通过荧光共振能量转移方法原位定量活细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用技术

本发明专利技术公开了一种通过荧光共振能量转移方法确定细胞中第一蛋白与第二蛋白是否存在相互作用的方法。该方法包括：(1)在细胞中表达第一融合蛋白和第二融合蛋白，其中，所述第一融合蛋白包括第一蛋白和作为供体的第一可关闭荧光蛋白，所述第二融合蛋白包括第二蛋白和作为受体的第二可关闭荧光蛋白；(2)在第一可关闭荧光蛋白和第二可关闭荧光蛋白均打开，以及各自单独打开的3种条件下，分别在三种激发光和发射光的条件下进行检测所述细胞的荧光值，以便获得由荧光绝对值组成的数据集。(3)基于所述数据集，确定参数FR数值，并且基于所得到参数FR数值确定所述第一蛋白与所述第二蛋白之间是否存在相互作用。

【技术实现步骤摘要】
通过荧光共振能量转移方法原位定量活细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用
本专利技术涉及生物
，具体地，涉及蛋白质相互作用的方法，更具体地，涉及通过荧光共振能量转移方法确定细胞中第一蛋白与第二蛋白是否存在相互作用的方法。
技术介绍
共振能量转移(RET:resonanceenergytransfer)，1948年由科学家Forster首次发现，因此称为FRET(Forsterresonanceenergytransfer)。同时由于受体通常为荧光分子，由此FRET也常被诠释为荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer)。荧光蛋白FRET在研究活体(活细胞)水平上的分子间相互作用具有高度的特异性和灵敏性，使其成为生命科学领域重要的研究手段和方法。然而，目前常用的FRET方法尚存在各种缺陷，例如，受体光漂白FRET(apFRET)是一种自身对照的FRET测量方法，该方面是目前比较准确的FRET效率定量技术。但它的不足在于其对细胞有很大的光毒性，只能做一次而且时间分辨率很差(通常需要好几分钟)；pcFRET是把光切换荧光基团和apFRET相结合的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过荧光共振能量转移方法确定细胞中第一蛋白与第二蛋白是否存在相互作用的方法，其特征在于，包括：(1)在细胞中表达第一融合蛋白和第二融合蛋白，其中，所述第一融合蛋白包括第一蛋白和作为供体的第一可关闭荧光蛋白，所述第二融合蛋白包括第二蛋白和作为受体的第二可关闭荧光蛋白；(2)在下列三种条件的每一种条件下：(a)打开所述第一可关闭荧光蛋白，打开所述第二可关闭荧光蛋白；(b)打开所述第一可关闭荧光蛋白，关闭所述第二可关闭荧光蛋白；以及(c)关闭所述第一可关闭荧光蛋白，打开所述第二可关闭荧光蛋白，分别在下列三种激发光和发射光的条件下进行检测所述细胞的荧光值：(i)激发光的波长为n1，发射光的波长为n...

【技术特征摘要】
1.一种通过荧光共振能量转移方法确定细胞中第一蛋白与第二蛋白是否存在相互作用的方法，其特征在于，包括：(1)在细胞中表达第一融合蛋白和第二融合蛋白，其中，所述第一融合蛋白包括第一蛋白和作为供体的第一可关闭荧光蛋白，所述第二融合蛋白包括第二蛋白和作为受体的第二可关闭荧光蛋白；(2)在下列三种条件的每一种条件下：(a)打开所述第一可关闭荧光蛋白，打开所述第二可关闭荧光蛋白；(b)打开所述第一可关闭荧光蛋白，关闭所述第二可关闭荧光蛋白；以及(c)关闭所述第一可关闭荧光蛋白，打开所述第二可关闭荧光蛋白，分别在下列三种激发光和发射光的条件下进行检测所述细胞的荧光值：(i)激发光的波长为n1，发射光的波长为n2，其中，n1表示所述第一可关闭荧光蛋白的激发波长，n2表示所述第一可关闭荧光蛋白的接受波长；(ii)激发光的波长为n1，发射光的波长为n4，其中，n4表示所述第二可关闭荧光蛋白的接受波长；以及(iii)激发光的波长为n3，发射光的波长为n4，其中，n3表示所述第二可关闭荧光蛋白的激发波长，以便获得由下列荧光绝对值组成的数据集：Sn1_n4(D&A)、Sn1_n2(D&A)、Sn3_n4(D&A)、Sn1_n4(D_Only)、Sn1_n2(D_Only)、Sn3_n4(D_Only)、Sn1_n4(A_Only)Sn1_n2(A_Only)和Sn3_n4(A_Only)，其中，(D&A)表示所述第一可关闭荧光蛋白和第二可关闭荧光蛋白均被打开，(D_Only)表示所述第一可关闭荧光蛋白被打开，所述第二可关闭荧光蛋白被关闭，(A_Only)表示所述第一可关闭荧光蛋白被关闭，所述第二可关闭荧光蛋白被打开；以及(3)基于所述数据集，确定参数FR数值，并且基于所述参数FR数值确定所述第一蛋白与所述第二蛋白之间是否存在相互作用。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一可关闭荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓冬，唐吉，王颖奇，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11