腹腔注射液体石蜡O. 5mL。I周后，将BT-Cry IAh单抗杂交瘤细胞注射于以上预先处理过的BALB本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合式抗虫BT蛋白金标快速检测试剂盒，包括底板、上盖，底板盖入上盖后组成试剂盒；其特征是试剂盒形状是扁平的扇面形盒，且底板上放置有4～8个测试带；上盖设置有4～8个观测窗（1）和4～8个加样孔（2）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张维，陈明，滕超，刘奇，林敏，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：实用新型
国别省市：