【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于荧光共振能量转移领域，特指一种荧光共振能量转移传感器的制备及对CaMV35S的快速检测方法。
技术介绍
转基因作物(Genetically Modified Organisms，简称GMOs)是指利用生物技术，把从动物、植物或微生物等生物体中经鉴定、分离的目的基因插入植物基因组中，改变其遗传组成，产生新的农艺性状的植物。目前转基因检测方法主要是基于外源蛋白靶标的检测、RNA的检测和基于核酸的检测。以外源蛋白为靶标的检测方法是基于抗体对抗原的特异性识别，主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫试纸条法和蛋白质芯片，但是这些方法背景信号高、蛋白质活性难以长久保持、开发特异性抗体的成本高、加工过的转基因产品其蛋白质发生变性而无法进行检测。基于RAN的检测收到RNA容易降解和对实验条件要求较高的限制，从而较难普及。而DNA是相当稳定的分子，适合多数种类样品(原材料、食品配方组成成分、加工产品)的检测，因此，针对DNA的检测方法是目前最主要的GMOs检测法，它通过检测样品中是否含有外源基因成分来判断样品中是否含有转基因成分。目前GMOs所采用的启动子主要为来...
【技术保护点】
一种荧光共振能量转移传感器的制备及对CaMV35S的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、氮杂石墨烯量子点溶液的制备步骤2、银纳米粒子分散液的制备步骤3、氮杂石墨烯量子点‑探针1分散液的制备取步骤1制备的氮杂石墨烯量子点溶液超声分散，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，振荡均匀，加入N‑羟基琥珀酰亚胺溶液，振荡均匀，加入探针1储备液；在室温下反应，得到氮杂石墨烯量子点‑探针1，记作NGQDs‑probe1，之后用乙醇洗涤，离心，最后将NGQDs‑probe1分散于Tris‑HCl缓冲液中，得到NGQDs‑probe1分散液，备用；步骤4、银纳...
【技术特征摘要】
1.一种荧光共振能量转移传感器的制备及对CaMV35S的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、氮杂石墨烯量子点溶液的制备步骤2、银纳米粒子分散液的制备步骤3、氮杂石墨烯量子点-探针1分散液的制备取步骤1制备的氮杂石墨烯量子点溶液超声分散，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，振荡均匀，加入N-羟基琥珀酰亚胺溶液，振荡均匀，加入探针1储备液；在室温下反应，得到氮杂石墨烯量子点-探针1，记作NGQDs-probe1，之后用乙醇洗涤，离心，最后将NGQDs-probe1分散于Tris-HCl缓冲液中，得到NGQDs-probe1分散液，备用；步骤4、银纳米粒子-探针2分散液的制备将探针2储备液加入到步骤2得到的银纳米粒子分散液中室温孵育，振荡反应，然后加入Tris-HCl缓冲液，再加入NaCl溶液调节钠离子浓度，振荡反应；反应结束后，水洗、离心，得到银纳米粒子-探针2，记作AgNPs-probe2，将全部产物Ag-probe2分散在Tris-HCl缓冲液中得到Ag-probe2分散液，备用；步骤5、荧光共振能量转移传感器的构建将CaMV35S目标DNA储备液加入到步骤3制备的NGQDs-probe1溶液中，恒温振荡孵育，再加入步骤4制备的Ag-probe2分散液，加入NaCl溶液调节钠离子浓度，之后持续孵育，最后形成NGQDs-probe1/tDNA/Ag-probe2的三明治夹心结构，得到荧光共振能量转移传感器；步骤6、对CaMV35S目标DNA进行检测，建立标准曲线将CaMV35S目标DNA溶液加入到制备好的NGQDs-probe1分散液中，恒温振荡孵育，再加入制备好的Ag-probe2分散液，加入NaCl溶液调节钠离子浓度，之后持续孵育，从而形成NGQDs-probe1/tDNA/Ag-probe2的三明治夹心结构，采用荧光分光光度计在355nm下测量溶液的荧光强度，并建立荧光淬灭效率与tDNA的标准曲线。2.根据权利要求1所述的一种荧光共振能量转移传感器的制备及对CaMV35S的快速检测方法，其特征在于，步骤3中，所使用的氮杂石墨烯量子点溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶液、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液与入探针1储备液的体积...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雅琪，王坤，蔡健荣，孙力，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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